2.8. Лабораторная работа №4 Определение нитритов в кормах с использованием реактива Грисса

Сущность метода. Метод основан на извлечении нитритов из проб дистиллированной водой и взаимодействием их с α-нафтиламином и сульфаниловой кислотой в кислой среде с образованием азосоединения розово-красного цвета.

Оборудование. 1.Фотоэлектроколориметр. 2. Химические пробирки. 3. Пипетки на 1 и 10 мл. 4. Мерные колбы на 500 и 1000 мл. 5. Конические колбы. 6. Химические стаканы. 7. Мешочки или пленки для диализа. 8. Цилиндры на 10, 50 и 100 мл.

Реактивы. 1. Сульфаниловая кислота. 2. α-нафтиламин. 3. Уксусная кислота концентрированная. 4. Натрия нитрат. 5. Реактив Грисса: а) 0,5г сульфаниловой кислоты растворяют в 150 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты; б) 0,1г α-нафтиламина растворяют при нагревании в 20 мл дистиллированной воды, фильтруют и смешивают со 150 мл 12%-ного раствора уксусной кислоты. Перед употреблением одну часть раствора «а» смешивают с равной по объему частью раствора «б». растворы «а» и «б» хранят отдельно. 6. Калибровочный раствор натрия нитрита основной: 0,15 г высушенного при температуре 70 – 80 ⁰С NaNO₂ растворяют в 1 л дистиллированной воды. Раствор хранят в холодильнике, он устойчив в течение 1 мес 1 мл этого раствора содержит 0,1 мг NO^-₂. 7. Рабочий калибровочный раствор натрия нитрита. 25 мл калибровочного раствора натрия нитрита основного переносят в мерную колбу на 500 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор должен быть свежеприготовленным. 1 мл содержит 0,005 мг NO^-₂. Этот раствор используют для построения калибровочной кривой.

Ход работы. Для исследования берут 10г измельченного растительного материала. Пробы растительного происхождения, образующие при извлечении нитритов неокрашенные растворы, переносят в конические колбы и заливают 50 мл дистиллированной воды. Нитриты извлекают в течение 1 ч, часто встряхивая содержимое колбы. Затем раствор фильтруют, пробу еще раз смывают 30 мл дистиллированной воды, объединяют эту часть раствора с первой, пропуская через тот же фильтр. Доводят объем до 100 мл и берут 10 мл для анализа на нитриты.

В пробирку с 10 мл анализируемого фильтрата добавляют 0,5 мл реактива Грисса и через 15 мин определяют оптическую плотность анализируемого раствора на ФЭКе при длине волны 536 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной стоя 10мм против дистиллированной воды.

Таблица 2.8.1. Приготовление стандартных растворов

№	Раствор	Дистил-	Содержание
пробирки	натрия нитрита, мл	лированная вода, мл	NO-2, мг
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10	0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0	9,8 9,6 9,4 9,2 9,0 8,8 8,6 8,4 8,2 8,0	0,001 0,002 0,003 0,004 0,005 0,006 0,007 0,008 0,009 0,010

Расчет ведут по калибровочной кривой. Для составления шкалы стандартов в 10 пробирок вносят рабочий калибровочный раствор натрия нитрита в количествах, указанных в таблице.

В каждую пробирку вносят по 0,5 мл реактива Грисса. Через 15 мин после развития окраски определяют оптическую плотность в первых семи пробирках. На оси абсцисс откладывают количество NO^-₂ в мг, а на оси ординат – найденные значения оптической плотности растворов. Оптическую плотность определяют только при наличии прозрачного и бесцветного фильтратов. В противном случае возможно только визуальное определение (сравнение опытной пробирки со стандартной шкалой).

Обработка результатов. Расчет ведут по формуле:

где х – содержание нитритов (нитрит-ионов), мг/кг; V₁ – общий объем фильтрата, мл; В – содержание нитрит-ионов, найденное по калибровочной кривой, мг; 1000 – коэффициент пересчета на 1 кг; V₂ –объем фильтрата, взятый для анализа, мл; Н – масса навески анализируемого образца, г.

При необходимости пересчета в натрия нитрит (мг/кг) найденное количество нитрит-ионов умножают на коэффициент 1,5. Если необходимо величину выразить в мг%, то в приведенной формуле берут коэффициент не 1000, а 100.