Изучение эффективности протекания гликолиза в миоцитах

Об эффективности протекания гликолиза в тканях можно судить либо по расходу исходного субстрата глюкозы, либо по накоплению конечного продукта – молочной кислоты.

Принципы методов Определение концентрации глюкозы глюкозооксидазным методом

Глюкозооксидазный (ферментативный) метод основан на окислении глюкозы до глюконовой кислоты под действием глюкозооксидазы с образованием перекиси водорода:

Образующаяся в этой реакции перекись водорода при участии пероксидазы окисляет субстрат (либо о-толидин, либо о-дианизидин, в зависимости от комплектации тест-набора) с образованием окрашенного продукта, определяемого спектрофотометрически.

Определение молочной кислоты с п-оксидифенилом

Из молочной кислоты в присутствии серной, фосфорной кислот и солей меди образуется уксусный альдегид, который, реагируя с п-оксидифенилом, дает продукт фенольной конденсации – 1,1-ди-(оксидифенил)-этан, имеющий фиолетовую окраску.

Интенсивность развивающейся окраски измеряют спектрофотометрически.

Контрольные вопросы

1. Энергетический обмен: стадии катаболизма углеводов (подготовительная стадия, гликолиз, дыхание) и места их локализации.

2. Макроэрги (нуклеозидтрифосфаты, нуклеозиддифосфаты) и сверхмакроэрги (1,3-дифосфо-глицерат, фосфоенолпируват, креатин-фосфат), их строение и физиологическая роль.

3. Гликолиз: основная характеристика, энергетический баланс.

4. Первая стадия гликолиза: реакции, характеристика.

5. Вторая стадия стадия гликолиза: реакции, характеристика.

6. Основные принципы регуляции гликолиза.

7. Катаболизм важнейших моносахаридов и дисахаридов.

8. Вовлечение гликогена в гликолитический путь расщепления.

9. Катаболизм углеводов у молочнокислых бактерий и дрожжей.

10. Пентозофосфатный путь: основная характеристика, суммарный баланс данного метаболического пути.

11. Окислительная фаза пентозофосфатного пути.

12. Неокислительная фаза пентозофосфатного пути.

13. Дыхание: основная характеристика, энергетический баланс.

14. Строение и функционирование пируватдегидрогеназного комплекса.

15. Цикл Кребса: основная характеристика, энергетический баланс.

16. Цикл Кребса: описание реакций. Стадии образования восстановительных эквивалентов.

17. Окислительное фосфорилирование: основная характеристика. Ферменты дыхательной цепи.

18. Определение молочной кислоты с п-оксидифенилом.

19. Принципы получения мышечного гомогената и мышечного экстракта.

20. Принципы проведения опыта по изучению ингибирующего действия АТР на гликолиз. Полученные и теоретические результаты, их обоснование.

21. Принципы проведения опыта по изучению ингибирующего действия цитрата на гликолиз. Полученные и теоретические результаты, их обоснование.

22. Принципы проведения опыта по изучению стимулирующего действия АМР на гликолиз. Полученные и теоретические результаты, их обоснование.

23. Принципы проведения опыта по изучению комплексного влияния цитрата и АМР на гликолиз. Полученные и теоретические результаты, их обоснование.

Литература

1. Страйер Л. Биохимия. В 3-х т. Т 1,2,3. М.: Мир, 1985.

2. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Просвещение, 1987.

3. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. В 2-х т. Т 1,2. М.: Мир, 1993.

4. Горячковский А.М. Справочное пособие по клинической биохимии. Одесса: ОКФА, 1994.

5. Степанов В.М. Молекулярная биология: структура и функции белков. Под ред. А.С. Спирина. М.: Высшая школа, 1996.

6. Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1998.

7. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия. М.: Мир, 2000.

8. Зайчик А.Щ., Чурилов Л.П. Основы патохимии. Санкт-Петербург: ЭЛБИ-СПб, 2000.

9. Чиркин А.А. Практикум по биохимии. Мн.: Новое знание, 2002.

Ход работы