- •Общая микробиология Занятие №1. Тема: вводное занятие.
- •2. Микробиологическая лаборатория.
- •3. Методы микробиологических исследований.
- •1. Микроскопический (бактериоскопический, вирусоскопический).
- •2. Культуральный (бактериологический, вирусологический, микологический, протозоологический методы).
- •3. Биологический (экспериментальный).
- •4. Строение микроскопа. Особенности микроскопии в иммерсионной системе.
- •4. Иммунобиологический (серологический).
- •5. Аллергологический (аллергический).
- •6. Молекулярно-генетический (молекулярно-биологический).
- •Занятие №2. Тема: бактериоскопический метод исследования. Морфология микроорганизмов.
- •2. Морфология микроорганизмов.
- •1. Шаровидные формы бактерий (кокки)
- •2. Палочковидные формы бактерий
- •3. Извитые формы бактерий
- •3. Размеры микроорганизмов.
- •4. Полиморфизм микроорганизмов.
- •Занятие №3. Тема: бактериоскопический метод исследования. Микроскопия окрашенных и неокрашенных микроорганизмов.
- •2. Исследование микробов на подвижность.
- •1. Приготовление препарата «раздавленная капля»
- •2. Приготовление препарата «висячая капля»
- •3. Техника приготовления мазков.
- •1. Техника приготовления мазков-препаратов
- •2. Техника приготовления мазков-отпечатков
- •2. Метод пешкова (метод окраски спор)
- •Занятие №4. Тема: бактериологический метод исследования. Культивирование микроорганизмов.
- •2. Питательные среды и методы стерилизации.
- •2. Посев (пересев) бактерий в пробирку со скошенной плотной:
- •3. Посев (пересев) бактерий в пробирку уколом с плотной средой (агаром или желатином)
- •4. Посев (пересев) бактерий в чашку петри с плотной средой:
- •4. Культивирование аэробов.
- •I. Механические методы (механические методы разобщения микробных клеток):
- •1. Метод пастера.
- •2. Метод коха.
- •3. Метод дригальского.
- •4. Метод истощающего штриха.
- •II. Термический метод.
- •III. Химические методы.
- •1. Метод выделения микроорганизмов с помощью кислот, щелочей, спирта.
- •2. Метод обогащения.
- •3. Методы с применением антибиотиков.
- •IV. Биологический метод.
- •3. Метод культивирования в жидких средах под слоем масла.
- •4. Использование редуцирующих и окисляющих веществ.
- •5. Метод виньяля-виона.
- •6. Метод с использованием специальных приборов и аппаратов (анаэростат и эксикатор).
- •Занятие №5. Тема: бактериологический метод исследования. Биохимические свойства микроорганизмов.
- •3. Сахаролитические свойства микроорганизмов.
- •1. Обнаружение сахаролитической активности на средах гисса.
- •2. Обнаружение сахаролитической активности на других средах.
- •4. Протеолитические свойства микроорганизмов.
- •1. Обнаружение протеалитической активности на мясо-пептонной желатине (мпж).
- •2. Обнаружение протеолитической активности на молоке.
- •5. Редуцирующие свойства микроорганизмов.
- •1. Определение редуцирующих свойств на молоке с метиленовым синим.
- •2. Определение редуцирующих свойств на лакмусовом молоке.
- •6. Гемолитические свойства микроорганизмов.
- •1. Определение гемолитических свойств на кровяном агаре.
- •Занятие №6. Коллоквиум
- •Специальная микробиология Занятие № 7. Тема: микробиология молока и молочнокислых продуктов.
- •Микрофлора молока
- •1. Молочные стрептококки:
- •2. Молочные палочки:
- •Микрофлора молочнокислых продуктов
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочнокислых продуктов.
- •3. Обнаружение возбудителей туберкулеза и бруцеллеза в молоке и молочнокислых продуктах.
- •Занятие № 8. Тема: микробиология кормов.
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование кормов.
- •3. Обнаружение возбудителей ботулизма в кормах. Микотоксикозы.
- •4. Консервирование кормов.
- •Занятие № 9. Тема: микробиология мяса, кожевенно-мехового сырья и яиц.
- •Микрофлора мяса
- •Микрофлора кож-мех сырья
- •Микрофлора яиц
- •2. Санитарно-бактериологическое исследование мяса, кожевенно-мехового сырья и яиц. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •3. Обнаружение возбудителей сибирской язвы в мясе и кожевенно-меховом сырье.
