Тема 19. Псевдомонады

Возбудитель сапа (Pseudomonas mallei). Открыт Леффлером и Шютцем (1882). Принадлежит к семейству Brucellaceae. Вызывает заболевание у непарнокопытных животных (лошадь, осел, мул, лошак), а также отмечены случаи у хищных животных — львов, тигров, рысей. К сапу восприимчив и человек.

Сап протекает чаще в хронической форме и характеризуется развитием сапных узелков, склонных к казеозному распаду. Кли­нически может проявляться серозно-гнойным истечением из но­совых отверстий, образованием язв на слизистой оболочке носо­вой перегородки, увеличением подчелюстных лимфоузлов. При кожной форме сапа образуются язвы с ровными краями и сало-видным дном. Заражение происходит контактным путем. При по­дозрении на сап следует строго соблюдать правила личной профи­лактики и техники безопасности, как положено в работе с особо опасными материалами.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию при жизни животного посылают гнойный экссудат из язв, истечения из носа, посмертно — кусочки легких, печени, лимфоузлов, селезенки, пораженные сапными узелками. Гной из язв берут стерильным ватным тампоном и помещают его в про­бирку. Из присланного материала готовят препараты-мазки, окра­шивают их по Граму, а также синью Леффлера или по Романовс­кому — Гимза. Для выделения возбудителя делают посевы на МПА, МПБ с 2,5 % глицерина (рН 7,0...7,2), а также на глицери-низированный картофель. Культивируют при 37 X. Аэроб. Для биологической пробы используют морскую свинку (самца) или кошку.

Микроскопия. В препаратах-отпечатках или мазках об­наруживают одиночно расположенные полиморфные грамотрица-тельные палочки. При окраске синью Леффлера или по Романовс­кому — Гимза в клетках хорошо видна зернистость. Бактерия сапа неподвижна, споры и капсулу не образует.

Рост на питательных средах появляется на 1...2-е сутки, иногда позже.

На МПА с глицерином вырастают слизистые, вязкие колонии серовато-белого цвета с перламутровым оттенком. В глицерино­вом МПБ растет в виде равномерного помутнения, по мере даль­нейшего роста культуры образуется осадок, который при встряхи­вании пробирки поднимается штопорообразно. Встречаются штаммы, растущие в жидкой среде с образованием пленки.

На глицеринизированном картофеле P. mallei растет характер­но: сначала появляются мелкие колонии в виде капелек с желтова­тым оттенком, которые, разрастаясь, сливаются и образуют соч­ный слизистый «медовый» налет. В первые три дня цвет микроб­ной массы янтарно-желтый, затем он становится буро-коричневым. В мазках из культуры часто наблюдают наряду с короткими палочками цепочки, состоящие из 4...8 клеток.

Биопроба. Основана на внутрибрюшинном заражении морской свинки взвесью в физиологическом растворе растертого патологического материала. На 3...4-е сутки после заражения раз­вивается характерный для сапного процесса клинический при­знак — гнойный орхит (и периорхит). На месте инъекции развива­ется и воспалительный процесс с образованием язвы. В случаях возможного загрязнения исследуемого материала посторонней микрофлорой заражение проводят подкожно в дозе 3...5 мл. Ги­бель животных наступает на 8... 15-е сутки.

При развитии орхита, не ожидая гибели, свинку убивают, вскрывают, бактериологически исследуют, выделяют чистую культуру из очагов поражения внутренних органов и семенников.

К сапному микробу чувствительны кошки, но с ними работать опасно, так как при развитии сапного процесса у них поражаются верхние дыхательные пути и при чихании, фырканьи воспали­тельный экссудат распространяется в окружающую среду и пред­ставляет опасность заражения работающего персонала. Поэтому кошек заражают в исключительных случаях, имея на это специ­альное разрешение.

При отсутствии клинических признаков сапа массовое обсле­дование лошадей осуществляют методом РСК, а в условиях хозяй­ства—аллергическим методом. РСК. выявляет активную форму течения сапного процесса. Все формы инфекционного процесса (инкапсуляция, обызвествление очагов) выявляются аллергичес­кой пробой, обычно глазной маллеинизацией.

