Граф логічної структури мікробіологічного дослідження віл-інфекції

Матеріал для дослідження: кров, сироватка.

Серологічна діагностика.

1 етап - виявлення антитіл за допомогою ІФА (трикратний повтор).

2 етап – виявлення антитіл до певних вірусних білків за допомогою імуноблотінгу.

Молекулярно-генетичний метод.

Виявлення провірусу в лімфоцитах, вірусних нуклеїнових кислот в патологічному матеріалі за допомогою ЛПР.

Вірусологічна діагностика.

1 етап – зараження культур клітин Т-лімфоцитів.

2 етап – ідентифікація вірусів за допомогою ІФА, РІФ.

5. Практичні роботи, які виконують на занятті.

   0. Ознайомитись з принципом постановки імуноферментного методу з метою виявлення специфічних протиВІЛ-антитіл в сироватці крові хворого

Для відтворення принципу ІФА на занятті в якості твердофазного носія використовують планшетки з адсорбованими на дні луночок антигенами. В луночки вносять по одній краплі досліджуваних сироваток і вміщують планшетки в термостат на 30 хвилин (37С). Потім промивають буферним розчином і вносять мічені ферментом (пероксидазою хрону) антивидові (антиімуноглобулінові) сироватки. Планшети ставлять в термостат на 30-40 хвилин при температурі 37С. Промивають луночки буферним розчином, вносять по краплі перекису водню та ортофенілдіаміну (ОФД). Вміщують в термостат до появи жовтого забарвлення в луночці з контрольною позитивною сироваткою. Інтенсивність забарвлення залежить від кількості приєднаного до твердої фази ензиму і відповідає кількості вірусспецифічних антитіл в досліджуваній сироватці. Схему реакції замалювати.

6. Рекомендована література.

   0. Література основна.

Медична мікробіологія, вірусологія та імунологія : підручник для студ. вищ. мед. навч. заклад / За редакцією В.П.Широбокова. – Вінниця : Нова Книга, 2011. – 563-574, 632-638.

К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, К., 1982. – С. 385-391.

С.І.Климнюк та співавт. Практична мікробіологія. Тернопіль, 2004. – С. 375-379.

7.2. Література додаткова.

Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби. Словник/ За ред Г.К.Палія, В.Г.Палія. – Київ: Здоров'я, 2004. – С. 58, 122, 110-111.

І.С. Гайдаш, В.В. Флегонтова. Медична вірологія. Луганськ, 2002. – С. 195-213.

8. Матеріали для самоконтролю.

1) При перевірці крові донорів на станції переливання крові, в сироватці одного з них виявлені антитіла до вірусу імунодефіциту людини. Який метод рекомендується для підтвердження діагнозу ВІЛ-інфекції?

A Імунофлюоресценції

B Електронної мікроскопії

C Імуноферментного аналізу

D Вестернблоту (імуноблотингу)

E Радіоімунного аналізу

2) Після лабораторного обстеження хворого з часто рецидивуючими вірусними, бактеріальними та грибковими опортуністичними інфекціями виставлений діагноз «ВІЛ - інфекція». Результати якого дослідження дозволили поставити такий діагноз?

A Реакція гальмування гемаглютинації

B Реакція зв’язування комплементу

C Реакція преципітації в гелі

D Імуноферментний аналіз.

E Реакція пасивної гемаглютинації

3) У пацієнтки 20 років встановлено діагноз - СНІД. Які популяції клітин найбільш чутливі до вірусу імунодефіциту людини?

A Гепатоцити

B Т-хелпери

C Ендотеліоцити

D Епітеліоцити

E В-лімфоцити

4) Відомо, що вірус імунодефіциту людини належить до родини Ретровірусів. Вкажіть основну ознаку, що характеризує дану родину.

A Наявність ферменту зворотної транскриптази

B Містять мінус-РНК

C Прості віруси, що вражають тільки людину

D Нуклеїнова кислота не інтегрує в геном хазяїна

E Реакція імуноферментного аналізу для виявлення антигенів

6) У центр анонімного обстеження на ВІЛ-інфекцію звернулася молодий чоловік, який мав статевий контакт з гомосексуалістом. Вкажіть основний метод лабораторної діагностики цієї інфекції.

A Реакція коаглютинації

B Радіоімунний аналіз

C Реакція пасивної гемаглютинації

D Імуноферментний аналіз

E Імунофлуоресцентний метод

Ситуаційна задача. В терапевтичне відділення лікарні госпіталізували хворого з пневмонією. Останні півроку він часто хворіє: спостерігається хронічний кандидоз, періодично загострюється фурункульоз та оперізуючий герпес. Хворий дуже схуд. Протягом 10 років мав гомосексуальні зв´язки. Результати лабораторного дослідження: попередній аналіз на ВІЛ-інфекцію позитивний (імуноферментний аналіз), встановлена пневмоцистна природа пневмонії. Попередній діагноз: «ВІЛ-інфекція».

Завдання.

1.Вкажіть таксономічне положення ВІЛ, опишіть його ультраструктуру.

2. Охарактеризуйте антигенну будову ВІЛ.

3. Як відбувається зараження ВІЛ-інфекцією?

4. Назвіть методи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції.

5. Назвіть принципи лікування ВІЛ-інфекції.

Автор - доцент А.В.Крижановська