Лабораторная работа Определение общего холестерина в сыворотке крови по методу Илька
Содержание общего холестерина в сыворотке крови здорового человека колеблется в пределах 150-250 мг/дл (среднее значение 200 мг/дл). На эфиры холестерина с жирными кислотами приходится 60-70% от общего холестерина и 30-40%- на свободный холестерин. В сыворотке крови отношение свободного холестерина к эфирообразующему- величина постоянная. Увеличение содержания холестерина в плазме крови (гиперхолестеринемия) наблюдается при микседеме, менингитах, диабете, атеросклерозе, при некоторых заболеваниях печени. Описана также наследственная гиперхолестеринемия. Снижение содержания холестерина в плазме (гипохолестеринемия) отмечается при хронической сердечной недостаточности, острых инфекционных заболеваниях, острых панкреатитах, гипертиреозе.
Принцип метода. Метод основан на том, что холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот образует окрашенные продукты, интенсивность окраски которых определяется колориметрически.
Ход определения. В сухую пробирку (присутствие следов воды мешает развитию окраски) вносят 2 мл рабочего реактива (реактив отмеривают стеклянным цилиндром) и 0,1 мл негемолизированной сыворотки. Сыворотку добавляют медленно, так чтобы она стекала по стенке пробирки. Пробирку энергично встряхивают 10-12 раз и помещают в термостат при 37˚С на 20 мин. Для приготовления контрольной пробы (одна-две пробы на группу) в сухую пробирку отмеривают 2 мл рабочего реактива. Окраску растворов измеряют на ФЭКе против контроля с красным светофильтром. Содержание холестерина в пробирках определяют по калибровочной кривой.
Калибровочный график для определения концентрации холестерина.
Оформление работы. Записывают принцип метода, результаты колориметрии, расчеты.
Тема 3.4. Регуляция и патология липидного обмена. План изучения темы
Метаболическая реакция окисления и синтеза жирных кислот на уровне гепатоцита.
Гормональная регуляция обмена липидов.
Атеросклероз (причины возникновения, механизм развития, последствия).
Нарушения липидного обмена при сахарном диабете.
Ожирение (причины развития, виды, последствия).
Вопросы для самоконтроля
Перечислите значения жирных кислот для организма.
Укажите нормальную концентрацию жирных кислот в крови.
В каком компартменте клетки происходит β-окисление жирных кислот?
В каком компартменте клетки протекает синтез жирных кислот?
Назовите метаболит, в виде которого жирная кислота проникает из цитоплазмы в митохондрию.
Назовите фермент, катализирующий образование ацил-карнитина.
Назовите метаболиты, регулирующие активность карнитинацилтрансферазы.
Назовите продукт β-окисления жирных кислот.
Назовите субстрат для синтеза жирных кислот.
Назовите фермент, катализирующий превращение ацетил-КоА в малонил-КоА.
Назовите метаболиты, регулирующие активность ацетил-КоА-карбоксилазы.
Какова роль АТФ, АМФ, НАДФН+Н+ в регуляции обмена жирных кислот?
Нарисуйте схему субстратной регуляции окисления и синтеза жирных кислот на уровне гепатоцита.
Какое значение в обмене липидов имеет жировая ткань?
Назовите метаболические процессы обмена липидов, протекающие в адипоцитах.
Дайте определение процессу липогенеза.
Назовите органы, где наиболее интенсивно идет липогенез.
Дайте определение липолизу. Назовите органы, где наиболее интенсивно протекает липолиз.
Назовите метаболиты и коферменты, от концентрации которых зависит липогенез в жировой ткани.
Почему жировая ткань мало использует глицерол для синтеза триацилглицеролов?
Назовите соединения, являющиеся источниками α-глицерофосфата в жировой ткани.
Нарисуйте схему, иллюстрирующую взаимосвязь между обменом липидов и метаболизмом глюкозы в жировой ткани.
Назовите органы, участвующие в регуляции обмена липидов.
Назовите гормон, активирующий процесс синтеза триацилглицеролов в жировых депо.
Назовите гормоны, являющиеся активаторами липазы жировой ткани.
Приведите схему синтеза триацилглицеролов.
Назовите регуляторный фермент синтеза холестерола.
Назовите метаболит, регулирующий активность b-гидрокси-b-метилглутарил-КоА-редуктазы.
Приведите схему субстратной регуляции синтеза холестерола.
Перечислите причины, приводящие к ожирению.
Укажите нарушения липидного обмена, возникающие при ожирении.
При недостатке каких гормонов наблюдается ожирение?
Перечислите биохимические принципы лечения больных с ожирением.
Перечислите причины жировой дистрофии печени. Механизмы развития жировой дистрофии печени.
Механизм действия липотропных веществ.
При каком значении коэффициента атерогенности следует начинать лечение атеросклероза?
В чем заключается генетический дефект при семейной гиперхолестеролемии?
Какие изменения обмена триацилглицеролов и жирных кислот наблюдаются в печени при сахарном диабете?
Объясните механизм возникновения кетонемии и кетонурии при сахарном диабете.
Изменения обмена холестерина наблюдаются при сахарном диабете? Объясните причину этих изменений.
Какие из возможных путей превращения ацетил-КоА тормозятся и какие ускоряются при сахарном диабете? Объясните причину этих изменений в организме.
Составьте схему взаимосвязи углеводного и жирового обменов.