- •Микробиология
- •Содержание
- •Раздел 1. Общая микробиология 6
- •Раздел 2. Сельскохозяйственная микробиология 69
- •Введение
- •Раздел 1. Общая микробиология
- •Лабораторная работа 2 Техника приготовления микробиологического препарата. Знакомство с формами бактерий
- •Техника приготовления фиксированного окрашенного препарата
- •Вопросы для самопроверки
- •Лабораторная работа 3 Методы исследования клеток микроорганизмов (техника приготовления микробиологических препаратов)
- •Прижизненное (витальное) окрашивание
- •Негативный метод окрашивания
- •Цитохимический метод исследования
- •Окраска спор
- •Окраска спор по методу Циля – Нильсена
- •Окраска спор по методу Ожешко
- •Окраска спор по методу Пешкова
- •Окраска капсул по методу Бурри – Гинса
- •Окраска капсул по методу Михина
- •Окраска жгутиков
- •Окраска волютина по методу Омелянского
- •Окраска волютина по методу Лёффлера
- •Окраска жира
- •Окраска по Граму
- •Вопросы для самопроверки
- •Лабораторная работа 4 Питательные среды
- •Приготовление питательных сред
- •Вопросы для самопроверки
- •Методы стерилизации
- •Вопросы для самопроверки
- •Лабораторная работа 5 Культивирование микроорганизмов в лабораторных условиях
- •Описание культуральных признаков
- •Лабораторная работа 6 Выделение чистой культуры микроорганизмов на плотных питательных средах
- •Приёмы посева (рассева) микроорганизмов по поверхности плотных питательных сред
- •Методы выделения чистой культуры
- •Регистрация признаков культуры
- •Вопросы для самопроверки
- •Лабораторная работа 7 Физиолого-биохимические свойства микроорганизмов
- •Использование соединений углерода
- •Использование углеводородов
- •Образование внеклеточных ферментов
- •Определение антибиотической активности микроорганизмов
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотическим веществам
- •Экология микроорганизмов Лабораторная работа 8 Микробиологический анализ воздуха
- •Лабораторная работа 9 Исследование микрофлоры почвы
- •Определение общего количества микроорганизмов в почве
- •Определение азотобактера в почве
- •Определение количества микроорганизмов ризосферы и ризопланы
- •Лабораторная работа 10 Актиномицеты
- •Общие сведения об актиномицетах, их распространение и роль в почве
- •Морфологические и культуральные признаки актиномицетов
- •Методы изучения актиномицетов
- •Лабораторная работа 11 Распространение и значение почвенных водорослей
- •Общие сведения о водорослях, их распространение и роль в почве
- •Главные группы почвенных водорослей
- •Методы изучения почвенных водорослей
- •Вопросы и задания для самопроверки
- •Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы
- •Лабораторная работа 12 Влияние температуры на микроорганизмы
- •Выявление термостойких бактерий и бацилл
- •Влияние температуры на развитие бактерий
- •Получение микробной культуры на твёрдых питательных средах при различных температурных режимах
- •Культуральные признаки бактерий
- •Лабораторная работа 13 Влияние света на развитие бактерий
- •Культуральные признаки бактерий
- •Лабораторная работа 14 Антагонизм микроорганизмов
- •Вопросы и задания для самопроверки
- •Лабораторная работа 15 Влияние питательных веществ на рост и развитие микроорганизмов Культура плесневого гриба на искусственной питательной среде
- •Морфологические признаки плесневых грибов
- •Способность грибов к токсинообразованию
- •Раздел 2. Сельскохозяйственная микробиология эпифитная микрофлора растений Эпифиты, их состав и функции
- •Микрофлора плодов и овощей
- •Лабораторная работа 16 Выделение эпифитной микрофлоры
- •Прямой посев на плотную питательную среду
- •Вопросы и задания для самопроверки
- •Система критических контрольных точек
- •Профилактика пищевых заболеваний
- •Вопросы для самопроверки
- •Лабораторная работа 17 Микробиологический анализ воды, напитков, соков, вин
- •Вопросы для самопроверки
- •Лабораторная работа 18 Микробиологическое исследование молока
- •Определение количества бактерий в молоке
- •Определение титра кишечной палочки
- •Вопросы для самопроверки
- •Лабораторная работа 19 Микробиологический анализ мяса, мясопродуктов, рыбы
- •Определение свежести продукта по мазкам-отпечаткам
- •Лабораторная работа 20 Микробиологический анализ яиц
- •Получение элективной культуры протея
- •Вопросы для самопроверки
- •Возбудители болезней, формирующие колонии на универсальных питательных средах
- •Дифференциация патогенных стафилококков от непатогенных и условно-патогенных
- •Вопросы для самопроверки
- •Учебно-исследовательская и научно-исследовательская работа студентов Порядок выполнения работы по выбранной теме исследования
- •Возможные схемы выполнения исследований по некоторым темам*1 Микрофлора почвы
- •Микрофлора растений: эпифитная и ризосферная микрофлора (сырьё для пищевых продуктов и пищевые продукты растительного происхождения)
- •Микрофлора воды, соков, напитков, вин
- •Микрофлора воздуха
- •Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы
- •Анализ бактериальных препаратов
- •Значение питательных элементов для микробов
- •Особенности произношения латинских названий микроорганизмов
- •Произношение гласных
- •Произношение согласных
- •Задания для самостоятельной работы студентов
- •Контрольные вопросы
- •Устройство микроскопа и техника микроскопирования бактериальных препаратов
- •Введение в микробиологию
- •Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы
- •Морфологическое строение прокариотической клетки
- •Превращение микроорганизмами соединений азота
- •Превращение микроорганизмами соединений углерода. Типы метаболизма
- •Отличительные признаки возбудителей брожений
- •Морфология: споры и спорообразование
- •Рост и размножение
- •Питание микроорганизмов: питательные среды
- •Материалы и оборудование для выполнения работ
- •Литература Основная
- •Дополнительная
- •Методические указания к оформлению отчёта об исследовании по выбранной теме
- •Постановка исследования.
