Застосування реакцiї непрямої гемаглютинацiї для виявлення протименiнгококових антитiл

1. Показання до проведення серологiчних дослiджень

Реакцію непрямої гемаглютинацiї (РНГА) з менiнгококовими еритроцитарними дiагностикумами серогруп А, В, С використовують у таких випадках:

а)як додатковий метод дiагностики менiнгококової iнфекцiї. Обов’язковою вимогою є дослiдження сироваток кровi хворих, якi взято у рiзнi терміни вiд початку захворювання, тобто у динаміці. Оптимальним варiантом є обстеження усiх осiб (скринiнг) з пiдозрою на генералiзованi форми менiнгококової iнфекцiї (ГФМI), що дозволить iстотно збiльшити вiдсоток лабораторного пiдтвердження ГФМI (у дорослих - до 80%, у дiтей до 60% випадкiв);

б)для ретроспективного виявлення локалiзованих форм менiнгококової iнфекцiї в осередках захворювання;

в)при здiйсненнi iмуно-епiдемiологiчних дослiджень серед населення з метою визначення серонегативних контингентiв ;

г)при оцiнцi iмунологiчної ефективностi протименiнгококової вакцинацiї.

2. Реакцiя непрямої гемаглютинацiї (рнга) з еритроцитарними менiнгококовими дiагностикумами

РНГА ставлять як макро- так i мiкро-методом; в останньому випадку використовують мiкротитратори "Такачi" або багатоканальні дозатори. Вiдмiнностi мiж цими методами полягають лише в об’ємах використовуваних iнгредiєнтiв та термінах облiку результатiв реакцiї. При макрометодi реагуюча сумiш у кожнiй лунці складається iз 0,5см³ вiдповiдного розведення сироватки кровi та 0,25см³ дiагностикуму. При мікрометоді об’єми зменшуються: 0,05см³ та 0,025см³ відповідно.

Облiк результатiв дослiдження у мікрометоді здiйснюють через 2 години iнкубацiї у термостатi, при макрометодi iнколи необхiдна додаткова експозицiя протягом 1-2 години при кiмнатнiй температурi.

Постановка здійснюється згідно інструкції до застосування діагностикумів.

2. Забiр кровi

Для серологiчних дослiджень кров вiд хворого на МI або пiдозрiлого на цю iнфекцiю забирають iз лiктьової вени з додержанням звичайних правил асептики, при масових серологiчних дослiдженнях кров беруть iз пальця.

Пiсля утворення згустку одержану сироватку вiдсмоктують стерильною пiпеткою у стерильний посуд (пробiрки, ампули). Зберiгають у холодильнику при (62)⁰ С. У реакцiї дослiджують сироватки без ознак проростання.

Перед постановою РНГА сироватки розводять у спiввiдношеннi 1:5 вихiдним буфером (ЗФР). Титрування сироваток кровi здiйснюють у стабiлiзуючому буферi.

Робота з сироваткою проводиться з дотриманням вимог біологічної безпеки.

4. Рекомендованi терміни, кратнiсть обстеження та трактування результатiв серологiчних досліджень

При виборi оптимальних термінів та кратностi обстеження хворих на ГФМI i для правильного трактування результатiв серологiчних досліджень потрiбно взяти до уваги ряд факторiв, що впливають на рiвень антитiл: вiк хворого, преморбiдний фон, клiнiчна форма, тяжкiсть i перiод хвороби, супутнi захворювання, серологiчнi особливостi збудника. При менiнгококовiй iнфекцiї, як i при iнших iнфекцiйних захворюваннях, правильна оцiнка серологiчних дослiджень можлива тiльки при їх співставленнi з епiдемiологiчними та клiнiчними даними.

Оптимальнi терміни взяття кровi у хворих - першi днi хвороби (1-3 дні), другий, третiй та наступнi тижнi хвороби. Першу сироватку кровi потрiбно брати вiдразу при госпiталiзацiї хворого, наступнi - через 7-10 днiв.