Тема 16. Пастереллы

Возбудитель пастереллеза [Pasteurella multodda (P. septica)]. От­носят к семейству BruceHaceae, роду Pasteurelia. Название рода дано в честь Пастера, который впервые выделил одного из пред­ставителей данной группы (1879) — возбудителя холеры кур. P. multodda вызывает остропротекающее септическое заболевание сельскохозяйственных и диких животных (включая птиц). Пасте-реллез животных характеризуется наличием множественных ге­моррагии (кровоизлияний) во внутренних органах, на слизистых и серозных оболочках.

Для бактериологического исследования от крупных животных направляют кусочки паренхиматозных орга­нов, трубчатую кость (костный мозг). Трупы мелких животных посылают целиком.

Микроскопия. Препараты-отпечатки из тканей и орга­нов высушивают, фиксируют и окрашивают часть препаратов по Граму, часть по Романовскому — Гимза (или по методу Муромце­ва фуксин-синью или синью Леффлера с последующей обработ­кой в течение нескольких секунд 1 %-м раствором уксусной кис­лоты) или разведенным фуксином. Пастереллы — бактерии ово-идной формы, величиной от 0,25...0,5 до 2мкм, неподвижные, споры не образуют. Многие вирулентные свежевыделенные штам­мы формируют капсулу. Грамотрицательны. При окраске по мето­ду Муромцева или Романовского — Гимза (или синью Леффлера) в мазках из крови или органов окрашиваются биполярно, то есть более интенсивная окраска по полюсам клетки, центральная часть окрашена очень слабо.

Выделение чистой культуры. Возбудитель из патологического материала выделяют путем посева на питатель­ные среды МПБ и МПА (рН 7,2...7,4) лучше с добавлением кровя­ной сыворотки. Оптимальная температура роста 37 °С. Аэроб. На жидких средах в первые дни роста отмечают незначительное по­мутнение среды, затем образуется слизистый осадок, среда про­светляется. При встряхивании осадок не разбивается, а поднима­ется в виде «косички». На МПА пастереллы образуют гладкие, слегка выпуклые серовато-белые колонии S-формы, края ровные, слегка опалесцирующие. Колонии R-формы матовые, с голубова­тым отливом, шероховатые с неровными краями.

На МПЖ возбудитель вначале растет отдельными колониями, затем в виде белого стержня без отростков. Пастереллы ферменти­руют глюкозу, сахарозу, сорбит и маннит с образованием кислоты без газа. Лактозу и дульцит не ферментируют. Антигенная струк­тура изучена недостаточно. Установлено наличие соматического и капсульного антигенов.

Патогенность. Определяют путем заражения голубей, белых мышей или кроликов чистой культурой или суспензией ра­стертых тканей исследуемого материала. Голубям взвесь инъеци­руют внутримышечно в дозе 0,3 мл, белым мышам подкожно — 0,2 мл, кроликам подкожно — 0,5 мл. У кроликов перед заражени^: ем следует исключить пастереллоносительство. Для этого им в те­чение трех дней до заражения в каждое носовое отверстие вводят по 2 капли 0,5 %-го водного раствора бриллиантовой зелени. По­являющееся гнойное истечение из носовой полости свидетель­ствует о бактерионосительстве. При заражении пастереллами ги­бель кроликов наступает через 18...26 ч. Из органов павших жи­вотных производят посевы на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя.

Возбудитель гемофилезного полисерозита (Haemophitus parasuis). Относят к семейству PasteureUaceae, роду Haemophilus.

Гемофилезный полисерозит —септическое заболевание поро­сят раннего послеотъемного периода. Характеризуется серозно-фибринозным воспалением плевры, перикарда, брюшины, суста­вов, иногда отмечают менингоэнцефалит.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры на питатель­ных средах и идентификацию возбудителя по культурально-мор-фологическим, ферментативным и патогенным свойствам.

Исследуют стерильно взятые серозно-фибринозный экссудат из перитонеальной, плевральной, перикардиальной полостей, по­раженных суставов, а также пораженные серозные оболочки.

Микроскопия. Мазки окрашивают по Граму и для обна­ружения капсул. И. parasuis— мелкие грамотрицательные палоч­ки, без спор и жгутиков, образуют капсулу. Возбудитель обнаруживают в виде полиморфных грамотридательных палочек, дипло-бактерий, коротких цепочек из палочек, а также в виде нитей.

