- •Методичнi вказівки з мiкробiологiчної дiагностики менiнгококової iнфекцiї та гнійних бактерiальних менiнгiтiв вступ
- •1. Показання до лабораторного бактеріологічного обстеження.
- •2.Характеристика основних збудників менінгітів
- •2.1.Мікроорганізми роду Neisseriа
- •2.2.Мікроорганізми роду Haemophilus
- •2.3.Пневмококи
- •3. Взяття і доставка матеріалу для лабораторного дослідження
- •Первинні середовища, необхідні для первинного посіву матеріалу
- •4. Порядок проведення досліджень
- •Властивості основних збудників гбм, якi враховуються через 24 години вiд початку бактерiологiчного дослiдження ліквору або крові
- •Диференцiальні властивостi стрептококiв та ентерококів якi викликають менiнгiт
- •Біотипування h.Influenzae
- •5.Методи бактеріологічного та біохімічного вивчення менінгококів, пневмококів та гемофілів
- •5.1.Створення пiдвищеної концентрацiї вуглекислого газу для культивування посiвiв
- •5.2.Проба на каталазу
- •5.3.Проба на оксидазу
- •5.4.Визначення сахаролітичної активності
- •5.8.Застосування дискiв з жовчу для iдентифiкацiї збудників менінгітів
- •5.9.Оптохіновий тест
- •5.10.Визначення ферменту уреази
- •5.11.Визначення індолоутворення
- •5.12.Визначення наявності орнітиндекарбоксилази
- •5.13.Визначення наявності β-галактозидази у штамів h.Influenzae
- •6.Методи серологiчної дІагностики та типування збудників гнійних бактеріальних менінгітів
- •6.1.Реакція латекс-аглютинації.
- •6.2.Реакцiя аглютинацiї на склi
- •Реакцiя аглютинацiї в полiстиролових панелях
- •7. Визначення чутливості до антибіотиків
- •8. Термiни видачi вiдповiдi та її формулювання
- •10. Зберiгання та транспортування видiлених культур
- •11.Організаційно-методична робота бактеріологічних лабораторій
- •12.Обов’язки спеціалістів лабораторій, що проводять дослідження з метою діагностики гнійних бактеріальних менінгітів.
- •13. Штами для контролю якості поживних середовищ та постановки тестів ідентифікації
- •Зони інгібіції тест-штамів на середовищі Мюллер-Хінтон.
- •14. Вимоги безпеки
- •Культуральнi та бiохiмiчнi властивостi нейсерiй I m.(b.) catarrhalis
- •Приготування поживних середовищ та індикаторів
- •1.Сироватковий агар
- •1.1.Сироватковий агар з ристомiцином
- •1.2.Сироватковий агар з лiнкомiцином
- •2.Кров'яний агар
- •3."Шоколадний" агар (кип’ячений)
- •3.1.Шоколадний бульйон
- •3.2.Середовище Левінталя
- •4.Жовчно - сироватковий агар
- •5. Середовища з вуглеводами для визначення сахаролітичних властивостей нейсерій
- •6.Середовище для визначення продукції полісахаридів на агарі з 5% сахарози
- •7.Середовище для тесту відновлення нітратів в нітрити
- •8.Нтм агар (Середовище для тестування гемофілів)
- •9.Реактиви для визначення ферменту уреази за методом Заксе Готується 2 реактиви: а і в.