- •Анализ исследования.
- •Состав и уплотнители питательных сред
- •Состав некоторых питательных сред (г/л)
- •Состав питательной среды для роста почвенных грибов (г/мл)
- •Уплотнители питательных сред
- •Фиксирующие жидкости
- •Реактивы
- •Определение каталазы
- •Метод измерения величины бактериальной клетки
- •Направление 560400 (110400.62) «Зоотехния»
- •Темы для самостоятельной работы студентов Общая микробиология
- •Сельскохозяйственная микробиология
- •Микробиология
- •173003, Великий Новгород, ул. Б. Санкт-Петербургская, 41.
- •173003, Великий Новгород, у л. Б. Санкт-Петербургская, 41.
Микрофлора плодов и овощей
Состав естественной эпифитной микрофлоры плодов и овощей зависит от вида и сорта растения, климата и местонахождения (открытый или защищённый грунт). Играет роль и стадия развития, особенно степень зрелости плодов, ягод, овощей. Плодовые овощи, развивающиеся вблизи поверхности почвы, инфицируются почвенной микрофлорой, поскольку в 1 г пахотной почвы численность микроорганизмов может достигать нескольких миллиардов клеток. Микроорганизмы переносятся с воздушными потоками, и в 1 м3 бывает до нескольких тысяч микробных клеток и спор бацилл, актиномицетов и плесневых грибов.
На поверхности плодов и овощей распространены дрожжи рода Saccharomyces, плёнчатые дрожжи родов Pichia (пихия), Hansenula (хансенула), Debaryomyces (дебариомицес). Много пигментных и слизеобразующих дрожжей родов Sporobolomyces (спороболомицес), Rhodotorula (родоторула), Torulopsis (торулопсис), Hanseniospora (хансениоспора), Candida (кандида), Cryptococcus (криптококкус), Pullularia (пуллулариа), Trichosporon (трихоспорон). Представители этих родов устойчивы к солнечной радиации.
На поверхности плодов и ягод среда кислая, поэтому дрожжей больше, чем бактерий (кислотность лимонов, клюквы, винограда, ананаса – 2,5–3,5, апельсинов, яблок – 3,5–4,5, бананов – 4,5–5). Исключение составляют молочнокислые и уксуснокислые бактерии, для которых такая кислотность оптимальна или допустима.
Молочнокислые бактерии на поверхности плодов и ягод представлены видами Streptococcus lactis (на капусте, салате, малине, яблоках, картофеле), Streptococcus cremoris (на капусте, картофеле, спелом винограде), на поливных участках – видом Streptococcus feacalis, на капусте – видами родов Pediococcus и Leuconostoc. Среди палочковидных молочнокислых бактерий доминируют Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis, Lactobacillus fermentum.
Доля молочнокислых бактерий среди эпифитов зависит от вида растения. Численность этих бактерий на капусте белокочанной и краснокочанной, плодах огурца, томата, на укропе колеблется в пределах 104–106 клеток в 1 г; на тыкве, картофеле, свёкле – 102, на ягодах вишни и зрелых неповреждённых ягодах винограда – единичные клетки, на повреждённых и испорченных ягодах винограда – от тысяч до миллионов клеток.
Численность и состав микрофлоры на плодах, овощах, корнеплодах и клубнях зависит от погодных условий, типа почвы: в 1 г болгарского перца, зелёного горошка – несколько миллионов клеток, на 1 см2 листьев салата – от n × 105 до n × 107 клеток, на плодах груши и сливы на 1 см3 от n × 104 до n × 105, на 1 см3 абрикосов, персиков n × 104, на 1 см3 яблок в пределах n × 102, в 1 г клубней картофеля, свёклы, репы, моркови количество микробов колеблется от n × 107 до n × 109. На картофеле широко представлены не только эпифитные и ризосферные микроорганизмы, но и почвенные, такие как бациллы, клостридии, псевдомонады, микрококки, актиномицеты, встречаются и плесневые грибы, и простейшие.
