Культуральные признаки бактерий

Культуральные признаки	Световые режимы выращивания микробов
	В темноте	В темноте после кратковременной обработки УФ-излучением	В темноте после длительной обработки УФ-излучением
Форма
Размер
Поверхность
Профиль
Блеск и прозрачность
Цвет
Край
Структура
Консистенция
Степень развития культуры

Задание 8. Микроскопическое исследование. Приготовить фиксированные препараты, окрашенные по Граму, из каждой популяции микробов (из каждого сектора или чашки Петри, если опыт ставился без разделения её на сектора). Микроскопировать ×1500. Проанализировать и описать микробную картину, сравнив размеры клеток, и отметить другие морфологические различия и изменения до воздействия излучения и после. Оформить протокол исследования.

Лабораторная работа 14 Антагонизм микроорганизмов

Цель работы: выявить микробы-антагонисты и изучить их антибиотическую активность.

В случае антагонистических отношений микроорганизм выделяет в окружающую среду продукты обмена веществ, которые могут угнетать рост других микроорганизмов либо убивать их.

Антибиотические вещества, выделяемые микроорганизмами-продуцентами, хорошо диффундируют в толщу агара (у бактерий – за 4–6 суток, у грибов – за 6–8 суток, у актиномицетов – за 8–10 суток). Эта особенность и используется в методах изучения взаимоотношений в биотическом сообществе.

Постановка исследования

Задание 1. На поверхность застывшего мясо-пептонного агара (ПАС-1, ПАС-2) в чашке Петри нанести микробиологической петлёй широкую полоску культуры, продуцирующей антибиотическое вещество, а перпендикулярно к ней параллельными штрихами (рис. 15) сделать посев культур тест-организмов (например, бактериальных культур, выделенных из воздуха). Чашки поместить в термостат при температуре 25–28 ^оС на 5–7 суток.

Рис. 15. Схема посева: широкая полоса – микроорганизм, продуцирующий антибиотик;

пять штрихов – тест-организмы

Задание 2. Первый вариант (рис. 16). На поверхности мясо-пептонного агара (ПАС-1, ПАС-2) в чашке Петри сделать небольшое углубление (на рисунке – овал в центре), в которое налить раствор антибиотика (пенициллина, стрептомицина, тетрациклина, эритромицина и др.).

Вокруг углубления произвести посевы различных культур бактерий (на рисунке – восемь штрихов).

Второй вариант (рис. 16). В небольшое углубление (овал в центре) сделать посев микроорганизма, продуцирующего антибиотик, а вокруг – тест-организма (восемь штрихов), реагирующего на антибиотическое вещество.

Рис. 16. Схема посева: овал в центре – микроорганизм-антагонист, продуцирующий

антибиотическое вещество, либо антибиотик; восемь штрихов вокруг – тест-организмы, испытываемые на антибиотическое вещество

Чашки поместить в термостат для инкубирования при температуре 25–28 ^оС на 3–7 суток.

Задание 3. Использовать метод агаровых блочков (рис. 24).

Поверхность питательного агара засеять сплошным «газоном» антаго­ниста (стерильным шпателем растереть микробную массу по поверхности застывшей питательной среды). После того как организм хорошо разовьётся и образует антибиотическое вещество, которое диффундирует в толщу агара (для бактерий – 4–5 суток, для грибов – 6–8 суток, для актиномицетов – 8–10 суток), стерильным пробочным сверлом вырезать агаровые блочки и перенести их на поверхность другой агаровой пластинки в чашке Петри, предварительно засеянной тест-организмом.

Инкубировать в термостате при температуре 26–28 ^оС, длительность инкубирования за­висит от скорости роста тест-организма (обычно 3–7 суток).

Анализ исследования

Задание 4. Антибиотик, диффундируя в агар, будет воздействовать по-разному на тест-организм, который будет развиваться на неодинаковом расстоянии от места нанесе­ния микробной полоски антагониста, углубления агарового блока либо непосредственно от антибиотика. Образование зон отсутствия роста тест-культуры, характер роста необходимо пронаблюдать и сделать вывод о влиянии антибиотика на тот или иной вид бактерий. Максимальное действие антибиотика проявляется на том организме, развитие которого начинается на большем расстоянии от штриха, углубления, блока. По размеру (диаметру) зон сделать вывод об антибиотической активности изучаемого микроорганизма. Данные занести в нижеприведённую таблицу.

Микроорганизм- антагонист	Тест-организм	Расстояние от антагониста, на котором наблюдался рост тест-организма	Характер роста и другие особенности