- •Учебники и учебные пособия для студентов высших учебных заведений
- •Введение
- •Оборудование микробиологической лаборатории.
- •Правила работы в микробиологической лаборатории.
- •Тема 1. Микроскопический метод исследования микроорганизмов
- •Световая микроскопия.
- •Фазово-контрастное устройство
- •Темнопольный конденсор.
- •Люминесцентная микроскопия.
- •Электронная микроскопия.
- •Тема 2. Морфология микроорганизмов
- •2.1. Форма бактерий
- •Определение подвижности микроорганизмов.
- •Приготовление красителей и окраска мазков-препаратов. Методы пересева микроорганизмов.
- •Приготовление микроскопических препаратов.
- •Тема 3. Морфология грибов
- •Тема 4. Методы стерилизации
- •Стерилизация паром под давлением
- •Тема 5. Культивирование микроорганизмов
- •Тема 6. Методы выделения чистой культуры. Определение биохимических свойств микробов
- •Тема 7. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Бактериофаги
- •Тема 8. Определение биологических свойств микроорганизмов
- •Упаковка и пересылка патологического материала.
- •Принципиальная схема микробиологического исследования.
- •Определение патогенности.
- •Тема 9. Методы изучения генетики бактерий
- •Индукции мутаций под действием ультрафиолетового излучения
- •Постановка опыта трансформации.
- •Постановка опыта специфической трансдукции.
- •Определение Col-плазмид (колицикогенных факторов).
- •Метод генных зондов.
- •Тема 10. Микробиологические методы исследования объектов окружающей среды
- •Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов.
- •Санитарно-бактернологическое исследование мяса, колбасных изделий к мясных продуктов.
- •Тема 11. Изучение неспецифической резистентности организма и серологические методы диагностики инфекционных болезней
- •Количественное определение лизоцима в сыворотке крови.
- •Количественное определение комплемента в сыворотке крови.
- •Демонстрация фагоцитоза бактерии.
- •Методы оценки иммунного статуса макроорганизма.
- •Серологические методы исследования.
- •Реакция агглютинации (ра).
- •Реакция преципитации (рп).
- •Реакция связывания комплемента (рск).
- •Иммуноферментный метод.
- •Тема 12. Биологические препараты и их контроль
- •Тема 13. Стафилококки и стрептококки
- •Тема 14.Энтеробактерии
- •Тема 15. Бруцеллы и возбудитель туляремии
- •Тема 16. Пастереллы
- •Тема 17. Иерсинии
- •Тема 18. Возбудители рожи и листериоза
- •Тема 19. Псевдомонады
- •Тема 20. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 21. Патогенные анаэробы
- •Возбудитель дизентерии ягнят
- •Возбудитель брадзота овец
- •Возбудитель энтеротоксемии овец
- •Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкар)
- •Тема 22. Патогенные микобактерии Возбудитель туберкулеза.
- •Тема 23. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 24. Патогенные спириллы
- •Тема 25. Микоплазмы
- •Тема 26. Риккетсии
- •Тема 27. Хламидии
- •Тема 28. Патогенные грибы
- •Приложение методические указания к проведению практических занятий для преподавателей
- •Частные методики.
- •Тема 3. Цель занятия: ознакомить студентов с особенностями морфологии и методами исследования микроскопических грибов различных таксономических групп.
- •Тема 4. Цель занятия: ознакомить студентов с назначением и основными методами стерилизации, применяемыми в микробиологии.
- •Тема 6. Цель занятия: ознакомить студентов с методами изучения ферментативной активности и принципами идентификации микроорганизмов.
- •Тема 7. Цель занятия, ознакомить студентов с методами определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, а также с действием бактериофагов и их практическим использованием.
- •Тема 8. Цель занятия: ознакомить студентов с основными методами и показателями санитарно-микробиологической оценки состояния объектов окружающей среды.
- •Тема 9. Цель занятия: ознакомить студентов с фенотипической и генотипической изменчивостью, генетическими методами идентификации микроорганизмов.
- •Тема 12. Цель занятия: ознакомить студентов с вакцинами различных типов, лечебно-профилактическими и диагностическими иммунными сыворотками, антигенами, аллергенами и принципами их контроля.
- •Тема 13. Цель занятия: ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики, основными свойствами возбудителей стафи-лококкозов, стрептококкозов и биопрепаратами.
- •Тема 14. Цель занятия: ознакомить студентов с методами лабораторной диагностики и биологическими свойствами возбудителей эшерихиозов и сальмонелл; биопрепаратами.
- •Тема 15. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей и лабораторной диагностикой бруцеллеза и туляремии, а также биопрепаратами.
- •Тема 17. Цель занятия: изучить свойства возбудителей и схемы лабораторной диагностики зооантропонозной чумы и псевдотуберкулеза.
- •Тема 18. Цель занятия: ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики и свойствами возбудителей рожи свиней, ли-стериоза, биопрепаратами.
- •Тема 19. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей и лабораторной диагностикой сапа, мелиоидоза, псевдомоноза норок и биопрепаратами.
- •Тема 20. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителя, схемой лабораторной диагностики сибирской язвы, биопрепаратами.
- •Тема 21. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей анаэробиозов, схемами лабораторного исследования, биопрепаратами.
- •Тема 22. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами лабораторной диагностики туберкулеза и паратуберкулеза, биопрепаратами.
