Окраска спор

При образовании споры часть цитоплазмы с ядерным веществом посредством мембраны обособляется от остальной части клетки и покрывается многослойной оболочкой. Так как многослойная оболочка слабо проницаема для красителей, то при обычных способах окраски споры не прокрашиваются и имеют вид плотных, сильно преломляющих свет образований.

При всех способах окраски спор их сначала протравливают различными химическими веществами: хромовой, соляной, серной, уксусной кислотой, аммиаком, перекисью водорода. При последующем окрашивании кроме споры окрашивается и цитоплазма самой клетки. Поэтому, чтобы добиться характерной окраски споры, цитоплазму обесцвечивают, так как она слабее удерживает адсорбированный ею краситель.

Окраска спор по методу Циля – Нильсена

1. На фиксированный над пламенем горелки препарат нанести 5% раствор хромовой кислоты.

2. Через 5 мин промыть его водой и накрыть полоской фильтровальной бумаги.

3. Залить раствором карболового фуксина. Препарат подогреть на пламени горелки до появления паров, затем отвести в сторону, добавить краситель и снова подогреть. Таким образом окрашивать мазок 8 мин.

4. Охладить мазок, снять бумагу, промыть водой, промокнуть фильтровальной бумагой. После такой обработки клетки полностью хорошо прокрашены.

5. Для обесцвечивания цитоплазмы мазок обработать 1% серной кислотой в течение 15–30 сек.

6. Промыть мазок водой.

7. Окрасить мазок метиленовым синим в течение 5 мин.

8. Вновь промыть водой и высушить. Микроскопировать ×1500.

Окраска спор по методу Ожешко

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор соляной кислоты и подогреть на пламени горелки 2–3 мин.

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем горелки.

3. Далее окрашивание проводить аналогично методу Циля – Нильсена.

4. Споры бактерий окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий.

Окраска спор по методу Пешкова

1. Мазок фиксировать над пламенем или смесью (спирт + формалин), окрасить метиленовой синью Лёффлера с подогреванием до кипения и кипятить 15–20 сек.

1. Затем промыть водой.

2. Докрасить мазок в течение 10 сек 1% водным раствором нейтрального красного или в течение 30 сек – 0,5% раствором.

3. Промыть водой, высушить фильтровальной бумагой. Микроскопировать ×1500.

Споры окрашиваются в голубой или синий цвет, молодые споры – в чёрно-синий, цитоплазма вегетативной клетки – в розовый, включения (хроматиновые) – в фиолетовый.

Окраска капсул по методу Бурри – Гинса

Приготовить тушевой препарат по Бурри. Для этого смешать каплю взвеси микробов с каплей туши на конце предметного стекла, обезжиренного смесью Никифорова, и при помощи предметного стекла со шлифовальным краем приготовить мазок (так же, как мазок крови), затем его высушить и зафиксировать. Микроскопировать ×1500.

На тёмно-дымчатом фоне видны неокрашенные капсулы и клетки бактерий.