1) Титрование комплемента

Из коммерческого препарата комплемента, представляющего собой лиофилизированную сыворотку крови морской свинки, готовят разведения 1:10, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35 и 1:40. К 0,2 мл каждого разведения комплемента добавляют по 0,4 мл гемолитической системы (смесь равных объемов 3% суспензии эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика в тройном титре после их инкубации в течение 30 минут). После инкубации пробирок 30 минут при 37ºС определяют титр комплемента — наибольшее его разведение, которое вызывает полный лизис эритроцитов в гемолитической системе. В реакции РСК используют рабочую дозу комплемента, которая на 25% больше, чем титр комплемента.

2) Постановка основного опыта рск

Если в пробирке на первой стадии присутствуют специфические антитела (в исследуемой сыворотке) и антигены, то они образуют комплекс, который связывает комплемент. При добавлении на второй стадии гемолитической системы гемолиз эритроцитов не может произойти из-за отсутствия свободного комплемента, и они образуют осадок на дне пробирки. Напротив, если из-за отсутствия специфических антител в исследуемой сыворотке иммунный комплекс не образуется, то на первой стадии реакции связывания комплемента не происходит и он взаимодействует с иммунными комплексами в гемолитической системе, вызывая гемолиз эритроцитов. Таким образом, гемолитическая система является индикаторной, то есть показывающей произошло ли связывание комплемента на первой стадии, а это происходит при наличии специфических антител в исследуемой сыворотке. В связи с этим отрицательным результатом РСК считают наличие гемолиза, положительным — отсутствие гемолиза. При этом результат оценивается как резко положительный (++++) при полном отсутствии гемолиза, положительным (+++) при 25% гемолизе, слабо положительным (++) при 50% гемолизе и сомнительным (+) при 75% гемолизе.

Реакция считается специфичной при соответствии результатов во всех контрольных пробирках ожидаемым согласно внесенным в них ингредиентам. При положительном результате в рабочей пробирке, содержащей исследуемую сыворотку в разведении 1:80 (соответствующим диагностическому титру при сыпном тифе) выдается заключение о наличии у больного данного заболевания.

IV. Примеры ситуационных задач

Задача 1

При постановке РП для определения токсигенности дифтерийной палочки культура Corynebacterium diphtheriae, выделенная от больного А продемонстрировала образование линии преципитации, а от больного Б  нет (контроли  верные). Дайте заключение о токсигенности выделенных культур дифтерийных палочек.

Задача 2

При постановке реакции кольцепреципитации по Асколи в диагностике сибирской язвы получены следующие результаты: наличие преципитата в виде белого кольца появился на границе между компонентами в 1) пробирке с термоэкстрактом и специфической сывороткой, 2) в пробирке с специфическими диагностикумом и сывороткой, 3) в пробирке с термоэкстрактом и нормальной сывороткой; отсутствие преципитата в пробирке с изотоническим раствором хлорида натрия и специфической сывороткой. Дайте оценку специфичности реакции и заключение о наличии антигенов возбудителя сибирской язвы в исследуемом материале.