- •Тема 23. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителя актиномикоза.
- •Тема 24. Цель занятия: ознакомить студентов с методами лабораторной диагностики лептоспироза, кампилобактериоза и дизентерии свиней, биологическими свойствами возбудителей, биопрепаратами.
- •Тема 25. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами лабораторной диагностики микоплазмозов.
- •Тема 27. Цель занятия: ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами лабораторной диагностики хламидиозов, биопрепаратами,
Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов.
Санитарно-бактериологическое состояние молока и молочных продуктов оценивают по микробному числу и коли-титру.
Для определения микробного числа молоко разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия (1 : 10; 1 : 100; 1: 1000); каждое разведение (1 мл) выливают на дно стерильных чашек Петри, заливают расплавленным и остуженным агаром. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток, после чего подсчитывают число выросших колоний.
Для определения коли-титра молоко засевают в 6 пробирок со средой Кесслера: в 3 пробирки вносят по 1 мл молока, а в остальные 3 — по 0,1 мл молока (1 мл молока разводят в 10 раз стерильной водой). Посевы инкубируют при 43 °С в течение суток, после чего из забродивших проб делают посевы на среду Эндо и инкубируют при 37 °С. Из выросших колоний красного цвета готовят мазки (окрашивают по Граму, микроскопируют) и делают посев на среду Козера, а также в пептонную воду с 1 % глюкозы. Пробирки с посевами на среде Козера инкубируют при 37 X, а на среде с глюкозой — при 43 °С в течение суток. При оценке результатов учитывают только бактерии, вызывающие брожение глюкозы с образованием кислоты и газа, но не дающие роста на нитратной среде Козера.
Среда Козера: дистиллированная вода, 0,15% фосфата натрий аммония, 0,1 % фосфата калия однозамещенного, 0,02 % сульфата магния, 0,25 % цитрата натрия.
Аналогичным образом исследуют сливки, молочнокислые продукты. Определяют величину коли-титра и проводят оценку продукта в соответствии с нормативами.
Для обнаружения в молоке патогенных бактерий делают посевы на соответствующие элективные и дифференциально-диагностические среды с последующим выделением чистых культур и их идентификацией.
Санитарно-бактернологическое исследование мяса, колбасных изделий к мясных продуктов.
При микроскопическом исследовании мяса определяют число бактерий в мазках-отпечатках, которые готовят из кусочков мяса размером 2 х 1,5 х 2,5 см. Мазки окрашивают по Граму и микроскопируют. Мясо считается свежим, если в поле зрения обнаружено не более 10 бактериальных клеток.
Бактериологическое исследование колбасных изделий и мясных продуктов согласно ГОСТам включает в себя определение микробного числа, а также БГКП, сальмонелл, бактерий рода Proteus, коагулазоположительных стафилококков, листерий и сульфитредуцирующих клостридий.
Анализ проводят не позднее чем через 4 ч с момента отбора проб, которые берут с поверхностных и глубинных участков продукта. При исследовании глубинных участков образцы продукта предварительно обрабатывают спиртом и обжигают. К навескам продукта массой 20 г добавляют 80 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия и гомогенизируют в электрическом смесителе.
Для определения общего количества микроорганизмов в 1 г продукта делают посев 0,1 и 0,01 г пробы на питательный агар методом пластинчатых разводок Коха, инкубируют 48 ч и подсчитывают число колоний.
Для определения БГКП в 1 г продукта производят посев 5 мл взвеси на среду Кода (питательный бульон, сульфанол, лактоза и бромтимоловый синий), которая является элективно-дифференциальной средой для БГКП, и инкубируют 18...20 ч. При росте лактозоположительных БГКП первоначальный синий цвет изменяется на темно-зеленый или ярко-желтый. Специфические изменения на среде Кода не требуют дальнейшего подтверждения.
Для определения наличия сальмонелл берут навеску продукта массой не менее 25 г. Делают посев разведения навески в 100 мл среды обогащения (Мюллера, Кауфмана), инкубируют 24 ч. В положительном случае выделяют и идентифицируют чистые культуры бактерий.
Бактерии рода Proteus выявляют по методу Шукевича. С этой целью 0,5 мл взвеси продукта вносят на скошенный питательный агар в конденсационную воду, инкубируют 24 ч. При наличии протея наблюдается ползучий рост. В мазках выявляют грамотри-цательные палочки, определяют подвижность и идентифицируют культуру бактерий.
Для определения коагулазоположительных стафилококков 0,2 мл взвеси продукта высевают на желточно-солевой агар, инкубируют посевы при 37 °С и при комнатной температуре. При обнаружении стафилококков проводят их идентификацию.
Для обнаружения анаэробных спорообразующих бактерий рода Clostridium делают посев 10-кратных разведений взвеси в сульфитциклосериновую среду (СЦС) и Вильсона—Блера. Посевы инкубируют при 46 °С в течение 12 ч; при наличии клостри-дий наблюдается почернение среды. При положительном результате посева разведения 101 считается, что в 1 г продукта содержится 10 клеток соответствующих бактерий; разведения Ю3—100 клеток и т. д.
Колбасные изделия и продукты из мяса в соответствии с действующими нормативами не должны содержать БГКП (в 1 г продукта), сальмонелл (в 25 г), бактерий рода Proteus и сульфитреду-цирующих клостридий (в 0,1 г); микробное число не должно превышать 103.
