- •Учебники и учебные пособия для студентов высших учебных заведений
- •Введение
- •Оборудование микробиологической лаборатории.
- •Правила работы в микробиологической лаборатории.
- •Тема 1. Микроскопический метод исследования микроорганизмов
- •Световая микроскопия.
- •Фазово-контрастное устройство
- •Темнопольный конденсор.
- •Люминесцентная микроскопия.
- •Электронная микроскопия.
- •Тема 2. Морфология микроорганизмов
- •2.1. Форма бактерий
- •Определение подвижности микроорганизмов.
- •Приготовление красителей и окраска мазков-препаратов. Методы пересева микроорганизмов.
- •Приготовление микроскопических препаратов.
- •Тема 3. Морфология грибов
- •Тема 4. Методы стерилизации
- •Стерилизация паром под давлением
- •Тема 5. Культивирование микроорганизмов
- •Тема 6. Методы выделения чистой культуры. Определение биохимических свойств микробов
- •Тема 7. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Бактериофаги
- •Тема 8. Определение биологических свойств микроорганизмов
- •Упаковка и пересылка патологического материала.
- •Принципиальная схема микробиологического исследования.
- •Определение патогенности.
- •Тема 9. Методы изучения генетики бактерий
- •Индукции мутаций под действием ультрафиолетового излучения
- •Постановка опыта трансформации.
- •Постановка опыта специфической трансдукции.
- •Определение Col-плазмид (колицикогенных факторов).
- •Метод генных зондов.
- •Тема 10. Микробиологические методы исследования объектов окружающей среды
- •Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов.
- •Санитарно-бактернологическое исследование мяса, колбасных изделий к мясных продуктов.
- •Тема 11. Изучение неспецифической резистентности организма и серологические методы диагностики инфекционных болезней
- •Количественное определение лизоцима в сыворотке крови.
- •Количественное определение комплемента в сыворотке крови.
- •Демонстрация фагоцитоза бактерии.
- •Методы оценки иммунного статуса макроорганизма.
- •Серологические методы исследования.
- •Реакция агглютинации (ра).
- •Реакция преципитации (рп).
- •Реакция связывания комплемента (рск).
- •Иммуноферментный метод.
- •Тема 12. Биологические препараты и их контроль
- •Тема 13. Стафилококки и стрептококки
- •Тема 14.Энтеробактерии
- •Тема 15. Бруцеллы и возбудитель туляремии
- •Тема 16. Пастереллы
- •Тема 17. Иерсинии
- •Тема 18. Возбудители рожи и листериоза
- •Тема 19. Псевдомонады
- •Тема 20. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 21. Патогенные анаэробы
- •Возбудитель дизентерии ягнят
- •Возбудитель брадзота овец
- •Возбудитель энтеротоксемии овец
- •Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкар)
- •Тема 22. Патогенные микобактерии Возбудитель туберкулеза.
- •Тема 23. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 24. Патогенные спириллы
- •Тема 25. Микоплазмы
- •Тема 26. Риккетсии
- •Тема 27. Хламидии
- •Тема 28. Патогенные грибы
- •Приложение методические указания к проведению практических занятий для преподавателей
- •Частные методики.
- •Тема 3. Цель занятия: ознакомить студентов с особенностями морфологии и методами исследования микроскопических грибов различных таксономических групп.
- •Тема 4. Цель занятия: ознакомить студентов с назначением и основными методами стерилизации, применяемыми в микробиологии.
- •Тема 6. Цель занятия: ознакомить студентов с методами изучения ферментативной активности и принципами идентификации микроорганизмов.
- •Тема 7. Цель занятия, ознакомить студентов с методами определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, а также с действием бактериофагов и их практическим использованием.
- •Тема 8. Цель занятия: ознакомить студентов с основными методами и показателями санитарно-микробиологической оценки состояния объектов окружающей среды.
- •Тема 9. Цель занятия: ознакомить студентов с фенотипической и генотипической изменчивостью, генетическими методами идентификации микроорганизмов.
- •Тема 12. Цель занятия: ознакомить студентов с вакцинами различных типов, лечебно-профилактическими и диагностическими иммунными сыворотками, антигенами, аллергенами и принципами их контроля.
- •Тема 13. Цель занятия: ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики, основными свойствами возбудителей стафи-лококкозов, стрептококкозов и биопрепаратами.
- •Тема 14. Цель занятия: ознакомить студентов с методами лабораторной диагностики и биологическими свойствами возбудителей эшерихиозов и сальмонелл; биопрепаратами.
- •Тема 15. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей и лабораторной диагностикой бруцеллеза и туляремии, а также биопрепаратами.
- •Тема 17. Цель занятия: изучить свойства возбудителей и схемы лабораторной диагностики зооантропонозной чумы и псевдотуберкулеза.
- •Тема 18. Цель занятия: ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики и свойствами возбудителей рожи свиней, ли-стериоза, биопрепаратами.
- •Тема 19. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей и лабораторной диагностикой сапа, мелиоидоза, псевдомоноза норок и биопрепаратами.
