III. План практической работы

1. Провести обнаружение бактериальных структур, являющихся факторами патогенности

а) капсулы бактерий в готовых мазках

Для обнаружения капсул используют метод Бурри-Гинса: на первом этапе тушь, обтекая капсульные бактерии, создает черный или коричневый фон (соответствующий цвету туши) на котором хорошо видны неокрашенные бактерии, которые на втором этапе окрашиваются фуксином в красный цвет, а капсула остается бесцветной. Таким образом, капсулы бактерий хорошо видны на темном фоне в виде прозрачных, белых ореолов вокруг красных бактерий.

б) жгутиков бактерий — зарисовать различные варианты расположения жгутиков (монотрих, лофотрих, амфитрих, перитрих).

По количеству и расположению жгутиков различают монотрихи — один жгутик, перитрихи — жгутики по всей поверхности бактериальной клетки, лофотрихи — пучок жгутиков на одном конце клетки, амфитрихи — единичные жгутики или пучки жгутиков на разных полюсах клетки.

в) корд-фактора у патогенных микобактерий

При культивировании микобактерий на предметных стеклах, погруженных в жидкую среду на основе цитратной крови, микроколонии вирулентных штаммов вырастают в виде переплетающихся кос — тяжей, вследствие наличия корд-фактора. Для их обнаружения стекла окрашивают по методу Циля-Нильсена и проводят иммерсионную микроскопию (метод микрокультивирования по Прайсу).

2. Учесть результаты определения факторов патогенности стафилококка: гемолизина, лецитиназы и плазмокоагулазы.

Гемолизин (экзофермент, по механизму действия мембранотоксин) определяют путем посева испытуемой культуры на чашки Петри с кровяным агаром. Посевы инкубирую при 37°С в течение 18-24 часов. Вокруг колоний гемолитических микроорганизмов образуются зоны полного (β) или неполного, зеленящего (α) гемолиза.

Для обнаружения лецитиназы производят посев исследуемой культуры на питательный агар с лецитином (желточный агар). Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.

Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 2-5 ч. В случае образования фермента происходит свертывание плазмы (образование геля), а в контроле она остается жидкой (золь).

3. Учесть результаты определения токсигенности дифтерийной палочки, зарисовать.

Полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой, накладывают на поверхность прозрачного сывороточного агара в чашке Петри. Культуры дифтерийной палочки сеют бляшками на расстоянии 0,6-0,8 см от полоски фильтровальной бумаги и 1-1,5 см друг от друга. Исследуемые и контрольную (токсигенную) культуры дифтерийной палочки чередуют с одной стороны полоски фильтровальной бумаги, а напротив, с другой стороны полоски сеют одноименные культуры (дубли). Чашку инкубируют при 37^◦С в течение 24-48 часов. Затем проводят учет. Положительной реакция считается при наличии тонкой линии преципитата между полоской фильтровальной бумаги и ростом бактерий в виде бляшки, отрицательной — при её отсутствии. Реакция считается специфичной, если контрольная (токсигенная) культура дала положительный результат.

4. Зарисовать схему этапов проведения биологического метода диагностики инфекционных заболеваний.

5. Заполнить таблицы по теме занятия

6. Решить ситуационные задачи

УИРС. Учесть результаты чувствительности микрофлоры зева к антибактериальным препаратам, заполнить таблицу.