Количественный состав микроорганизмов на ягодах зависит от вида растения, степени спелости ягоды и погодных условий, в том числе и от момента сбора урожая. На малине, почти не обладающей фитонцидной активностью, количество микроорганизмов значительно выше, чем на землянике. Земляника, особенно лесная, вообще считается стерильной ягодой, поскольку обладает сильным фунгистатическим и бактериостатическим действием вследствие наличия летучих ароматических веществ – фитонцидов. В индивидуальных садах землянику часто опрыскивают или удобряют фекалиями. В этом случае ягоды могут служить источником глистных заболеваний.
На многих овощах чаще встречаются бактерии родов Alcaligenes (алкалигенес), Flavobacterium (флавобактериум), Micrococcus. На поверхности корнеплодов моркови, свёклы и др. в большом количестве обнаруживаются спорообразующие бактерии родов Bacillus и Clostridium (отдельные виды обнаруживаются в 100% проб). В то же время на обсеменённость клостридиями баклажанов, томатов, капусты приходится не более чем 10% от всего количества выделенных микроорганизмов.
Промывание проточной водой и последующая сушка на солнце или просто высушивание на солнце снижают численность микроорганизмов на клубнях и корнеплодах.
Эпифитная микрофлора свежих плодов и овощей не может стать причиной заболевания человека, даже если их есть немытыми. Заболевания вызывают патогенные микроорганизмы: бактерии кишечной группы, стафилококки, энтеровирусы (кишечные вирусы), возбудитель сибирской язвы (Bacillus anthracis), столбняка (Clostridium tetani), ботулизма (Clostridium botulinum), холерный вибрион (Vibrio cholera), а также дрожжи – возбудители кандидомикозов.
В почве патогенные микроорганизмы сохраняют жизнеспособность от 1 до 12 месяцев и более. При комнатной температуре некоторые из них жизнеспособны: на яблоках 1–15 дней, на малине 1–5. Примерно столько же дней выживают бактерии рода Shigella (шигелла) и холерный вибрион на плодах огурца, редисе, зелёном луке, грушах, сливе, винограде, смородине. Возбудитель сальмонеллёза (Salmonella typhi) сохраняет жизнеспособность в почве до 5 недель.
На плоды и овощи патогенные микроорганизмы попадают из различных источников: от больных людей и животных с мокротой, слюной, гнойными выделениями; с кожи, ногтей, загрязнённых предметов, с грязного инвентаря, с оборудования, тары, транспортных средств, почвы; заносятся ветром, мухами, больными птицами, грызунами; с фекалиями, которыми могут удобрять культуры.
Особенно опасен перенос микроорганизмов с зелёными овощами, которые не подвергают термической обработке. Запрещено орошение овощных полей фекальными сточными водами, отходами очистных сооружений. При исследовании продаваемых на рынках овощей часто выделяют кишечную палочку (до 40% обследованной продукции). Следует тщательно промывать проточной водой зелёные овощи (салат, петрушку, сельдерей, укроп, кинзу и др.), при этом эпифиты остаются на поверхности плодов и овощей. Кислоты плодов и овощей оказывают бактерицидное действие на патогенные микроорганизмы, эпифитная микрофлора также антагонистически действует на них.
Безвредная эпифитная микрофлора может стать причиной порчи плодов и овощей в ряде случаев: при неблагоприятных погодных условиях в день сбора урожая, механических повреждениях, нарушении условий транспортировки и хранения. Плоды и овощи содержат влагу и различные органические вещества, поэтому являются прекрасным естественным питательным субстратом для микробов, поскольку последние находят в них все необходимые питательные элементы. Проникнув в повреждённую растительную ткань, микроорганизмы начинают размножаться, потреблять питательные вещества, выделяя при этом различные метаболиты, в том числе с неприятным запахом и ядовитыми свойствами. Продукт портится. Обычно процесс порчи начинают плесневые грибы, так как кислая среда является для них благоприятной. В дальнейшем, с изменением кислотности, в процессах порчи начинают принимать активное участие бактерии.
Порчу плодов и овощей вызывают главным образом микроорганизмы. В отдельных случаях причиной порчи могут быть физико-химические реакции, протекающие в продуктах.
Наиболее устойчива к проникновению микроорганизмов в течение длительного времени неповреждённая кожица плодов и овощей, на которой отсутствует влага (вода или сок из повреждённых экземпляров), особенно если они хранятся в прохладном и сухом, подвергнутом дезинфекции помещении при оптимальном сочетании температуры, влажности, состава газовой среды. Необходимо учитывать степень зрелости, сорт, реакцию клеточного сока и характер обращения с плодами и овощами.
