29 Сравнительная оценка хроматографических, спектрометрических, белоксвязывающих и других методов, применяемых для определения лекарственных веществ в биологических жид-костях.

Хроматографическими называют многостадийные методы разделения, в которых компоненты образца распределяются между двумя фазами, одна из которых является неподвижной, а другая – подвижной. Неподвижная фаза может быть твёрдым веществом, жидкостью, нанесённой на твёрдый носитель, либо гелем. Неподвижная фаза помещается в колонку, распределяется в виде тонкого слоя, плёнки и т.д. Подвижная фаза может быть газом, жидкостью или сверхкритическим газом (флюидом). Разделение основано на адсорбции, распределении, ионном обмене и т.д., либо на различиях в физико-химических свойствах молекул, таких как размер, масса, объём и т.д. Среди белоксвязывающих методов анализа выделяют иммунохимический. В основе иммунохимических методов анализа лежит высокоспецифичная и высокочувствительная иммунная реакция антигена с антителами. Достоинства метода: быстрота и простота определения; возможность автоматизации и использования для массовых анализов в полевых условиях; не сложная пробоподготовка; высокая точность; не требуется дорогостоящей аппаратуры. Недостатками можно назвать узкую специфичность и влияние компонентов матрицы. Метод применяется для обнаружения вирусов, гормонов, лекарственных препаратов, определения биологически активных веществ. Спектроскопия: Атомно-эмиссионная спектрометрия – это метод определения содержания химического элемента в испытуемом образце посредством измерения интенсивности одной из эмиссионных линий атомного пара элемента. Определениепроводят при длине волны, соответствующей выбранной эмиссионной линии. В основе атомно-эмиссионной спектрометрии лежит использование спектров испускания возбужденных атомов определяемых элементов. Атомно-абсорбционная спектрометрия – это метод определения содержания химического элемента в исследуемом образце посредством измерения поглощения излучения с постоянно заданной длиной волны, соответствующей определяемому элементу. Спектрометрия ядерного магнитного резонанса(ЯМР) основана на существовании постоянного магнитного момента ядер 1H, 13C, 19F, 31P. Во внешнеммагнитном поле(основное поле) такие ядра приобретают целиком определенную ориентацию по отношению к направлению этого поля; ориентация вектора магнитного момента атома соответствует определенным уровням энергии. При заданном напряжении поля переходы между соседними энергетическими уровнями происходят вследствие поглощения электромагнитного излучения характеристических длин волн в диапозоне радиочастот.

30. Методы разделения и концентрирования, используемые в биофармацевтическом анализе.

Разделение и концентрирование проводят в случае, если: 1) проба содержит компоненты, мешающие определению 2) концентрация определяемого компонента ниже предела обнаружения метода; 3) определяемые компоненты неравномерно распределены в пробе.Разделение –процесс распределения компонентов между двумя фазами, которые затем отделяют друг от друга. Процесс концентрирования имеет много общего с процессом разделения в технике выполнения и в теоретическом аспекте. Концентрирование – операция (процесс), в результате которой повышается отношение концентрации или количества микрокомпонентов к концентрации или количеству макрокомпонента. Отличие: При разделении концентрации компонентов могут быть близки, а могут и сильно различаться. При концентрировании концентрации компонентов резко различаются. В ходе концентрирования микроколичество вещества а) собирается в меньшем объеме или массе – абсолютное концентрирование; б) отделяется от макрокомпонента таким образом, что отношение концентрации микрокомпонента к концентрации макрокомпонента повышается –относительное концентрирование. При относительном концентрировании происходит замена матрицы, затрудняющей анализ, на иную -органическую или неорганическую. При разделении и концентрировании предпочтительно распределение между двумя фазами, такими, как: Ж-Ж, Ж-Г, Ж-Т, Т-Г. Основные методы разделения. Осаждение и соосаждение, экстракция, хроматографические методы, электрохимические методы, методы испарения, кинетические методы. Осаждение - разделение основано на различии растворимости. Осаждение используют, как правило, для разделения неорганических веществ. Экстракция – извлечение, выдергивание - метод разделения, выделения и концентрирования. Основана на физико-химическом процессе распределения вещества между двумя несмешивающимися фазами, чаще – водной и органической. Экстракция широко используется для разделения смесей элементов. Электрохимические методы - Электровыделение вещества на твердом электроде в элементном состоянии или в виде какого-то соединения. Для разделения используется разница в потенциалах электровосстановления элементов. Можно выделить группу компонентов, можно –селективно выделить компонент. Методы испарения основаны на различной летучести веществ. Вещество при нагревании переходит из жидкой фазы в газообразную, а затем конденсируется, образуя снова жидкую, иногда твердую фазу.