10. Зберiгання та транспортування видiлених культур

Для нетривалого зберігання (до 7-10 днів) пневмокок та H.influenzae сіють на скошений ША, термостатують при (371)⁰С протягом 18-24 годин і зберігають при (6±2)^оС. Менінгокок також відсівають на скошений ША, термостатують у такому ж режимі, але зберігати його слід при кімнатній температурі.

N.meningitidis, S.pneumoniae можна зберiгати протягом 5-6 тижнiв методом посiву в стовпчики з оптимальним для кожного мiкроорганiзма поживним середовищем: для N.meningitidis - сироватковий, для S.pneumoniae - кров'яний агари. Культуру N.meningitidis засiвають уколом, термостатують при температурi (371)⁰С. Через 24 години, при наявності росту культури по уколу та у виглядi бляшки на поверхнi середовища, в пробiрку наливають 1,5-2см³ стерильного вазелiнового масла i в такому станi зберiгають, транспортують, не допускаючи охолодження. Засiяний матерiал iз однiєї пробiрки можна використовувати декiлька разiв для пересiвiв.

Зберiгання культур менiнгокока в лабораторних умовах можна здiйснювати таким способом. Культуру засiвають на чашку з агаром, що містить 20% нормальної кiнської сироватки, ставлять для пiдрощування на 3-4 години в термостат при температурi (371⁰С), пiсля чого ставлять в холодильник (62)⁰С на 1-7 днiв. Вiдновлення культивування штамiв здiйснюється шляхом перенесення цих же посiвiв знову в термостат при температурi (371)⁰С на 18-20 годин. Такий спосiб зберiгання виключає багаторазовий пересiв культур, не потребує пiдвищеного вмiсту СО₂ в атмосферi, дозволяє зберiгати культури, первинний посiв яких утворюється з однiєї або декiлькох колонiй, а також зберегти капсулу та стабiльнiсть аглютинацiйних властивостей.

Для зберігання культури пневмокока, її переносять повною петлею на скошений кров'яний агар, i витримують, без попередньої iнкубацiї протягом 4-6 днiв при температурi (4-22)⁰С. Для одержання свiжої культури з поверхнi засiяного агару роблять пересiв на свiже середовище такого ж складу, пiсля чого ставлять в термостат на добу при температурi (371)⁰С.

H.influenzae також швидко відмирає. Життєздатність гемофiлiв можна продовжити до 1 місяця, для чого слід зробити густий посів на скошений «шоколадний» агар i після добової інкубації створити повну герметизацію. Таку культуру для пересіву використовують тільки одноразово.

Для тривалого зберігання штамів основних збудників менінгітів можна використовувати ліофілізацію культур або їх заморожування. Для останнього необхідно виростити мікроорганізм на відповідному середовищі (H.influenzae – на ША, а S.pneumoniae та N.meningitidis – на КА або ША) протягом 18-24 годин при температурі (371)^о С у ємкості з підвищеним вмістом СО₂. Переконатись у чистоті культури, зібрати вирощену культуру у кріофлакон з 1 см³ гліцеринового бульйону, промаркувати і заморозити при –20^оС або - 70^оС. При цьому слід пам’ятати, що не можна допускати розморожування та повторного заморожування бульйону з культурою, оскільки штам загине. Якщо бульйон розтане, слід рекультивувати і заморозити вирощену культуру знову.