9.3. Визначення магнію в сироватці крові
Принцип методу. У лужному розчині магній утворює з індикатором – кальмагітом зафарбований комплекс, який визначають фотометрично при довжині хвилі 520 нм. Колір стабільний. Вплив кальцію усувається введенням у реагуючу суміш ЕДТА.
Обладнання: фотоелектроколориметр (КФК-2, КФК-3) або спек-трофотометр, піпетки на 1; 5 мл, пробірки.
Реактиви: 1) реагент 1 (буферний розчин) – 2-метил-2-аміно-1-пропанол, ч (1 моль/л) – 100 мл;
2) реагент 2 (розчин індикатора) – кальмагіт, хч (500 мкмоль/л) – 100 мл;
3) стандартний розчин магнію (0,823 ммоль/л; 20 мг/л), чда – 1,5 мл.
Використовують набір реактивів НВФ “Simko Ltd” (м. Львів).
Приготування робочого реагенту. В пластиковому посуді змішують один об’єм реагенту 1 з одним об’ємом реагенту 2 і ретельно перемішують. Розчин є стабільним 24 години при кімнатній температурі. Як правило, готують такий об’єм робочого реактиву, який буде використано протягом робочого дня.
Хід визначення. До 3 мл робочого реагенту додають 0,05 мл сироватки крові. Суміш перемішують. Одночасно ставлять калібрувальну пробу (3 мл робочого реагента + 0,05 мл стандарту магнію). Витримують 5 хв при кімнатній температурі і колориметрують при довжині хвилі 520 нм на спек-трофотометрі або фотоелектроколориметрі КФК-3 проти контролю в кюветі з товщиною робочого шару 10 мм.
Контроль. До 3 мл реагенту додають 0,05 мл дистильованої води.
Вміст магнію визначають за формулою:
Магній
(ммоль/л) =
,
де Е досл і Е ст – екстинція дослідної проби та стандартного розчину;
0,823 ммоль/л – концентрація магнію у стандартному розчині.
Наприклад: поглинання дослідної проби – 0,123, а стандартного розчину – 0,151. Вміст магнію у дослідній пробі буде становити: 0,123 × 0,823 / 0,151 = = 0,670 ммоль/л.
Примітка. Об’єми дослідного зразка і реагенту можна пропорційно зменшити або збільшити.
9.4. Визначення магнію методом атомно-абсорбційної
спектрофотометрії
Приготування зразків. Для визначення магнію і кальцію в одній пробі 0,05–0,20 мл сироватки розводять 0,1 %-ним розчином лантану хлориду (LaCl3) у співвідношенні 1:100.
Калібрувальний розчин. Розчини з концентрацією Mg 0,5; 1 та 2 мкг/мл готують на тих же рідинах, що і зразки.
Методика вимірювання. Атомно-абсорбційний спектрофотометр (С-115-М1, AAS 30) готують до роботи згідно з настановою з експлуа-тації приладу.
Розпилення калібрувальних розчинів та зразків виконують в окиснювальне полум’я ацетилен-повітря.
Аналітична довжина хвилі – 285,2 нм; відносна чутливість – 1; ширина щілини – 0,1 нм; сила струму лампи – 5 мА; нижня межа визначення – 0,001 мг/л; діапазон оптимальних концентрацій – 0,05–0,5 мг/л.
Діагностичне значення. Діагноз на гіпомагніємію ставлять з урахуванням умісту неорганічного магнію в сироватці крові. У здорової великої рогатої худоби і коней він коливається в межах від 2 до 3 мг/100 мл (0,82–1,23 ммоль/л), овець – 2–3,5 (0,82–1,44), свиней – 2,5–3,5 (1,03–1,44). Зниження вмісту магнію до 1,5 мг/100 мл (0,62 ммоль/л) і менше є типовим показником пасовищної тетанії корів та гіпомагнієвої тетанії телят. При тяжкому перебізі хвороби вміст магнію знижується до 1,1 мг/100 мл і менше (0,45 ммоль/л і менше).