Тема 20. Возбудитель сибирской язвы

Возбудитель сибирской язвы {Bacillus anthracis) выделен и изу­чен отечественным ученым Брауэлем (1857). Сибирская язва —- за­разная остропротекающая болезнь многих видов животных и че­ловека. Возбудитель сибирской язвы принадлежит к порядку Eubacteriales, семейству Bacillaceae.

Лабораторное исследование. У павших живот­ных отрезают ухо с той стороны, на которой лежал труп. Прежде чем ухо отрезать, на него накладывают две лигатуры: одну ближе к голове, у основания уха, другую — отступя на 1 см от первой, за­тем между ними делают разрез. Поверхность разреза на трупе при­жигают раскаленным металлическим предметом (шпателем) или химическими средствами — кристаллическим пермарганатом ка­лия, фенолом, формалином. Отрезанное ухо завертывают в перга­ментную бумагу или целлофан, упаковывают в непротекающий деревянный или железный ящик (пенал, коробку).

Помимо уха патматериалом может служить кровянисто-пенис­тое истечение из естественных отверстий трупа (носовое истече­ние, из глаз, рта, анального отверстия). Истечения наносят на чи­стое стекло в виде толстого мазка, сверху накрывают другим стек-

лом, завертывают в пергаментную бумагу или целлофан, упаковы­вают в коробку. Кровянистые истечения можно взять путем про­питывания кусочка мела.

В случаях, когда труп вскрыт или подозрение на сибирскую язву появилось при разделке туши после убоя животного, для бак­териологического исследования направляют кровь из сердца, ку­сочки паренхиматозных органов, лимфоузлы. Патологический ма­териал помещают в банки с притертой пробкой или целлофано­вые мешки, обертывают тканью, смоченной дезинфицирующим раствором, упаковывают и срочно с нарочным и сопроводитель­ным письмом отсылают в лабораторию.

Бактериологическое исследование. Соблю­дая правила личной профилактики, в лаборатории ухо животного фиксируют в кюветке, подрезают и отпрепаровывают в виде треу­гольника кожу снаружи уха, где она более подвижна. Лоскут кожи откидывают и к подкожной клетчатке прикладывают предметные стекла— готовят препараты-отпечатки. Кляч-препараты фиксиру­ют и окрашивают по Граму и специально по Михину (или по Ро­мановскому — Гимза азур-эозином или по Ольту сафранином). Подкожную клетчатку мелко нарезают маленькими стерильными ножницами и растирают в стерильной ступке с песком и физиоло­гическим раствором. Данную тканевую взвесь используют для по­сева на питательные среды и заражения лабораторных животных. В пастеровскую пипетку капли межтканевой жидкости подкож­ной клетчатки, кровь и приготовленную взвесь набирают с помо­щью резиновой груши. Аналогично исследуют и другой материал.

Микроскопия. В. anthracis — неподвижный, грамполо-жительный, палочковидной формы; в препаратах из патологичес­кого материала располагается короткими цепочками по нескольку клеток или одиночно. Длина 4...8 мкм, ширина 0,5... 1 мкм. Приле­гающие друг к другу концы бацилл кажутся обрубленными, на­ружные — закругленные. В организме формирует капсулу (цв. рис. X). В препаратах-мазках из культуры характерно расположе­ние длинными нитевидными цепочками (стрептобациллы). В культурах, почве, воде, кормах формирует стойкую форму — спо­ру. Для спорообразования необходим доступ кислорода, темпера­тура в пределах 12...42 "С.

Культуральные свойства. К питательным средам неприхотлив. Аэроб. Оптимальная температура роста 35.„37 °С. Из приготовленной тканевой взвеси пипеткой делают посев в МПБ, МПА. В МПЖ засевают в столбик среды уколом. В жидкой среде рост возбудителя характеризуется образованием на дне про­бирки рыхлого ватообразного осадка при сохранении прозрачнос­ти бульона. На МПА через 24...48 ч В. anthracis образует шерохова­тые колонии R-формы с краями волнистыми, локоноподобными. В МПЖ возбудитель ближе к поверхности (больше доступ кислорода) растет обильнее в виде ответвлений от места укола. По мере углубления рост ослабляется, ответвления становятся короче. Рост возбудителя в МПЖ напоминает перевернутую вершиной вниз елочку: через 2...3 сут желатина медленно разжижается в виде во­ронки (пептонизируется). На кровяном агаре гемолиз не вызыва­ет. Молоко свертывает через 2...4 сут; сгусток казеина пептонизи­руется.

