3."Шоколадний" агар (кип’ячений)

Для приготування може бути використана кров барана, кролика або коня. Кров iнших тварин може мiстити Н-антифактор, який необхiдно iнактивувати шляхом кип'ятiння. Кров людини для приготування середовища не придатна!

Це середовище можна готувати декількома способами:

1). Поживний агар з рН 7,3 - 7,4 розплавляють, охолоджують до температури 50⁰С. Стерильно додають 10 - 15% нативної або дефiбринованої кровi. Ретельно перемішують i ставлять на водяну баню при температурі 100⁰С на 5 хвилин. Вдруге перемішують i ставлять на водяну баню при температурi 100⁰С на 2 - 3 хвилини. Знову ретельно перемiшують i залишають у водяній бані при 70 - 80⁰С на одну годину. Після цього охолоджують до 45-50⁰С , додають 5% дріжджового екстракту або стимулятор росту типу “Полівітекс”, “Ізовіталекс”, ретельно розмішують і розливають в чашки Петрi.

2) Поживний агар з рН 7,3 - 7,4 розплавляють, охолоджують до температури 50⁰С. Стерильно додають 5% нативної або дефiбринованої кровi. Ретельно перемішують i ставлять на водяну баню при температурі 100⁰С на 3 хвилини. Вдруге додають 5% крові, перемішують i ставлять на водяну баню при температурi 100⁰С на 3 хвилини. Після цього охолоджують до 45-50⁰С , додають 5% дріжджового екстракту або стимулятор росту типу “Полівітекс”, “Ізовіталекс”, ретельно розмішують і розливають в чашки Петрi.

3.1.Шоколадний бульйон

Приготування середовища аналогічне такому для шоколадного агару, але основою його служить поживний бульйон.

За прописом на етикетці готують поживний бульйон. До нього додають 10% крові і 5% дріжджового екстракту. Прогрівають так як і в попередньому рецепті.

3.2.Середовище Левінталя

До розплавленої та охолодженої до 70⁰ С агарової основи, виготовленої на комерційному МПА, додають 10% дефібринованої крові. Ретельно перемішують і ставлять на вогонь увесь час струшуючи. При появі піни агар знімають з вогню. Повторюють таке кип’ятіння 3 рази. Відстоюють, прозору частину розливають стерильно у чашки Петрі або флакони.

Інший спосіб приготування цього середовища запропонував А.В.Шапіро. Після внесення крові середовище фільтрують через 4 шари марлі у сушильній шафі при 80^оС протягом 30 хв. та розливають у чашки Петрі (пробірки).

4.Жовчно - сироватковий агар

При відсутності дисків з жовчу можна користуватись жовчно-сироватковим агаром.

5,0 г сухої бичачої жовчi розчиняють в 100 см³ дистильованої води, фiльтрують через ватно-марлевий фiльтр, доводять рН до 7,2-7,4, стерилiзують при (1122)⁰С - 30 хв. До 80 см³ розплавленого та охолодженого до температури 50⁰С поживного агару додають 4 см³ стерильного розчину жовчi, перемiшують, додають 20 см³ сироватки тварин, знову добре перемiшують i розливають у чашки Петрi. Залишкова концентрацiя жовчi в середовищi - 0,2%. Посiв культур нейсерiй проводять штрихами на сектори чашки.

5. Середовища з вуглеводами для визначення сахаролітичних властивостей нейсерій

До 75 см³ агарової основи, якою може служити МПА, додають 0,9 г одного з вуглеводів (глюкоза, мальтоза, сахароза, левульоза або D-фруктоза) і 3,9 см³ розчину індикатора фенолового червоного. Агар стерилізують при (1122)⁰С - 30 хв. однократно. Перед вживанням середовище, що містить вуглеводи, розтоплюють на водяній бані, охолоджують до температури 48-50⁰С, додають 20% сироватки крові великої рогатої худоби і розливають у чашки. На одну чашку можна висіяти 6-8 культур (секторами). Таким чином, кожна культура засівається на 4 чашки з різноманітними вуглеводами.

Можна приготовані середовища розлити у пробірки по 6 см³ і скосити їх. Посів робити на скошену поверхню.

Облік результатів проводять через 24 години інкубації в термостаті. При розкладанні вуглеводу з утворенням кислоти, червоний колір середовища в секторі цієї культури змінюється на яскраво жовтий. Із вказаних вуглеводів менінгокок розщеплює з утворенням кислоти глюкозу та мальтозу. При відсутності розщеплення зберігається вихідний червоний колір середовища.