Литература:

1. Яицкий, Н.А. Язвы желудка и двенадцатиперстной кишки // Н.А. Яицкий, В.М. Седов, В.П. Морозов. - М.: МЕДпресс-информ, 2002. - 376 с.

2. Богер М.М. Язвенная болезнь // М.М. Богер. - Новосибирск: Наука, 1996. - 256 с.

МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ВНУТРИПЕЧЕНОЧНОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ РАСПРОСТРАНЕННОМ ГНОЙНОМ ПЕРИТОНИТЕ

Матусевич Е.А. (соискатель кафедры госпитальной хирургии с курсами урологии и детской хирургии)

Научный руководитель: д.м.н., профессор кафедры госпитальной хирургии с курсами урологии и детской хирургии Косинец В.А.

УО «Витебский государственный медицинский университет»,

г. Витебск

Актуальность. Проблема перитонита актуальна вследствие сохраняющейся высокой летальности в результате развития полиорганной недостаточности (ПОН).

Цель. Изучить экспрессию МАС387–маркера воспалительного ответа в печени при экспериментальном гнойном перитоните (РГП) и возможности ее коррекции лекарственными средствами метаболического типа действия.

Материалы и методы исследования. Для проведения исследования животные (55 кроликов) были разделены на следующие группы: интактные (n=5); с распространенным гнойным перитонитом без хирургического лечения (n=5); контрольная группа – хирургическое лечение перитонита без применения в послеоперационном периоде лекарственных средств (n=15); основная группа, хирургическое лечение перитонита с применением в послеоперационном периоде в течение 5-и суток препаратов: «Цитофлавин» внутривенно из расчета 28,5 мг янтарной кислоты на 1 кг массы животного (n=15); «Неотон» внутривенно из расчета 0,05 г на 1 кг массы животного (n=15). Моделирование перитонита проводили путем введения в брюшную полость микробной взвеси, состоящей из равных количеств аэробов (E. coli, штамм 0111 К58 НИ С 130-53) и анаэробов (B. Fragilis, штамм 323). Материалом для морфологического исследования служили участки печени кроликов с распространенным экспериментальным гнойным перитонитом. После фиксации и стандартной гистологической проводки готовили серийные срезы. Использовали окраску гематоксилином и эозином, по методу Ван Гизон и иммуногистохимическую (ИГХ) с использованием антител к макрофагам Anti-Macrophage antibody [MAC387]-ab49408 («Abcam», Великобритания).МАС387 – маркер активированных «проникающих» макрофагов, рекрутированных из моноцитов крови в печеночную ткань. МАС387-позитивные клетки являются маркером активности внутрипеченочного неспецифического воспалительного ответа [1]. Иммуногистохимическое окрашивание оценивали по характеру экспрессии ИГХ маркера MAC387. При увеличении ×400 производили цифровые фотографии в 10 полях зрения. Обработку цифровых изображений проводили с использованием программы WCIF ImageJ 1.45s.Статистическую обработку проводили с использованием пакета анализа «MedCalc 10.2.0.0». Использованы методы .непараметрической (расчет медианы (Ме), доверительного интервала для медианы с вероятностью 95%, размаха минимальных и максимальных значений (размах min-max), межквартильного интервала (25-75 процентиль), критериев Wilcoxon, Mann-Whitney (уровень достоверности р<0,05)) статистики.

Результаты исследования. При микроскопическом исследовании было выявлено, что через что через 6-ть часов инициации перитонита наблюдалась диффузная полиморфно-клеточная воспалительная инфильтрация паренхимы с преобладанием в инфильтрате нейтрофилов. На 1-е сутки после операции наблюдалось развитие дистрофических изменений в центральных зонах печеночных долек гепатоцитов, прогрессивно нарастающих к 5-м суткам.

Иммуногистохимическое исследование МАС387+ макрофагов показало их присутствие в печени как при экспериментальном перитоните, так и в образцах без патологии. Однако, уже через 6-ть часов после моделирования перитонита происходило резкое нарастание количества реактивных макрофагов с 0,043 отн. ед. (Ме, интактные животные) до 0,138 отн.ед. (Ме, р1<0,0001), причем на 1-е сутки после операции данный показатель достигал 0,185 (Ме, р1<0,0001), достоверно отличаясь от нормальных значений. В контрольной группе на 3-и сутки после операции активность внутрипеченочного воспаления продолжала увеличиваться, что проявлялось повышением экспрессии реактивных макрофагов до 0,357 (Ме, р1<0,0001). На 5-е сутки послеоперационного периода экспрессия МАС387+ макрофагов составила 0,298 (Ме, р1<0,0001), статистически значимо отличаясь от нормальных значений

В группе животных, получавших неотон, экспрессия МАС387 на 1-е сутки после операции составила 0,105 (Ме, р1=0,015). В дальнейшем наблюдалось увеличение экспрессии МАС387-позитивных макрофагов до 0,359 (Ме, р1<0,0001) на 3-и сутки с последующим снижением до 0,321 (Ме, р1<0,0001 на 5-е сутки послеоперационного периода, при этом статистически значимых отличий по сравнению с группой контроля не отмечалось.

В группе животных, получавших цитофлавин, уже с 3-х суток послеоперационного периода отмечался иммунопротекторный эффект, что выражалось в снижении интенсивности внутрипеченочного воспалительного ответа по сравнению с группой контроля. Так, экспрессия МАС387+ макрофагов на 1-е сутки в данной группе статистически значимо не отличалась от группы контроля и животных, получавших неотон, составляя 0,096 (Ме, р1=0,0004). Однако, на 3-и сутки данный показатель составил 0,084 (Ме, р1=0,0136, р3<0,0001, р4=0,001), что было в 4,25 раза меньше, чем в группе контроля, а на 5-е сутки показатель экспрессии МАС387+ приблизился к нормальным значениям и составил 0,068 (Ме, р1=0,017, р3<0,0001, р4 <0,0001), что было в 4,38 раза ниже по сравнению с аналогичным сроком в контрольной группе и в 5,28 раза ниже, чем в группе животных, получавших неотон.

При микроскопическом исследовании препаратов печени животных, получавших цитофлавин, отмечались менее выраженные явления альтерации печеночной ткани, а также интенсивность внутрипеченочного воспаления, чем в группе контроля и группе животных, получавших неотон.

Выводы:

1. МАС387-позитивные макрофаги обнаруживаются в печени как в норме, так и при экспериментальном гнойном перитоните.

2. Для экспериментального распространенного гнойного перитонита характерно значительное увеличение уровня экспрессии маркера внутрипеченочного воспаления МАС387 в ткани печени.

3. У животных с эксперименальным распространенным гнойным перитонитом отмечаются явления альтерации печеночной ткани, прогрессивно нарастающие на 5-е сутки послеоперационного периода. При этом динамика поражений соответствует интенсивности их инфильтрации МАС387-положительными макрофагами, определяющими неспецифический компонент воспалительной реакции.

4. Изменение экспрессии маркера внутрипеченочного воспалительного ответа при экспериментальном распространенном гнойном перитоните, возможно, является предиктором дальнейшего развития деструктивных процессов в печени с нарушением ее функции, а также системного воспаления и полиорганной недостаточности.

5. Препарат, содержащий янтарную кислоту, Цитофлавин, по сравнению с препаратом креатинфосфата Неотон, более эффективно снижает уровень экспрессии МАС387+ клеток в печени, корригирует интенсивность внутрипеченочного воспалительного клеточно-опосредованного ответа, что в результате способствует уменьшению степени альтерации ткани печени и оказывает цитопротекторный эффект.