- •Тема 20. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителя, схемой лабораторной диагностики сибирской язвы, биопрепаратами.
- •Тема 21. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей анаэробиозов, схемами лабораторного исследования, биопрепаратами.
- •Тема 22. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами лабораторной диагностики туберкулеза и паратуберкулеза, биопрепаратами.
- •Тема 23. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителя актиномикоза.
- •Тема 24. Цель занятия: ознакомить студентов с методами лабораторной диагностики лептоспироза, кампилобактериоза и дизентерии свиней, биологическими свойствами возбудителей, биопрепаратами.
- •Тема 25. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами лабораторной диагностики микоплазмозов.
- •Тема 27. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами лабораторной диагностики хламидиозов, биопрепаратами,
Упаковка и пересылка патологического материала.
Патологический материал доставляется нарочным. Органы или их части помешают в стеклянные банки, которые плотно закрывают и опечатывают. Трупы животных перевозят в плотных деревянных ящиках с опилками, которые впитывают выделяемую жидкость. Патологический материал при особо опасных инфекциях (сибирская язва, сап, туберкулез, бруцеллез, эм-^ар) кладут в стеклянную или плотную металлическую посуду, закрывают и опечатывают, а затем помещают в деревянный ящик.
Вместе с патологическим материалом направляют сопроводительную, в которой указывают: название хозяйства (адрес); сведения о признаках болезни, применяемых средствах лечения, кормлении животных и уходе за ними; данные об эпизоотической обстановке в прошлом и настоящее время; какие и когда проводились прививки, а также вид и возраст павшего животного; перечень материала, направляемого для исследования; основные патологические изменения в трупе; предполагаемая причина падежа; на какое заболевание необходимо провести исследование.
Поступивший в лабораторию неконсервированный материал можно хранить при 4°С в течение 1...2сут; консервированный в 50%-м растворе глицерина (кусочки органов) — несколько недель; для длительного хранения материал замораживают при —15...—20 С.
Кровь для серологических исследований у крупного рогатого скота, овец, лошадей берут из яремной вены в стерильные бактериологические пробирки в объеме 10... 15 мл, у свиней — из хвостовой, передней краниальной вен или глазного синуса, у птиц — из подкрылковых вен, у кроликов — из краевой ушной вены. Пробирки с кровью выдерживают до формирования сгустка в тепле (1,5...2 ч), затем для отделения от стенок пробирки обводят сгусток стеклянной чистой палочкой или спицей. Для отстаивания
сыворотки пробирки с кровью помещают в холодильник (4...6Х) на 18...20ч. После ретракции сгустка сыворотку крови переливают в серологические пробирки с резиновыми пробками. При необходимости сыворотку крови консервируют, добавляя в пробирку несколько крупинок борной кислоты, тиомерсал (конечное разведение 1 : 10 000), или замораживают.
Принципиальная схема микробиологического исследования.
Диагностика инфекционных болезней включает в себя комплекс исследований: эпизоотологические, клинические, патологоанатоми-ческие, микробиологические. При важности каждого из них и ценности именно комплексного подхода микробиологическое исследование особенно важно, поскольку с его помощью либо непосредственно обнаруживают этиологический (причинный) агент болезни, либо косвенными специфическими иммунологическими методами доказывают его присутствие.
Микробиологическое исследование состоит из следующих этапов;
1. Обнаружение возбудителя непосредственно в исследуемом материале без изоляции в виде чистой культуры на питательных средах с помощью разных методов:
неиммунологические методы: а) выявление возбудителя путем микроскопического исследования окрашенных (по Граму и др.) мазков-отпечатков из органов и тканей; б) обнаружение при помощи генетических методов (генные зонды, ПЦР) нуклеиновых кислот возбудителя;
иммунологические методы: выявление антигенов возбудителя с помощью различных серологических реакций (РП, РДП, МФА, ИФА, РИГА и др.).
2. Обнаружение возбудителя (его токсинов) с помощью био пробы: заражение исследуемым материалом чувствительных лабо раторных животных.
Выделение культуры возбудителя из исследуемого материа ла путем посева на питательные среды.
Идентификация выделенной культуры микроорганизмов по совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и патогенных свойств. При этом широко исполь зуют серологические (РА, РП, РДП, ИФА и др.), а в случае необ ходимости генетические методы идентификации изолированных микроорганизмов.
5. Серологическая (ретроспективная) диагностика. Обнаруже ние специфических следов пребывания возбудителя — антител в сыворотке крови исследуемых животных при помощи различных серологических реакций (РА, РСК, ИФА и др.). Серологические реакции наиболее широко применяют при диагностике хроничес ки протекающих бактериозов.
Аллергические исследования в отличие от перечисленных выше методов проводят непосредственно на животных в хозяйстве: при помощи диагностических аллергенов выявляют состоя-
ние гиперчувствительности замедленного типа. Аллергическую пробу в основном применяют для иммунологической диагностики хронических бактериозов.
Изложенная схема отражает возможные, но не обязательные направления микробиологических исследований. При каждой конкретной инфекции схему исследования строят с учетом особенности биологии возбудителя и инфекционного процесса.