Патогенность. Ставят биопробу на белых мышах, морс­ких свинках или кроликах. Животных заражают подкожно непос­редственно тканевой взвесью или выросшей культурой: дозой 0,1мл —мышей, 0,2 мл — морских свинок и 6,3 мл—кроликов. Гибель наступает через 1 ...Зсут. Павших животных вскрывают и исследуют бактериологически.

Для того чтобы обнаружить В, anthracis в исследуемом материа­ле и идентифицировать выделенную культуру, используют также сибиреязвенные фаги (гамма-фаг, фаг ВИЭВ). На засеянную по­верхность исследуемой культуры (на поверхность агара) наносят каплю сибиреязвенного фага и инкубируют при 37 °С. В случае гомологичное™ культуры и фага по следу капли уже через 6...8 ч образуется прозрачная дорожка лизиса; по краям дорожки отмеча­ется рост засеянной культуры.

Для идентификации В. anthracis прибегают к феномену «оже­релья»: под действием малых концентраций пенициллина в ага­ровой среде (0,01...0,5 ЕД/мл) бациллы сибирской язвы приоб­ретают форму сферопластов в виде шаров, напоминающих оже­релье.

Для дифференцирования В. anthracis от спорообразующих сап­рофитных бацилл применяют МФА.

Серологическая диагностика. В несвежем, раз­ложившемся патологическом материале бактериологическая диаг­ностика неосуществима. В таких случаях применяют реакцию преципитации. Антигеном (преципитиногеном) для реакции слу­жит вытяжка из тканей органов павшего животного (в том числе ухо). Экстрагируемый растворимый антиген разрушенных, лизи-рованных при гниении (или кипячении) бактерий термоустойчив. Поэтому преципитиноген готовят кипячением кусочков ткани в физиологическом растворе. Реакцию преципитации ставят в ма­леньких пробирках Уленгута или методом диффузии в агаровом геле.

Особое практическое значение реакция преципитации имеет при исследовании кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву. Кусочки проб данного сырья доставляют в лабораторию в герме­тической упаковке. Пробы сразу обеззараживают автоклавирова-нием, измельчают, экстрагируют «холодным способом» при 12...14°С в физиологическом растворе (1: 10) в течение 16...18 ч. Экстракт фильтруют через нейтральную асбестовую вату. Поста­новка реакции осуществляется, как указано выше.

Из мокросоленого сырья предварительно (после автоклавиро-вания) удаляют соль (диализ). Для этого полученные экстракты фильтруют, разливают в коллодийные мешочки и помещают на 45...60 мин в кристаллизатор с дистиллированной водой. После диализа мешочки переносят на ! ч в кристаллизатор с 1 %-м ра­створом NaCl, а затем ставят реакцию, как обычно.

Биопрепараты. Вакцина СТИ — живая вакцина из эта­лонного штамма, представляет собой споровую (95...100 %) агаро­вую культуру в виде суспензии в 30%-м стерильном растворе гли­церина; содержит (2Д...З,5)10⁷ жизнеспособных спор в 1 мл.

Вакцина ГНКИ — сухая живая вакцина из эталонного штамма ГНКИ: содержит 5-10⁷ жизнеспособных спор в 1мл. Вакцина против сибирской язвы из штамма № 55.

Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.

Лечебно-профилактическая сибиреязвенная сыворотка: полу­чают гипериммунизацией лошадей инактивированной сибиреяз­венной культурой.

Сибиреязвенная преципитирующая сыворотка: предназначена для исследования материала на сибирскую язву в реакции преци­питации. Сыворотку получают гипериммунизацией лошадей.

Сибиреязвенный стандартный антиген для РП: выпускают для контроля активности преципитируюшей сыворотки. Пред­ставляет собой экстракт из инактивированной бактериальной массы В. anthracis.

Сибиреязвенные люминесцирующие сыворотки: готовят из си­биреязвенной преципитируюшей сыворотки. Предназначены для ускоренного обнаружения некапсулированных клеток возбудите­ля в первичных посевах.

Сибиреязвенные диагностические бактериофаги: представляют собой освобожденную от бактерий путем фильтрования жидкость бульонной культуры возбудителя, зараженную бактериофагом. Титр бактериофага 10.