Биопрепараты. Маллеин — диагностический сапной ал­лерген: культуру возбудителя выращивают в гл и церинизирован­ном бульоне в течение 4мес, стерилизуют автоклавированием, фильтруют через фильтр Зейтца, контролируют на стерильность, безвредность — на белых мышах, специфичность — на здоровых лошадях, стандартизуют по активности в единицах действия на лабораторных животных.

Сапной антиген для РСК: агаровую культуру возбудителя смы­вают фенолизированным физиологическим раствором, стерилизу­ют автоклавированием, отстаивают. В качестве антигена исполь­зуют свободную от клеток культуральную жидкость, проверенную на стерильность, специфичность и активность.

Позитивная сапная сыворотка: предназначена для определения активности антигена (РСК) и в качестве контроля при постановке РСК. Получают гипериммунизацией лошадей.

Возбудитель мелиоидоза (Pseudomonas pseudomallei). Принадле­жит к семейству Pseudomonaceae, роду Actinobacillus. Вызывает са-пополобное заболевание, встречающееся нечасто, но зарегистри­рованное во многих странах различных континентов. К мелиоидо-зу восприимчивы мелкий рогатый скот, свиньи, обезьяны, собаки, кошки, кролики, морские свинки, а также человек. Из организма больного возбудитель выделяется во внешнюю окружающую среду с носовым гнойно-слизистым истечением, с отделениями при кожных поражениях, с мочой и фекалиями. Переносчиками воз­будителя могут быть кровососущие насекомые. Продолжитель­ность болезни составляет 8...30 сут; как правило, летальный исход. Птицы и холоднокровные животные не восприимчивы.

Лабораторная диагностика; патологический ма­териал—трупы мелких животных, экссудаты, кусочки паренхи­матозных органов крупных животных (если нельзя труп послать целиком). Готовят препараты, часть окрашивают по Граму и Ро­мановскому — Гимза, часть используют для люминесцентной микроскопии. Производят посев на МПБ и МПА с глицерином. Эмульсией из патматериала заражают морскую свинку или крысу, кролика.

Морфология. Возбудитель палочковидной формы, раз­мером 2...6мкм, в диаметре 0,5...1 мкм. Имеет сходство с бактери­ей сапа, полиморфный. В молодой культуре встречаются цепочки длиной 15...20 мкм. В мазках из старых культур имеет форму кок-кобактерий. Спору и капсулу не образует. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками, грамотрицателен. В мазках из па­тологического материала возможна биполярная окраска. Подвиж­ный лофотрих.

Культивирование. Проводят на средах с глицерином (рН 6,8...7,0) при температуре 37 °С в аэробных условиях. Через сутки на МПА с 5 % глицерина появляются R-, S- и М-формы ко­лоний, сочные, слизистые. R-формы складчатые, на поверхности с зубчатыми неровными краями. В МПБ с глицерином рост про­является равномерным помутнением среды с образованием тол­стой морщинистой пленки. При старении культура приобретает коричневую окраску. Хорошо растет на глицеринизированном картофеле и кровяном агаре. Встречаются гемолитические штам­мы.

Возбудитель мелиоидоза расщепляет с образованием кислоты без газа глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, маннит, дульцит, декстрин. Обладает протеолитическими свой­ствами — ферментирует (разжижает) желатину, яичный белок, пептонизирует молоко.

Антигенная структура возбудителя мелиоидоза ха­рактеризуется наличием соматического О- и жгутикового Н-анти-генов. О-антиген имеет родство с антигенами бактерии сапа и сальмонелл, то есть не обладает специфичностью. У P. pseudomallei обнаружены К- и М-антигены, обладающие типоспецифичнос-тью, что используют в серологической идентификации методом РА с соответствующими типоспецифическими анти сывороткам и.

