Приготування поживних середовищ та індикаторів

Загальні вимоги до виготовлення поживних середовищ викладені в ГОСТ 10444.1 - 84.

З метою підвищення достовірності та якості досліджень перевагу слід віддавати поживним середовищам та діагностичним препаратам промислового виробництва.

У випадку відсутності готових комерційних поживних середовищ, середовища готуються за пропонованою рецептурою.

Згідно сучасних вимог для приготування поживних середовищ замість дистильованої води використовують воду очищену.

Дату приготування та результати контролю якості поживних середовищ реєструють в “Журналі приготування та контролю поживних середовищ” (Ф№256/0).

1.Сироватковий агар

За основу використовують комерційний МПА, рН - 7,4, амiнний азот 150-180 мг/см³. Як основу можна використовувати середовище АГВ. До 80 см³ розплавленої та охолодженої до температури 50⁰ С агарової основи додають 20см³ iнактивованої при температурi 56⁰С протягом 30 хвилин сироватки, консервованої хлороформом або без консерванту (при iнактивацiї сироватки консервант зникає). Пiсля перемiшування середовище розливають в чашки. Середовище придатне до вживання протягом 48 годин при зберiганнi його в холодильнику. Перед посiвом чашки, що зберiгалися в холодильнику, пiдiгрiваються до температури (371)⁰С.

Для поліпшення росту менінгокока можна разом з сироваткою додавати 2 см³ 40% розчину стерильної глюкози. В цьому випадку для приготування агарової основи треба збільшити наважку для 100 см³ дистильованої води на 0,5 г сухого середовища (МПА або АГВ).

1.1.Сироватковий агар з ристомiцином

До 80см³ розплавленого та охолодженого агарового середовища додають 20 см³ сироватки та 0,1см³ розчину ристомiцину, що мiстить 20 000 МО/см³ (залишкова концентрацiя антибiотика 20 МО/см³ поживного середовища). Препарат розводять стерильним фiзiологiчним розчином до робочої концентрацiї, розливають у стерильні пенiцилiнові флакони або центрифужні пробiрки пiд ватними або гумовими пробками та заморожують в морозильнiй камерi до використання. Кiлькiсть робочого розчину у флаконах або пробiрках залежить вiд потреби лабораторiї.

В разi необхiдностi розчин розморожують та додають до середовища. Наприклад, у флакон, що мiстить 100 000 МО ристомiцину, вносять 5см³ стерильного фiзiологiчного розчину. Одержане розведення препарату є робочим. Його зручно розлити по 0,5см³ та заморозити. В такому станi препарат може зберiгатися декiлька мiсяцiв.

1.2.Сироватковий агар з лiнкомiцином

До 80 см³ розплавленого та охолодженого агару додають 20 см³ сироватки та 0,5 см³ розчину лiнкомiцину в концентрацiї 1000 мкг/см³. Залишкова концентрацiя антибiотика в середовищi - 5 мкг/см³ поживного середовища. Розчин лiнкомiцину зберiгають при температурi (62)⁰С протягом 6 мiсяцiв.

2.Кров'яний агар

Кров'яний агар готують на тих же поживних основах, що i сироватковий агар. До розплавленого та охолодженого до температури 50⁰ С агару додають 5% дефiбринованої кровi (барана, кроля або коня), ретельно змiшують, уникаючи утворення пiни та пузирів, i розливають в чашки Петрi.

Кров людини для приготування середовища використовувати не бажано!