Получение микробной культуры на твёрдых питательных средах при различных температурных режимах

Постановка исследования

Задание 1. Приготовить суспензию сенной и картофельной палочек: петлёй перенести микробную массу в пробирки с 1 мл стерильной воды, перемешать, взболтать. Петлёй взять 2–3 капли (количество капель одинаковое) и нанести на поверхность МПА (ПАС-1/ПАС-2). Растереть шпателем по поверхности питательной среды (сделать по четыре или более повторности).

Инкубировать в течение 5–7 суток при температуре:

1. 0–5 ^оС – в холодильнике;

2. 20–22 ^оС – при комнатной температуре, в лаборатории;

3. 28–30 ^оС – в термостате;

4. 45 ^оС – в термостате.

Анализ исследования

Задание 2. Изучить микробную картину, проанализировать характер роста культуры в зависимости от выбранного температурного режима. Сделать вывод об оптимальном температурном режиме для каждого исследованного вида спорообразующих бактерий. Данные занести в нижеприведённую таблицу.

Культуральные признаки бактерий

Культуральные признаки	Температурные режимы, оС
	0–5	20–22	28–30	45
Форма
Размер
Поверхность
Профиль
Блеск и прозрачность
Цвет
Край
Структура
Консистенция
Степень развития культуры

Задание 3. Микроскопическое исследование. Из всех культур приготовить препараты, окрашенные по Граму. Микроскопировать ×1500. Сравнить размеры клеток, отношение диаметра к длине, характер концов, активность процесса деления и спорообразования, характер спорообразования. Отношение к окраске. Зарисовать и описать микробную картину.

Лабораторная работа 13 Влияние света на развитие бактерий

Цель работы: изучить влияние солнечного света и УФ-излучения на рост и развитие популяций бактерий.

Свет – основной фактор роста водорослей, цианобактерий, фотосинтезирующих зелёных и пурпурных бактерий, т.е. тех микроорганизмов, которые имеют пигменты, обеспечивающие возможность поглощать энергию солнца и превращать её в химическую энергию. Для большинства других бактерий радиация, видимая или невидимая, либо не оказывает влияния, либо является губительной.

Ультрафиолетовый свет – сильный бактерицидный агент, поэтому ультрафиолетовые лампы используют для стерилизации воздуха. Однако УФ-излучение не всегда вызывает гибель микробных клеток. Способны противостоять этому воздействию клетки микробов, имеющие каротиноидные пигменты. Они служат им защитной системой, снижающей повреждение нуклеиновых кислот УФ- и видимым излучением.

Многие микрококки, сарцины и другие бактерии, обнаруживаемые в воздухе, содержат каротиноидные пигменты и поэтому не гибнут на солнечном свете.

Постановка исследования

Задание 1. Произвести посев бактерий из воздуха.

Задание 2. После разрастания колоний отобрать для посева пигментированные и непигментированные, изолированно расположенные колонии, описать их культуральные признаки, приготовить фиксированные препараты, окрашенные по Граму.

Задание 3. Стерильной петлёй бактерии из отобранных для исследования колоний перенести в пробирки с 2 мл стерильной дистиллированной воды, перемешать.

Каждую чашку Петри с застывшей питательной средой МБА (ПАС-1, ПАС-2) со стороны дна разделить на секторы карандашом (рис. 14), подписать и обозначить секторы:

сектор I – выращивание микробов осуществить в темноте (при естественном свете), без облучения;

сектор II – выращивание микробов производить после кратковременной обработки УФ-излучением в темноте (при естественном свете);

сектор III – выращивание микробов производить после более длительной обработки УФ-излучением в темноте (при естественном свете).

Рис. 14. Схема посева по секторам

Задание 4. На поверхность застывшей питательной среды обильно нанести микробную культуру: стерильной петлёй внести несколько капель суспензии микробов по секторам, сделать штрихи или растереть стерильным шпателем.

На дно чашки прикрепить черную бумагу, в которой в месте расположения II и III секторов сделать «окна».

Открыть «окно», расположенное напротив сектора II, и подвергнуть облучению бактерицидной лампой:

• 1-й вариант – на 5 мин;

• 2-й вариант – на 10 мин.

Открыть «окно», расположенное напротив сектора III, и подвергнуть облучению бактерицидной лампой:

• 3-й вариант – на 20 мин;

• 4-й вариант – на 30 мин;

• 5-й вариант – на 40 мин.

Задание 5. После облучения производить инкубирование с открытым (закрытым) окном:

1) при естественном свете, не в термостате, при комнатной температуре 20–22 ^оС;

2) в темноте, при температуре 37 ^оС, в термостате;

3) в темноте, при температуре 23 ^оС, в термостате;

4) в темноте, при температуре 5–10 ^оС, в холодильнике.

Возможны другие варианты сочетания температурных режимов и освещённости.

Анализ исследования

Задание 6. Чашки с микробами просматривать каждые сутки и анализировать характер роста в зависимости от того:

1) какая микробная культура отобрана для исследования (пигментированная или не синтезирующая пигмент);

2) подверглась ли микробная культура действию бактерицидного агента и если подверглась, то в течение какого времени;

3) при какой температуре производилось инкубирование.

Задание 7. Сделать отчёт, заполнить нижеприведённую таблицу. Для каждой популяции описать культуральные признаки.