Морских свинок, крыс и кроликов заражают суспензией при­сланного материала или выделенной из него бактериальной культурой. После гибели животных трупы их вскрывают и исследуют бактериологически. Выделенную чистую культуру идентифициру­ют по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохи­мическим свойствам.

Серологическую диагностику осуществляют методом РА с сыворотками больных хроническим мелиоидозом, но антигенное родство возбудителя с бактерией сапа снижает практическую значимость РА.

Возбудитель псевдомоноза норок {Pseudomonas aeruginosa). При­надлежит к семейству Pseudomonadaceae, роду Pseudomonas.

Псевдомоноз — остропротекающее инфекционное заболева­ние. Характеризуется геморрагической пневмонией, признаками сепсиса. Кроме норок восприимчивы лисицы, песцы; у животных других видов возбудитель может служить причиной пневмоний, послеродовых, постхирургических осложнений.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на пи­тательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологическим свойствам.

В лабораторию направляют пораженные участки легких, регио­нарные лимфатические узлы, селезенку, печень, почки.

Микроскопия. P. aeruginosa в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают в форме прямых или изогнутых грамотрица-тельных палочек длиной 0,5...1,4мкм, шириной 0,2...0,4мкм, без капсул и спор. Образует жгутики. Располагается в виде одиночных клеток, коротких цепочек.

Культурально-биохимические свойства. Возбудитель—аэроб, температурный оптимум 35...37°С, к пита­тельным средам нетребователен. Исследуемый материал высевают на МПА и в МПБ. Рост через 24 ч. В МПБ проявляется помутне­нием среды, образованием поверхностной пленки и серовато-бе­лого осадка. За счет пигмента среда окрашена в сине-зеленый цвет; по мере старения культуры цвет колоний становится бурым. На МПА возбудитель формирует в основном два типа колоний: крупные (диаметр'2...5мм), полупрозрачные, сероватые, гладкие, с плоскими краями и приподнятым центром, а также мелкие ше­роховатые. Штаммы, выделенные из респираторного и мочеполо­вого трактов, могут образовывать слизистые колонии. Среда вок­руг колоний окрашена за счет пигмента в сине-зеленый цвет. Воз­будитель синтезирует четыре типа пигмента: пиоцианин (сине-зе­леный или желто-зеленый), флуоресцеин, пиорубин и черно-бурый пигмент. Для культивирования P. aeruginosa при пер­вичной изоляции из исследуемого материала используют специ­альные селективные среды с антибиотиками.

У выделенных культур изучают ферментативные свойства. Для P. aeruginosa характерны следующие признаки: образование аргининдигидролазы, оксидазы, гидролиз желатины, расщепление глюкозы, бета-аланина, D-, L-аспарагина, денитрификация и способность к росту при 41 "С.

Вид гетерогенен по соматическим О-антигенам. Для иденти­фикации на уровне О-серогруппы используют РА на стекле, при­чем исследуют только культуры, у которых отмечены минимум два из трех физиологических признаков, характерных для вида: обра­зование пигмента пиоцианина, расщепление глюкозы, рост при 41...42 °С. Используют набор из 3 поливалентных и 11 моновален­тных сывороток. Антигеном служит 18...20-часовая агаровая куль­тура P. aeruginosa, инактивированная кипячением в водяной бане в течение 1,5ч [концентрация (3...5)10⁹/мл]. Антиген первоначаль­но исследуют с поливалентными сыворотками, при получении по­ложительного результата — с моновалентными, входящими в со­став той или иной поливалентной сыворотки. Результат учитыва­ют через 3...6 мин.

Биопрепараты. Моновалентная формолквасцовая вак­цина против псевдомоноза норок.

Диагностические О-агглютинируюшие сыворотки для серо-групповой идентификации P. aeruginosa включают в себя три по­ливалентные сыворотки - № 1 (03, 04, 05, 06, 07), № 2 (02, 08, 09), №3 (010, 011, 012) и одиннадцать соответствующих моновалент- • ных сывороток, которые предназначены для идентификации Р. aeruginosa на уровне О-серогруппы.