2. Техника приготовления мазков-отпечатков
Мазки-отпечатки готовятся из патологического материала путем отпечатков или прокатывания его по предметному стеклу.
Этапы приготовления мазка-отпечатка:
1-й ЭТАП: НАНЕСЕНИЕ МАЗКА (нанесение бак. массы на предметное стекло).
1) Фломбируют (обжигают) предметное стекло над пламенем спиртовки.
2) Кладут предметное стекло на мостик.
3) Раскаленным шпателем (скальпелем) прикасаются к кусочку пат. материала в том месте, в котором будут производить разрез (чтобы убить с поверхности микробов).
4) Разрезают пат. материал.
5) Кусочек пат. материала берут пинцетом и несколько раз (3-4 раза) прикасаются кусочком к поверхности предметного стекла.
Все остальные этапы такие же, как и при приготовлении мазка-препарата:
2-й ЭТАП: ВЫСУШИВАНИЕ МАЗКА.
3-й ЭТАП: ФИКСАЦИЯ МАЗКА.
4-й ЭТАП: ОКРАСКА МАЗКА.
4. Простые методы окраски микроорганизмов.
Окраска бактерий (крашение бактерий) – это комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения бактерий. Это метод микробиологической техники.
В простых методах окраски используется 1 краситель и вся микробная клетка красится в 1 цвет.
В сложных методах окраски используется 1, 2 и более красителей и микробы красятся в 2 и более цветов.
1. ОКРАСКА ЩЕЛОЧНОЙ МЕТИЛЕНОВОЙ СИНЬКОЙ ЛЁФФЛЕРА
Техника окраски.
1. На фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги.
2. На нее наливают МЕТИЛЕНОВУЮ СИНЬКУ (на 3-5 мин).
3. Убирают фильтровальную бумагу.
4. Промывают водой. Высушивают на воздухе. Микроскопируют.
Микрокартина: бактерии синего цвета.
2. ОКРАСКА ВОДНЫМ РАСТВОРОМ ФУКСИНА
Техника окраски.
1. На фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги.
2. На нее наливают РАСТВОР ФУКСИНА (на 1-3 мин).
3. Убирают фильтровальную бумагу.
4. Промывают. Высушивают. Микроскопируют.
Микрокартина: бактерии красного цвета.
1. Сложные методы окраски микроорганизмов.
1. МЕТОД ГРАМА (дифференциально-диагностический)
Техника окраски.
1. Фиксированный мазок окрашивают ГЕНЦИАНВИОЛЕТОМ (по методу Синева его покрывают пропитанной тем же красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2-3 каплями воды) (на 1-2 мин).
2. Сливают генцианвиолет (снимают полоску бумаги Синева).
3. Мазок обрабатывают РАСТВОРОМ ЛЮГОЛЯ (на 1-2 мин) (мазок чернеет).
4. Не промывая мазок водой, сливают раствор.
5. Обесцвечивают 96% СПИРТОМ (на 30 -60 сек).
6. Промывают водой.
7. Окрашивают ФУКСИНОМ ПФЕЙФФЕРА (водным фуксином) (на 1-2 мин).
8. Промывают. Высушивают. Микроскопируют.
Микрокартина: грамположительные (+) микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый (синий), а грамотрицательные (-) микроорганизмы окрашиваются в розовый (красный).
2. Метод пешкова (метод окраски спор)
Техника окраски.
1. На фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги.
2. На нее наливают МЕТИЛЕНОВУЮ СИНЬ (3-5 капель).
3. Мазок нагревают до образования паров (≈3 мин).
4. Убирают фильтровальную бумагу.
5. Промывают водой.
6. Наливают 1% раствор нейтрального красного (НЕЙТРАЛЬРОТ) (на 10 сек).
7. Промывают. Высушивают. Микроскопируют.
Микрокартина: споры – синие, вегетативные клетки - красные.
3. МЕТОД МИХИНА (метод окраски капсул)
Техника окраски.
1. На фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги.
2. На нее наливают МЕТИЛЕНОВУЮ СИНЬ.
3. Мазок нагревают до образования паров (5-7 сек).
4. Еще выдерживают 5-6 мин.
5. Убирают фильтровальную бумагу.
6. Промывают. Высушивают. Микроскопируют.
Микрокартина: капсулы – розовые, вегетативные клетки – синие.