Сущность метода

Метод основан на образовании азокрасителя в результате двух реакций: реакции диазотирования сульфаниловой кислоты нитритом в подкисленной (соляной кислотой) среде и реакции азосочетания продиазотированного продукта с кислотой «Чикаго СС» (калиевая соль 1-амино,8-нафтол,2,4-дисульфокислоты) в щелочной среде, образующейся после добавления раствора аммиака. Окраска появляется быстро и устойчива в течение длительного времени. Интенсивность окраски определяется количеством образовавшихся окрашенных продуктов, эквивалентных количеству нитрита в исследуемой вытяжке.

Аппаратура, материалы и реактивы

1. Стакан химический вместимостью 150-200 см³;

2. колба коническая вместимостью 150-200 см³;

3. колба мерная вместимостью 100 см³;

4. пипетки вместимостью 5 см³;

5. пробирки;

6. марля или вата;

7. бумага фильтровальная.

Стандартный раствор азотистокислого натрия. 0,15 г NaNO₂ х.ч. растворяют в мерной колбе вместимостью 1 дм³ дистиллированной водой непосредственно перед анализом. 25 см³ полученного раствора разбавляют водой в мерной колбе вместимостью 500 см3. 1 см³ этого раствора содержит 0,0075 мг NaNO₂.

Солянокислый раствор сульфаниловой кислоты (реактив № 1). 0,120 г х.ч. сульфаниловой кислоты при нагревании растворяют в 100 см³ дистиллированной воды. По окончании растворения добавляют 100 см³ 1 моль/дм³ соляной кислоты и перемешивают. Раствор может сохраняться в обычных условиях не более года.

Водный раствор "Чикаго СС" кислоты (реактив № 2). 0,2137 г 100 % состава "Чикаго СС" кислоты в порошке растворяют при комнатной температуре в мерной колбе вместимостью 250 см³ дистиллированной водой, объем доводят до метки. Раствор следует хранить в банке из темного стекла. Продолжительность хранения раствора - один месяц. Если "Чикаго СС" не чистый продукт, то следует сделать соответствующий пересчет.

Аммиак, водный раствор концентрации 100 г/дм³.

Методика работы

Приготовление цветной стандартной шкалы эталонов. В мерную колбу вместимостью 100 см³ пипеткой наливают 11 см³ стандартного раствора нитрита натрия. Туда же вводят 4 см реактива № 1 и 0,5 см³ реактива № 2. Раствор слегка взбалтывают. В полученный раствор (также при взбалтывании) добавляют 5 см³ раствора аммиака, и объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. Стандартную шкалу готовят разбавлением исходного окрашенного раствора дистиллированной водой. Соотношения приведены в табл.1. Стандартную шкалу рекомендуется готовить в пробирках из бесцветного стекла одинакового диаметра и хранить в темном месте. Цветной стандартной шкалой можно пользоваться в течение 1-2 месяцев.

Приготовление вытяжки из фарша. Навеску фарша массой 10 г помещают в химический стакан или коническую колбу вместимостью 150-200см³, приливают 100 см³ дистиллированной воды. Содержимое колбы (стакана) настаивают 30 мин, периодически перемешивая стеклянной палочкой, после чего вытяжку фильтруют через четырехслойный марлевый фильтр или вату, или складчатый бумажный фильтр (для приготовления вытяжки из сырокопченых продуктов берут навеску фарша массой 3 г).

Приготовление окрашенного раствора. В мерную колбу вместимостью 100см³ переносят пипеткой 10см³ фильтрата. Приливают пипеткой вначале 4см³ реактива № 1, а затем 1 см³ реактива № 2. После легкого взбалтывания раствора в колбу приливают 5см³ раствора аммиака (избыток аммиака не влияет на окраску раствора), раствор перемешивают, и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Таблица 1 – Стандартная шкала разбавления

№ пробирки	Количество исходного окрашенного раствора, см3	Количество дистиллиро­ванной воды, см3	Содержание NaNО2, мг в 1 см3 раствора	Содержание NaNО2, мг на 100 г продукции при навеске 10 г и объеме вытяжки 10 см3
1	11	0	0,825 • 10-3	8,25
2	10	1	0,750 • 10-3	7,50
3	9	2	0,675 • 10-33	6,75
4	8	3	0,600 • 10-3	6,00
5	7	4	0,525 • 10-3	5,25
6	6	5	0,450 • 10-3	4,50
7	5	6	0,375 • 10-3	3,75
8	4	7	0,300 • 10-3	3,00
9	3	8	0,225 • 10-3	2,25
10	2	9	0,150 • 10-3	1,50
11	1	10	0,075 • 10-3	0,75

При появлении интенсивно фиолетово-малиновой или желто-коричневой окраски (это указывает на значительное содержание нитритов в продукте) следует приготовить новый испытуемый окрашенный раствор, соответственно уменьшая количество фильтрата.

В случае не появления окрашивания или получения очень слабой окраски раствор выдерживают 3-5 мин, и затем уже доводят объем до метки дистиллированной водой.

Приготовленный окрашенный раствор наливают в пробирки из бесцветного стекла в том же объеме, как и в стандартной шкале, и сравнивают степень окраски. Сравнить окраску растворов можно в отраженном свете на листе белой бумаги.

При сравнении окрасок растворов отмечают номер пробирки в стандартной шкале, цвет которой совпадает с окраской испытуемого раствора. Затем по таблице находят содержание нитрита натрия в 1 см³ воды для данного номера пробирки.