- •Общая микробиология Занятие №1. Тема: вводное занятие.
- •2. Микробиологическая лаборатория.
- •3. Методы микробиологических исследований.
- •1. Микроскопический (бактериоскопический, вирусоскопический).
- •2. Культуральный (бактериологический, вирусологический, микологический, протозоологический методы).
- •3. Биологический (экспериментальный).
- •4. Строение микроскопа. Особенности микроскопии в иммерсионной системе.
- •4. Иммунобиологический (серологический).
- •5. Аллергологический (аллергический).
- •6. Молекулярно-генетический (молекулярно-биологический).
- •Занятие №2. Тема: бактериоскопический метод исследования. Морфология микроорганизмов.
- •2. Морфология микроорганизмов.
- •1. Шаровидные формы бактерий (кокки)
- •2. Палочковидные формы бактерий
- •3. Извитые формы бактерий
- •3. Размеры микроорганизмов.
- •4. Полиморфизм микроорганизмов.
- •Занятие №3. Тема: бактериоскопический метод исследования. Микроскопия окрашенных и неокрашенных микроорганизмов.
- •2. Исследование микробов на подвижность.
- •1. Приготовление препарата «раздавленная капля»
- •2. Приготовление препарата «висячая капля»
- •3. Техника приготовления мазков.
- •1. Техника приготовления мазков-препаратов
- •2. Техника приготовления мазков-отпечатков
- •2. Метод пешкова (метод окраски спор)
- •Занятие №4. Тема: бактериологический метод исследования. Культивирование микроорганизмов.
- •2. Питательные среды и методы стерилизации.
- •2. Посев (пересев) бактерий в пробирку со скошенной плотной:
- •3. Посев (пересев) бактерий в пробирку уколом с плотной средой (агаром или желатином)
- •4. Посев (пересев) бактерий в чашку петри с плотной средой:
- •4. Культивирование аэробов.
- •I. Механические методы (механические методы разобщения микробных клеток):
- •1. Метод пастера.
- •2. Метод коха.
- •3. Метод дригальского.
- •4. Метод истощающего штриха.
- •II. Термический метод.
- •III. Химические методы.
- •1. Метод выделения микроорганизмов с помощью кислот, щелочей, спирта.
- •2. Метод обогащения.
- •3. Методы с применением антибиотиков.
- •IV. Биологический метод.
- •3. Метод культивирования в жидких средах под слоем масла.
- •4. Использование редуцирующих и окисляющих веществ.
- •5. Метод виньяля-виона.
- •6. Метод с использованием специальных приборов и аппаратов (анаэростат и эксикатор).
- •Занятие №5. Тема: бактериологический метод исследования. Биохимические свойства микроорганизмов.
- •3. Сахаролитические свойства микроорганизмов.
- •1. Обнаружение сахаролитической активности на средах гисса.
- •2. Обнаружение сахаролитической активности на других средах.
- •4. Протеолитические свойства микроорганизмов.
- •1. Обнаружение протеалитической активности на мясо-пептонной желатине (мпж).
- •2. Обнаружение протеолитической активности на молоке.
- •5. Редуцирующие свойства микроорганизмов.
- •1. Определение редуцирующих свойств на молоке с метиленовым синим.
- •2. Определение редуцирующих свойств на лакмусовом молоке.
- •6. Гемолитические свойства микроорганизмов.
- •1. Определение гемолитических свойств на кровяном агаре.
- •Занятие №6. Коллоквиум
- •Специальная микробиология Занятие № 7. Тема: микробиология молока и молочнокислых продуктов.
- •Микрофлора молока
- •1. Молочные стрептококки:
- •2. Молочные палочки:
- •Микрофлора молочнокислых продуктов
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочнокислых продуктов.
- •3. Обнаружение возбудителей туберкулеза и бруцеллеза в молоке и молочнокислых продуктах.
- •Занятие № 8. Тема: микробиология кормов.
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование кормов.
- •3. Обнаружение возбудителей ботулизма в кормах. Микотоксикозы.
- •4. Консервирование кормов.
- •Занятие № 9. Тема: микробиология мяса, кожевенно-мехового сырья и яиц.
- •Микрофлора мяса
- •Микрофлора кож-мех сырья
- •Микрофлора яиц
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование мяса, кожевенно-мехового сырья и яиц. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •3. Обнаружение возбудителей сибирской язвы в мясе и кожевенно-меховом сырье.
5. Редуцирующие свойства микроорганизмов.
Редуцирующие свойства (редуцирующая активность) – это способность микроорганизмов с помощью ферментов разрушать органические красители (метиленовую синь, малахитовую зелень, нейтральрот, лакмус и др).
Под действием ферментов, выработанных микроорганизмами краситель восстанавливает свой цвет, при этом среда либо обесцвечивается, либо меняет цвет.