- •10.Реактив Грісса
- •11.Реактив Касаткіна
- •12.Індикатор феноловий червоний (фенолрот)
- •13.Водний розчин Люголя
- •Застосування реакцiї непрямої гемаглютинацiї для виявлення протименiнгококових антитiл
- •Показання до проведення серологiчних дослiджень
- •2. Реакцiя непрямої гемаглютинацiї (рнга) з еритроцитарними менiнгококовими дiагностикумами
- •Забiр кровi
- •Рекомендованi терміни, кратнiсть обстеження та трактування результатiв серологiчних досліджень
- •4.1. Рнга при генералiзованих формах менiнгококової iнфекцiї
- •4.1.1. Рнга з дiагностикумами а I с
- •4.1.2. Рнга з дiагностикумом серогрупи в
- •4.1.3.Групова специфiчнiсть рнга
- •4.2. Рнга при локалiзованих формах менiнгококової
- •Iнфекцiї (назофарингiт I бактерiоносiйство)
- •4.3.Рнга при iмуно-епiдемiологiчних дослiдженнях
- •4.4. Застосування рнга для оцiнки ефективностi вакцинопрофiлактики менiнгококової iнфекцiї
13. Штами для контролю якості поживних середовищ та постановки тестів ідентифікації
Усі середовища обов’язково перевіряються перед використанням на стерильність (відсутність росту на них після інкубування протягом 48 годин при температурі (37±1)оС. Крім того, вони повинні забезпечувати типовий ріст контрольних штамів. (Табл.6)
Таблиця 6
Середовище (реагент) |
Контрольний штам мікроорганізма |
Особлива назва |
Очікуваний результат |
1 |
2 |
3 |
4 |
Забарвлення за Грамом в модифі-кації Каліни |
Staphylococcus aureus |
ATCC 25923 |
Зеленувато-чорні коки |
Escherichia coli |
ATCC 25922 |
Яскраво рожеві палички |
|
Кров'яний агар |
Staphylococcus aureus |
ATCC 25923 |
Ріст типових колоній |
Escherichia coli |
ATCC 25922 |
Ріст типових колоній |
|
Шоколадний агар |
Haemophilus influenzae |
NCTC 11931
|
Ріст типових колоній |
Сироватковий агар |
C.pseudodiphtheriticum |
|
Ріст типових колоній |
Менінгоагар |
N.meningitidis |
A 208 B 0657 C 23252 |
Ріст типових колоній |
Мюллер-Хінтон агар та АГВ |
Escherichia coli |
ATCC 25922 |
Відповідні зони затримки росту тест-штамів |
Staphylococcus aureus |
ATCC 25923 |
||
Pseudomonas aeruginosa |
ATCC 27853 |
1 |
2 |
3 |
4 |
Оксидаза |
Pseudomonas aeruginosa |
ATCC 27853 |
Позитивний контроль (рожеве забарвлення за ме-тодом Ковача або синьо-фіо-летове за індофенольним) |
Escherichia coli |
ATCC 25922 |
Негативний контроль (зміни кольору не відбувається) |
|
Каталаза |
Escherichia coli |
ATCC 25922 |
Позитивний контроль |
Streptococcus spp. |
|
Негативний контроль |
|
Нітратредуктаза |
Escherichia coli |
ATCC 25922 |
Позитивний контроль |
M.luteum |
|
Негативний контроль |
|
Лактоза |
E.coli O55 |
|
Позитивний контроль (червоний колір середовища змінюється на жовтий) |
S.flexneri 1a |
|
Негативний контроль (червоний колір середовища не змінюється) |
|
Сахароза |
K.pneumoniae |
|
Позитивний контроль (червоний колір середовища змінюється на жовтий) |
S.flexneri 1a |
|
Негативний контроль (червоний колір середовища не змінюється) |
|
Глюкоза |
S.flexneri 1a |
|
Позитивний контроль (червоний колір середовища змінюється на жовтий) |
Pseudomonas aeruginosa |
|
Негативний контроль (червоний колір середовища не змінюється) |
|
Мальтоза |
K.pneumoniae |
|
Позитивний контроль (червоний колір середовища змінюється на жовтий) |
P.mirabilis |
|
Негативний контроль (червоний колір середовища не змінюється) |
|
Уреаза |
C.pseudodiphtheriticum |
|
Позитивний контроль |
C.diphtheriae |
|
Негативний контроль |
|
Оптохін |
S.pneumoniae |
|
Чутливий до оптохіну, ріст відсутній
|
Потреба X і V факторів |
Haemophilus influenzae
|
NCTC 11931
|
Ріст при наявності і X, і V факторів |
1 |
2 |
3 |
4 |
β- галактозидаза |
Escherichia coli
|
ATCC 25922 |
Позитивний контроль (змінює забарвлення на жовте) |
P.mirabilis |
|
Негативний контроль |
Таблиця 7.