2.7. Лабораторная работа №3 Комплексонометрическое определение содержания общего кальция в сыворотке крови крупного рогатого скота

Сущность метода. Кальций составляет почти треть всех минеральных веществ в животном организме и играет исключительно важную роль. Основная масса кальция сосредоточена в костной ткани в виде фосфатов, карбонатов и фтористых соединений. В сыворотке крови 40% кальция связано с альбуминами в виде сложных комплексных соединений. Кальций, как двухвалентный катион, понижает возбудимость нервной системы, регулирует проницаемость клеточных мембран, возбуждает сердце, избирательно активирует либо тормозит функции некоторых ферментов, способствует свертыванию крови. Содержание кальция в сыворотке крови зависит от вида, возраста и физиологического состояния животного и является объективным показателем состояния минерального обмена и степени обеспеченности организма этим катионом.

Таблица 2.7.1. Содержание кальция в сыворотке крови  разных видов животных

Животное	мг%	моль/л*
Корова	11,0-13,0	2,74-3,24
Теленок	11,0-12,0	2,74-2,99
Свинья	11,0-13,0	2,74-3,24
Курица	13,0-20,0	3,24-4,99
Лошадь	12-14	2,74-4,03
Верблюд	11-12	2,74-2,99
Овца	11-12,5	2,74-3,13
Коза	23-26	5,75-6,5
Собака	10-12	2,5-3,0

*Для пересчета мг% в моль/л (единицы СИ) результат умножают на 0,25.

Снижение концентрации кальция в крови (гипокальцемия) наблюдается при неполноценном кормлении, рахите, остеомаляции, нефрозах, родильном парезе, а повышение (гиперкальцемия) – при гипервитаминозе витамина D, гиперфункции передней доли гипофиза, метаболическом ацидозе, острой атрофии костей. Все это говорит о необходимости постоянного контроля за содержанием кальция в сыворотке крови животных.

Кальций образует с мурексидом (пурпурат аммония) комплексное соединение розового цвета. Под действием более сильного комплексообразователя трилона Б (ЭДТА или динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты) мурексидокальциевый комплекс разрушается и образуется новый трилонкальциевый комплекс. Освобождающийся мурексид окрашивает раствор в сине-фиолетовый цвет. По количеству израсходованного на титрование трилона Б рассчитывают концентрацию кальция в сыворотке крови.

Ход работы. Разбавляют 2 мл сыворотки крови в 48 мл дистиллированной воды, добавляют 0,4 мл 9 н раствора гидроксида натрия и шпателем немного мурексида. Раствор принимает розовое окрашивание. Далее титруют 0,01 н раствором трилона Б до тех пор, пока окраска смеси не станет фиолетовой. Параллельно титруют контрольную пробу, используя вместо сыворотки дистиллированную воду. Записывают объем трилона Б, израсходованного на титрование контрольной и опытной пробы.

Обработка результатов. Содержание кальция в сыворотке крови (Х, мг%) рассчитывают по формуле:

Х = 0,2 ∙ (А - В) ∙ 50,

где 0,2 – количество мг кальция, которое соответствует 1 мл 0,01 н раствора трилона Б;

А – количество мл 0,01 н раствора трилона Б, пошедшего на титрование опытной пробы;

В – количество мл 0,01н раствора трилона Б, пошедшего на титрование контрольной пробы;

50 – коэффициент пересчета количества кальция на 100 мл сыворотки крови.