37.Специфические участки взаимодействия рнк-полимераз с днк. Структура промоторов. Стартовая точка, положения по ходу транскрипции и положения против хода транскрипции. Блок Прибнова и –35-блок.

В основе синтеза РНК лежит реакция полимеризации между 5`-коцевой трифосфатной группой присоединяемого нуклеотида и 3`-ОН группой последнего нуклеотида цепи РНК, который расположен в центре связывания затравки. Другой центр, занимаемый следующим присоединяемым НТФ, называется участком элонгации.Первый нуклеотид взаиодействует с участком РНК_полимеразы,который должен отличаться от участка элонгации. Этот центр называется участкоми инициирующего нуклеотида и в целом перекрывается с участком связывания затравки.

Промотор – послед-ть ДНК, с которой взаимодействует РНК-полимераза, инициирующая транскрипцию.Прилегающие области могут оказывать влияние на способность РНК-полимиразы инициировать транскрипцию. Необходимы белковые факторы, распознающие последовательности ДНК, расположенные рядом с промотором,поскольку одной РНК-полимеразы недостаточно. Внутри промоторов располагаются прочные участки связывания холоферментов РНК-полимеразы. Эти фрагменты явл. Защищенными последовательностями в середине которых располагается стартовая тчк.

Стартовая точка – это тот нуклеотид в значащей цепи ДНК, который определяет включение первого нуклеотида в растущую цепь иРНК. ДНК, предшествующая стартовой точке – после-ть, расположенная против хода транскрипции; участок ДНК после стартовой точки - после-ть, расположенная по ходу транскрипции.

Стартовая точка обозначается как +1. Транскрипция происходит слева направо (от 5`-конца к 3`-концу), то по ходу транскрипции происходит увеличение порядковых номеров нуклеотидов и обознач-ся со знаком +. Позиции оснований, расположенных против хода транскрипции обозначаются со знаком -.

Стартовой точкой является обычно пуриновое основание (А в 2 раза чаще, чем G). Стартовая точка находится в середине последоват-ти GAT.

Против хода транскрипции от стартовой точки располагается область из 6 пар нуклеотидов – ТАТААТ – блок Прибнова. Состоит исключительно из пар А-Т. Его функционирование связ. с плавлением ДНК и образованием одноцепочечных уч .Центр блока Прибнова располагается примерно на расстоянии в 10 пар нуклеотидов от стартовой точки против хода транскрипции (-10).

Сходная послед-ть обнаруживается в другом месте промотора с центром около положения -35 против хода транскрипции – TTGACA – блок -35. Эта послед-ть представляет собой область узнавания, т.к. она узнается РНК-полимеразой, но не входит в область прочного связывания.

Блок -35 и блок Прибнова разделены 16-19 парами нуклеотидов. Делеции или вставки снижают активность промоторов.

Мутации в блоке Прибнова, приводящие к повышению степени гомологии с послед-ю ТАТААТ, вызывают усиление транскрипции, и наоборот, мутации, понижающие степень гомологии с данной послед-ю, ослабляют транскрипцию.

38. Классификация рнк-полимераз эукариот.

Уэукариот обнаружены три ядерные РНК-полимеразы, отличающиеся разной локализацией в ядре и состоящие из большого числа субъединиц.

Основная часть полимеразной активности приходится на долю РНК-полимеразы I, которая обнаруживается в ядрышках и ответственна за транскрипцию генов рРНК. На долю этого фермента приходится 50-70% клеточного синтеза РНК и эта РНК-полимераза стимулируется в равной степени ионами Mn⁺² и Mg⁺².

РНК-полимераза II. Локализована в нуклеоплазме (все ядро за исключением ядрышка).. Эта РНК-полимераза намного сильнее стимулируется ионами Mn⁺², чем ионами Mg⁺².Синтезирует 20-40% всех молекул РНК в клетке и ответственен за синтез гетерогенных ядерных РНК (гяРНК), которые являются предшественниками иРНК

РНК-полимераза III представляет собой минорную ферментативную активность.обеспечивает 10% клеточного синтеза РНК, локализована в нуклеоплазме и осуществляет синтез малых ядерных РНК (мяРНК) и тРНК.