Окраска капсул по методу Михина

Зафиксировать мазок, окрасить метиленовым голубым (лучше старым раствором) в течение 2–3 мин при подогревании. Краситель быстро смыть водой, мазок высушить. Микроскопировать ×1500.

Тела микробных клеток окрашиваются в тёмно-синий цвет, капсулы – в светло-розовые или розово-красные тона.

Окраска жгутиков

Жгутики – тончайшие образования (0,02–0,04 мкм), легко отрываются от клетки при обработке. Это затрудняет их исследование. В основе методов окрашивания жгутиков лежит обработка их протравителями, в результате которой они увеличиваются в объёме и становятся видны в биологический микроскоп.

Необходимо подготовить микробную культуру к прокрашиванию. Несколько дней подряд необходимо делать пересевы на свежую питательную среду (в жидкую среду или в конденсационную воду свежей скошенной агаризированной среды). В день приготовления препарата петлёй перенести микробов в пробирку с 5–6 мл стерильной водопроводной воды температурой 37 ^оС. Петлёй работать осторожно, не перемешивать культуру с водой! Культуре дать распределиться в воде, выдержав её в течение 30–60 мин при комнатной температуре. Приготовить живой препарат «висячая капля» и убедиться в подвижности микробов. В случае отсутствия подвижности выдержать культуру в термостате около 2 суток при температуре 35–37 ^оС.

Принципиальное значение имеет чистота предметных стёкол. Стёкла кипятят в растворе бихромата калия в крепкой серной кислоте, затем дважды промывают в растворе едкого натра. После промывают водой и помещают на хранение в банку с 96% спиртом. Перед приготовлением мазка необходимо сильно нагреть ту сторону стекла, на которую будет сделан мазок, стекло после нагревания охладить.

Методика окраски:

1. Суспензию бактерий нанести на предметное стекло и высушить при комнатной температуре. Допускается фиксация препарата быстрым одноразовым проведением над пламенем горелки.

2. Обработать препарат протравителем в течение 3–5 мин (0,5% раствором соляной кислоты), нагревая его до появления паров, или без нагревания выдержать в течение 15–20 мин.

3. Промыть сильной струёй дистиллированной воды в течение 30 сек и высушить на воздухе.

4. Окрасить препарат при лёгком нагревании (до появления пара) карболовым фуксином Циля либо раствором, содержащим 1 часть насыщенного спиртового раствора фуксина в 10 частях воды, в течение 3–4 мин.

5. Препарат промыть водой, высушить. Микроскопировать ×1500.

Жгутики и клетки бактерий окрашиваются в розовый цвет.

Окраска волютина по методу Омелянского

1. Высушить и зафиксировать мазок культуры дрожжей.

2. Окрасить мазок основным феноловым Циля в течение 30–40 сек.

3. Промыть мазок водой.

4. Погрузить стекло в 1% раствор серной кислоты на 20–30 сек и сразу промыть водой.

5. Окрасить слабым раствором метиленового голубого (1:40) в течение 15–20 сек. Микроскопировать ×600, ×1500.

На препарате зёрна волютина окрашены в красный цвет, цитоплазма – в голубой.