Культуральные свойства. Факультативный анаэ­роб, температурный оптимум 37...38 °С. Так как возбудитель — ауксотроф по коферменту ДПН, он не растет на обычных пита­тельных средах. Материал засевают на шоколадный агар в чашках Петри и кровяной МПА с бактерией-«кормилкой».

Шоколадный агар: к расплавленному МПА (рН 7,2...7,4) при температуре 80...90 "С добавляют 10 % стерильной дефибриниро-ванной крови барана или лошади. Компоненты перемешивают и после охлаждения до 50...80 °С среду разливают по чашкам Петри, пробиркам.

На кровяной МПА (5 % крови барана, кролика, лошади) иссле­дуемый материал засевают шпателем по всей поверхности среды. Затем по диаметру чашки в виде двух прямых линий под углом 90° засевают культуру негемолитического штамма S. epidermidis или Е. coli. Посевы инкубируют при 37...38 °С 24...48 ч в условиях обыч­ной атмосферы.

На шоколадном МПА возбудитель формирует мелкие, круглые, прозрачные, с ровными краями и гладкой поверхностью колонии. На кровяном МПА возбудитель растет в виде мельчайших негемо­литических колоний только вблизи «штриха» бактерии-«корм ил-ки» на удалении не более 0,5..Л,0 см. Такой рост Я. parasuis назы­вают «сателлитным»: он связан с тем, что бактерия- «кормил ка» синтезирует ДПН, который диффундирует в толщу агаровой сре­ды, и в этой зоне способен расти ауксотроф Н. parasuis. «Шоколад­ный» агар содержит ДПН, выделенный из разрушенных эритро­цитов, и поэтому И. parasuis растет по всей поверхности питатель­ной среды. Для проверки у культуры бактерий зависимости от ДПН ее дополнительно высевают на сывороточный «шоколад­ный» агар. Культуры возбудителя растут на «шоколадном» и не растут на сывороточном МПА, поскольку в последнем отсутствует ДПН.

Из подозрительных колоний на «шоколадном» агаре или «сал-литных» колоний на кровяном агаре готовят мазки, окрашивают по Граму, на капсуле определяют наличие жгутиков в препарате «раздавленная капля*: Н. parasuis неподвижен.

У культур исследуют уреазную активность посевом на среду Заксе. Раствор А: 96%-й этанол — 2 мл и дистиллированная вода — 4 мл. Раствор Б: дистиллированная вода — 100 мл, дигидрофосфат калия — 0,1 г, гидрофосфат калия — 0,12 г, хлорид натрия — 0,5 г, добавляют 1 мл 2 %-го раствора фенолового красного. Смешивают растворы Аи Б в соотношении 1 : 19; смесь разливают по 0,1 мл в уленгутовские пробирки и вносят бактериологическую петлю ис­следуемой культуры. Пробирки выдерживают при 37...38 °С в те­чение 30...40 мин и учитывают результат. В положительном случае раствор за счет расщепления мочевины и зашелачивания среды приобретает малиново-красный цвет. Н. parasuis уреазу не выраба­тывает.

Биопроба. Метод применяют для определения вирулент­ных свойств культур Н. parasuis. Суточной агаровой культурой в дозе 1 ■ I0⁹ микробных клеток заражают внутрибрюшинно морс­ких свинок массой 300...350 г. Наблюдение ведут в течение 5 сут.

Возбудитель актинобациллезной пневмонии свиней. Бактерия {Actinobacieeus pleuropneumoniae), род Actinobacillus, семейство Pasteurellaceae.

Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония — ин­фекционная болезнь свиней преимущественно 2...3-месячного возраста и откормочных животных. Характеризуется развитием фибринозно-геморрагической некротизируюшей пневмонии и фибринозного плеврита.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культураль-но-морфологическим, ферментативным и серологическим свой­ствам.

В лабораторию направляют кусочки пораженных легких, сре-достенные и бронхиальные лимфатические узлы.

Микроскопия. Мазки-отпечатки окрашивают по Граму и одним из методов для выявления капсулы. A. pleuropneumoniae — короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, чаше располагаются в виде парных коккобактерий, могут образо­вывать короткие цепочки, нитевидные формы, формируют капсу­лу, спор нет. Возбудитель в исследуемом материале обнаруживают в форме мелких коккобактерий, коротких палочек, окруженных капсулой, расположенных единично, парами, в виде коротких це­почек.