Литература

1. Страйер Л. Биохимия. В 3-х т. Т 1,2,3. М.: Мир, 1985.

2. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Просвещение, 1987.

3. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. В 2-х т. Т 1,2. М.: Мир, 1993.

4. Горячковский А.М. Справочное пособие по клинической биохимии. Одесса: ОКФА, 1994.

5. Степанов В.М. Молекулярная биология: структура и функции белков. Под ред. А.С. Спирина. М.: Высшая школа, 1996.

6. Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1998.

7. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия. М.: Мир, 2000.

8. Зайчик А.Щ., Чурилов Л.П. Основы патохимии. Санкт-Петербург: ЭЛБИ-СПб, 2000.

9. Чиркин А.А. Практикум по биохимии. Мн.: Новое знание, 2002.

Ход работы

Тема: химические свойства углеводов Редуцирующая способность альдоз и некоторых дисахаридов Реакция «серебряного зеркала»

1. В две пробирки вносят по 3 капли 0.2 М раствора AgNO₃ и 5 капель 2 М NaOH.

2. Добавляют по каплям 2 М раствор NH₄OH до полного растворения образовавшегося осадка.

3. Затем в первую пробирку приливают 5 капель 0.5% раствора глюкозы, во вторую – столько же 0.5% раствора фруктозы.

4. Обе пробирки подогревают на водяной бане.

5. Отмечают появление либо черного осадка, либо блестящего зеркального налета на стенках одной из пробирок (последнее наблюдается, если стенки пробирок химически чистые – вымыты с помощью «хромовой смеси»).

6. Делают выводы о восстанавливающей способности глюкозы и фруктозы.

Реакция Троммера

1. В четыре пробирки наливают по 2 мл 2% раствора глюкозы, фруктозы, сахарозы и лактозы (мальтозы), соответственно.

2. К ним приливают по 2 мл 10% раствора NaOH.

3. Далее в каждую пробирку добавляют по каплям 5% раствор CuSO₄ до появления неисчезающей мути Cu(OH)₂.

4. Затем пробирки нагревают до появления окраски.

5. Делают выводы о восстанавливающей способности данных моно- и дисахаридов.

Реакция с фелинговой жидкостью

1. В четыре пробирки наливают по 2 мл 2% раствора глюкозы, фруктозы, сахарозы и лактозы (мальтозы), соответственно.

2. К этим растворам приливают по 2 мл фелинговой жидкости.

3. Далее пробирки нагревают до кипения.

4. Отмечают появление окраски.

5. Делают выводы о восстанавливающей способности данных моно- и дисахаридов.

6. Сравнивают полученные результаты с предыдущей реакцией.

Реакция Ниландера

1. В четыре пробирки наливают по 2 мл 2% раствора глюкозы, фруктозы, сахарозы и лактозы (мальтозы), соответственно.

2. К этим растворам приливают по 2 мл реактива Ниландера.

3. Пробирки осторожно кипятят около 2 мин.

4. Отмечают появление окраски.

5. Делают выводы о восстанавливающей способности данных моно- и дисахаридов.

Реакция Барфеда

1. В две пробирки наливают по 5 мл реактива Барфеда.

2. В первую пробирку добавляют 1 мл 2% раствора глюкозы, а во вторую – 2% раствора лактозы (мальтозы).

3. Обе пробирки нагревают на водяной бане в течение 10 мин.

4. Отмечают появление окраски.

5. Делают выводы о восстанавливающей способности редуцирующих моно- и дисахаридов в нейтральной и кислой средах.

Метиленовая проба

1. В три пробирки наливают по 1 мл 2% раствора глюкозы, сахарозы и лактозы (мальтозы), соответственно.

2. В каждую пробирку прибавляют по 5 капель 5% водного раствора метиламинохлорида.

3. Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 10 мин.

4. Далее смеси сильно подщелачивают 7 каплями 20% раствора NaOH.

5. Отмечают появление окраски и делают выводы.

Доказательство существования моносахаридов в растворе в циклической форме

Реакция с фуксиносернистой кислотой

1. В три пробирки наливают по 1 мл 2% раствора глюкозы, фруктозы и формальдегида, соответственно.

2. В каждую пробирку прибавляют по 0,5 мл раствора фуксиносернистой кислоты.

3. Содержимое пробирок встряхивают.

4. Отмечают появление окраски и делают выводы.

Тема: МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ УГЛЕВОДОВ

Качественные реакции на углеводы

Проба на углеводы с нафторезорцином (реакция Толленса)

1. В разные пробирки наливают по 3 мл 2% растворов различных углеводов.

2. В каждую пробирку добавляют по 0.5 мл 1% спиртового раствора нафторезорцина и такой же объем концентрированной соляной кислоты.

