2.13. Лабораторная работа №9 Спектрофотометрический метод определения содержания белка в сыворотке крови
Сущность метода. Определение белков основано на их способности поглощать ультрафиолетовые лучи определенной длины волны. Большинство белков имеет максимум поглощения при длине волны 280 нм.
Оборудование. 1. Пробирки. 2. Пипетки на 1 и 5 мл. 3. Спектрофотометр.
Ход работы. Сыворотку крови разводят физиологическим раствором в 250 раз (0,1 мл сыворотки доводят до 25 мл). Наливают этот раствор в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при 280 нм против физиологического раствора.
Построение калибровочного графика. Готовят стандартный раствор белка: 100 мг кристаллического альбумина растворяют в 100 мл физиологического раствора. В 1 мг такого раствора содержится 1 мг (1000 мкг) белка.
В пробирки наливают по 0,5; 1; 1,5; 2,5 мл стандартного раствора белка и объем доводят физиологическим раствором до 5 мл. Содержание белка в 1 мл в этих пробирках равняется 100, 200, 300, 400, 500 мкг. Затем определяют оптическую плотность растворов белка в этих пробирках на спектрофотометре.
При построении калибровочного графика на оси абсцисс концентрацию белка мкг/мл, а на оси ординат – найденную величину оптической плотности. Исходя из графика, можно вычислить процентный коэффициент экстинкции, поделив оптическую плотность на соответствующую концентрацию. Он дает возможность вычислить содержание белка в пробе, не обращаясь, каждый раз к графику.
Обработка результатов. Количество белка в сыворотке выражают в грамм-процентах (г%) и рассчитывают по формуле:
где С – концентрация белка в пробе в мкг/мл (по графику); В – разведение сыворотки (250).
2.14. Лабораторная работа №10 Контроль качества молока с использованием ультразвукового анализатора «Лактан-1,4»
Сущность метода. Анализатор качества молока «Лактан 1-4» предназначен для измерения массовой доли жира, сухого обезжиренного молочного остатка (СОМО) в молоке, сливках, мороженном и концентрированном молоке, а также плотности молока ультразвуковым методом. Массовая доля добавленной воды определяется только для натурального молока. Для других типов продуктов показания воды будут некорректными.
Анализ может использоваться для проведения экспресс-анализов при заготовке, приемке и переработке молока, а также в селекционной работе.
В основу работы анализатора «Лактан 1-4» положен метод измерения скорости ультразвука в молоке при двух различных температурах (40-43˚С и 60-83˚С) и степень затухания звуковых колебаний при прохождении их через продукт. Каждое измерение включает отбор проб продукта, их подготовку и снятие показаний анализатора (параллельные определения).
Оборудование. Ультразвуковой анализатор молока «Лактан 1-4»; баня водяная термостатируемая с обогревом, позволяющая поддерживать температуру (25±2)˚С и (45±2)˚С; термометр жидкостный с диапазоном измерения, включающим значения 25 и 45˚С, и ценой деления шкалы 1˚С; колба для проб молока.
Рис. 2.14.1. Общий вид ультразвукового анализатора «Лактан 1-4»
Ход работы. Анализ включает в себя несколько этапов.
Подготовка пробы молока. К анализу допускается свежее, консервированное, пастеризованное, нормализованное, восстановленное, обезжиренное молоко и молоко длительного хранения.
При наличии слоя отстоявшихся сливок молоко нагревают в водяной бане до температуры (40±5)˚С и тщательно перемешивают путем переливания из сосуда в сосуд (не менее 3-х раз). Затем пробу охлаждают до температуры (20±5)˚С.
Рабочий объем анализируемой пробы молока – 25мм3; кислотность анализируемого молока – не более 25Т˚; температура анализируемого продукта – (20+5)˚С.
Работа с анализатором. Соедините анализатор с блоком питания. Установите пробоприемник в держатель. Установите анализатор на горизонтальной плоскости, обеспечив удобство работы и условия естественной вентиляции. Присоедините источник питания к сети переменного тока 220В. Затем присоедините выходной разъём источника к гнезду питания анализатора. На дисплее появится надпись:
ЛАКТАН 1-4 МИНИ Ver: m19_15f
|
Через 2 секунды в нижней строке появится серийный номер вашего анализатора, а затем номер текущего анализируемого продукта (номер градуировки).
Анализатор включит режим прогрева и на дисплее появится надпись:
ПОДОЖДИТЕ… |
Время прогрева анализатора – не более 5 минут. После подогрева на дисплее появится надпись:
ЗАЛЕЙТЕ ПРОБУ… |
Измерения. Убедитесь, что анализатор готов к работе - на дисплее выведено сообщение:
ЗАЛЕЙТЕ ПРОБУ… |
Залейте пробу в воронку. Анализатор начнет измерение автоматически. На дисплее появится сообщение:
ИЗМЕРЕНИЕ… |
Во время измерения нижняя строка индикатора будет заполнять прямоугольниками. Процесс измерения завершится, когда вся нижняя строка заполнится прямоугольниками. После окончания измерений на дисплее появится результат:
Ж: 1,77 С: 8,54 В: 0 П: 32,87
|
Если перерыв между измерениями более часа или работа анализатора окончена, то необходимо произвести промывку анализатора. Остаток молока в измерительном канале может привести к поломке анализатора.
- подогрейте проточную воду до 60-70˚С. Разведите в ней стиральный порошок в пропорции 3г порошка (чайная ложка) на 0,5л воды или СМС «FАIRY» (1 капля на 20 мл воды);
- отсоедините шнур питания от сети;
- налейте промывочную жидкость в пробоприемник;
- подсоедините шприц для промывки к штуцеру и сделайте 5 – 7 перекачек шприцем;
- смените промывочную жидкость и повторите промывку;
- смените промывочную жидкость на чистую проточную воду и промойте еще раз;
- меняйте воду до тех пор, пока вода не станет чистой;
-промойте измерительный канал анализатора дистиллированной водой;
- продуйте канал пустым шприцем.
После промывки первое измерение в расчет не брать, т.к. в анализаторе накопились капли воды и данные первой пробы будут некорректными.
Обработка результатов. Сокращения, принятые на индикаторе: Ж – жир; С – СОМО; В – вода. Все величины отображаются в %. Данные по плотности (П) отображаются в сокращенном виде. Показание 32,87 нужно понимать как 1032,87 кг/м3.