12. Серологічні методи діагностики вірусних інфекцій.

Імунологічні методи дослідження грунтуються на специфічній взаємодії антигенів і антитіл. Вони включають серологічні дослідження (сероло­гічні реакції), до яких відносять реакції прямої взаємодії антигенів і антитіл си­роватки крові in vitro. Імунологічні методи досліджень поділяють на реакції, що полягають у фе­номені аглютинації, преципітації, реакції за участю комплементу, реакції нейтралізації, реакції з використанням хімічних і фізичних методів.

Реакцію пасивної гемаглютинації - один із методів серодіагностики. Заснована на визначенні аглютинації еритроцитів, на поверхні яких фіксовані антигени. Застосовують для діагностування захво­рювань, спричинених вірусами грипу, аденовірусами, вірусом гепатиту В, віру­сом кору, кліщового енцефаліту.

В основі реакції гальмування гемаглютинації (РГГ) лежить гальмування імунною сироваткою гемаглютинації еритроцитів вірусами. Вона слугує основним методом серодіагностування грипу, кору, краснухи, епідемічного паротиту, клі­щового енцефаліту та інших вірусних інфекцій.

Реакції суть яких полягає у феномені преципітації. Преципітація (реакція осадження комплексу антигену з антитілом) відбува­ється в результаті взаємодії антитіл з розчинними антигенами. Найпростішим прикладом реакції преципітації є утворення в пробірці непрозорої смуги пре­ципітації на межі нашарування антигена на антитіло.

Реакція зв 'язування комплемента (РЗК) дає змогу титрувати антигени або антитіла за ступенем фіксації комплемента комплексом антиген-антитіло. Ця реакція складається з двох фаз: взаємодія антигена з досліджуваною сироват­кою крові (досліджувана система) і взаємодії досліджуваної сироватки з ери­троцитами барана.При позитив­ній реакції в досліджуваній системі відбувається зв’язування комплемента, і тоді при додаванні сенсибілізованих антитілами еритроцитів гемолізу не спо­стерігається.

Реакція нейтралізації ґрунтується на здатності антитіл нейтралізувати де­які специфічні функції корпускулярних і розчинних антигенів. Різноманітні ва­ріанти реакції нейтралізації застосовують у вірусології.

Реакції з використанням фізичних та хімічних міток: 1)Імунофлюорисценція – використовують мічені флюорохромом антитіла; 2)Непряма імунофлюорисценція – для виявлення комплексу антиген-антитіло за допомогою люмінесцентної імунної сироватки; 3) Імуноблотинг – для ідентифікації індивідуальних антигенів вірусів і антитіл до них у складних сумішах без попереднього очищення білків. Застосовують при діагностиці ВІЛ – інфекції.

Основне значення серологічних методів - це ретроспективна діагностика грипу та інших ГРВІ, що дозволяє побічно визначити спектр циркулюючих в людській популяції вірусів. Так само широко застосовуються серологічні методи і для оцінки поствакцинального імунної відповіді.

13. Роль "швидких тестів" у лабораторній діагностиці вірусних інфекцій.

Швидкі тести для діагностики інфекційних хвороб (вірусних гепатитів В і С , ВІЛ-інфекцій ,хламідіозу, сифілісу) – це прості використанні діагностичні набори , які дозволяють отримати результат дослідження протягом декількох хвилин. Вони є альтернативою використанню класичних діагностичних тест-систем, бо не потребують застосування дорогого устаткування і висококваліфікованого персоналу. Вони засновані на таких самих принципах імунологічних реакцій та застосуванні таких самих імунобіологічних продуктів, що і добре відомі класичні ІФА тест-системи. Їм притаманна висока чутливість та специфічність. Необхідні як для поодиноких досліджень, так і у великому їх потоці, коли потрібно швидко і недорого одержати результат.

Для експресного виявлення специфічних антигенів або антитіл досліджують або суцільну кров (з вени або пальця) або сироватку, або плазму крові. Зразки не можна заморожувати та розморожувати по декілька разів (зберігають при температурі +2-+8, та використовують протягом 2 днів).

За типом імунологічної реакції, яка лежить в основі створення тесту,та умов проведення дослідження сучасні швидкі тести можна розділити на декілька груп:

• швидкі тести які є ДОТ-варіантом твердо фазного ІФА , при використанні яких тверду фазу з реагентом занурюють у досліджуваний зразок . Використовують коли необхідно швидко отримати результат поодиноких аналізів в діагностиці інфекційних хворобю( маркери гепатиту В,антитіла до ВІЛ 1\2);

• другу групу складають імунохроматографічні тести, при використанні яких досліджуваний зразок наносять на поверхню твердої фази мембрани з нанесеним на неї реагентом. у різних швидких ІХА-тестах використовують наступні три типи антитіл: мобільні моноклональні антитіла; поліклональні антитіла; вторинні антитіла.