3. Смеси осторожно нагревают до кипения, кипятят 1 мин и затем охлаждают.

4. В каждую пробирку добавляют по 1 мл эфира и содержимое пробирок взбалтывают.

5. Отмечают различное окрашивание эфирного слоя и делают выводы.

Реакция на углеводы с -нафтолом

1. К 10-ти каплям 2% раствора глюкозы прибавляют 4 капли -нафтола.

2. Осторожно наслаивают из пипетки 1 мл концентрированной серной кислоты.

3. Отмечают появление окрашенного кольца на границе двух жидкостей и делают выводы.

Реакция на углеводы с антроном

1. К 5-ти каплям 2% растворов глюкозы и фруктозы прибавляют по 8 капель раствора антрона в концентрированной серной кислоте.

2. Пробирки встряхивают и оставляют на 20 минут при комнатной температуре.

3. Отмечают появление окраски и делают выводы.

Проба на кетозы с резорцином

1. В две пробирки наливают по 2 мл 2% раствора фруктозы и глюкозы, соответственно.

2. Далее в каждую пробирку добавляют по 3 капли реактива Селиванова и нагревают до кипения.

3. Наблюдают окрашивание и делают выводы.

Реакция на пентозы

Проба с анилином

1. К 1 мл 2% раствора рибозы (ксилозы) добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты.

2. Смачивают полоску фильтровальной бумаги раствором анилина.

3. Кипятят содержимое пробирки, держа бумажку, смоченную анилином, в парах.

4. Наблюдают окрашивание фильтровальной бумаги и делают выводы.

Проба с орцином

1. К 1 мл 2% раствора рибозы (ксилозы) приливают 1 мл орцинового реактива.

2. Смесь нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин.

3. Отмечают появление окраски и делают выводы.

Проба с тимолом

1. К 1 мл 2% раствора рибозы (ксилозы) добавляют 3 капли 1% спиртового раствора тимола.

2. Затем по стенке осторожно наслаивают 1 мл концентрированной серной кислоты.

3. Отмечают появление окрашенного кольца на границе двух жидкостей и делают выводы.

Реакция на дезоксипентозы с дифениламином

1. К 1 мл 2% раствора дезоксирибозы добавляют 2 мл раствора дифениламина.

2. Реакционную смесь кипятят в течение 10 мин.

3. Наблюдают окрашивание и делают выводы.

Реакция на сахарозу

1. К 2 мл 2% раствора сахарозы приливают 1 мл 5% раствора NaOH.

2. Далее к смеси добавляют 5 капель 2% раствора Co(NO₃)₂.

3. Наблюдают окрашивание и делают выводы.

Реакция Мальфатти на лактозу

1. К 1 мл 2% раствора лактозы прибавляют 2 капли 10% раствора NaOH.

2. Далее к смеси приливают 0,5 мл концентрированного NH₄OH.

3. Пробирку помещают в водяную баню на 15 мин.

4. Наблюдают окрашивание и делают выводы.

Реакция на полисахариды (с раствором Люголя)

1. К 1 мл 0.25% раствора полисахарида (крахмала) приливают 2 капли реактива Люголя.

2. Наблюдают появление окраски и делают выводы.

Разделение углеводов методом бумажной хроматографии

1. На полоске хроматографической бумаги отмечают линию старта (1-1,5 см от края бумаги), а так же места нанесения стандартных растворов углеводов и анализируемой смеси.

2. Микропипеткой наносят на хроматографическую бумагу по 2л каждого раствора. Нанесение проводят в несколько приемов, следя за тем, чтобы пятно раствора не растекалось более чем на 3 мм. Каждую последующую порцию раствора наносят после полного высыхания предыдущей, что определяют по исчезновению просвечивания бумаги в точке нанесения.

3. Места нанесения образцов высушивают.

4. Параллельно готовят растворитель изопропанол : вода в соотношении 4:1 объемом 20 мл.

5. Растворитель заливают в хроматографическую камеру, герметично закрывают и оставляют на некоторое время для насыщения камеры парами растворителя.

6. Бумажную полоску помещают в хроматографическую камеру. Хроматографическое разделение заканчивают, когда фронт растворителя переместится к противоположному концу полоски бумаги (2-3 см от края).

7. Хроматограмму высушивают.

8. Углеводы идентифицируют путем опрыскивания хроматограммы 1% водным раствором KMnO₄, содержащим 2% Na₂CO₃, и последующего высушивания полоски бумаги при комнатной температуре.

9. Спиртосахара, гликозиды, восстанавливающие, невосстанавливающие сахара дают желтые пятна на пурпурном фоне, а затем (со временем) серые пятна на коричневом фоне.

10. Определяют значения R_f стандартов углеводов и углеводов в анализируемой смеси. Идентифицируют углеводы, содержащиеся в анализируемой смеси.