1. Определение редуцирующих свойств на молоке с метиленовым синим.
Посев и культивирование. В 5 мл среды (молока с метиленовым синим) засевают петлю исследуемой микробной культуры. Инкубируют 24 ч.
Учет результатов:
♦ Положительная реакция: среда из голубой станет кремового цвета.
♦ Слабоположительная реакция: среда из голубой будет иметь зеленоватое окрашивание.
♦ Отрицательная реакция: молоко остается без изменений.
2. Определение редуцирующих свойств на лакмусовом молоке.
Посев и культивирование. Пробирки с лакмусовым молоком засевают так же, как молоко с метиленовым синим. Инкубируют 10 дней.
Учет результатов:
♦ Положительная реакция: обесцвечивание молока, имеющего розовато-сиреневый цвет до посева.
♦ Отрицательная реакция: молоко остается без изменений.
6. Гемолитические свойства микроорганизмов.
Гемолитические свойства (гемолитическая активность) – это способность микроорганизмов разрушать эритроциты (гемолиз).
Гемолитические изучают на средах с кровью. Жидкие среды при этом становятся прозрачными, а на плотных средах вокруг колонии появляется прозрачная зона (зона гемолиза).
Гемолитическую активность осуществляет фермент – гемолизин.
1. Определение гемолитических свойств на кровяном агаре.
Посев и культивирование: готовят МПА, к расплавленному МПА добавляют дефибринированную кровь (5% кровь барана). После застывания среды делают посев исследуемой микробной культуры. Культивируют при 37°С 24-48 ч.
Учет результатов:
♦ Положительная реакция: зона просветления вокруг колоний (прозрачная зона) – это зона гемолиза (разрушения эритроцитов). Различают:
α-гемолиз (альфа-гемолиз) – частичный гемолиз эритроцитов (зеленое окрашивание агара вокруг колоний – переход гемоглобина в метгемоглобин);
β-гемолиз (бета-гемолиз) – полный гемолиз эритроцитов (полное просветление вокруг колоний);
♦ Отрицательная реакция: нет зоны просветления. По другому называют: γ-гемолиз (гамма-гемолиз) – отсутствие гемолиза эритроцитов (нет просветления вокруг колоний).
7. Определение газов, выделяемых микроорганизмами.
Для определения газов берут пробирку с питательной средой (МПБ) и засевают культуру.
Фильтровальную бумагу заранее пропитывают растворами, высушивают и нарезают узкими полосками по 5-6 см.
Такую полоску помещают под пробку (между ней и стенкой пробирки), не касаясь среды.
После инкубации в термостате учитывают результат.
1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНДОЛА.
Индол – это конечный продукт распада аминокислоты триптофана.
Полоску пропитывают реактивом Эрлиха (96% спирт-ректификат, концентрированная хлорная кислота и пара-диметил-амино-бензо-альдегид).
Учет результатов:
♦ Положительная реакция: бумага краснеет.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЕРОВОДОРОДА.
Сероводород – это конечный продукт расщепления аминокислот, содержащих серу.
Полоску пропитывают 10% раствором уксусного свинца.
Учет результатов:
♦ Положительная реакция: бумага чернеет.
3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АММИАКА.
В пробирки с жидкой питательной средой опускают полоску лакмусовой бумаги так, чтобы она не касалась питательной среды. Далее помещают в термостат.
Учет результатов:
♦ Положительная реакция: бумага синеет (аммиак обладает щелочными свойствами).
8. Определение фермента каталазы.
Некоторые виды микроорганизмов, в процессе дыхания образуют перекись водорода, являющуюся клеточным ядом. Но количество перекиси водорода в культуре никогда не достигает высоких концентраций, так как по мере образования перекись расщепляется на воду и молекулярный кислород при участии фермента каталазы.
Каталазная активность – это способность микроорганизмов расщеплять перекись водорода.
Сущность: перекись водорода расщепляется на воду и кислород при участии фермента каталазы (2H2O2 → 2H2O + O2).
Определение каталазы:
1-й метод: на предметное стекло капают 3% перекись водорода, бак. петлей снимают с поверхности плотной питательной среды немного бак. массы, окунают петлю с бак. массой в каплю с перекисью водорода.
2-й метод: на поверхность агаровой микробной культуры (на МПА) капают 3% перекись водорода.
3-й метод: в бульонную культуру (на МПБ) наливают 0,5 мл 3% перекиси водорода.
Учет результатов:
♦ Положительная реакция: наличие пузырьков газа (не позднее 5 мин).
♦ Отрицательная реакция: нет пузырьков газа.
Культуры, выращенные на кровяных средах, испытывать на наличие каталазы этим способом нельзя из-за каталазной активности питательной среды.