12. Приготовление разведений основного калибровочного раствора
N° пробирки |
Основной калибровочный раствор альбумина, мл |
Дистиллированная вода, мл |
Содержание альбумина в сыворотке, г/л |
1 |
1,0 |
4,0 |
20 |
2 |
1,5 |
3,5 |
30 |
4 |
2,0 |
3,0 |
40 |
5 |
2,5 |
2,5 |
50 |
6 |
3,0 |
2,0 |
60 |
Источники: 43, 45.
Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови по реакции с натрия сульфитом. Принцип. При взаимодействии иммунных глобулинов сыворотки крови с раствором натрия сульфита изменяется структура белковых молекул и раствор мутнеет с интенсивностью, пропорциональной концентрации иммуноглобулинов.
Реактив: 18%-ный раствор натрия сульфита (Na2S03, ч. д. а., х. ч.). 18 г вещества растворяют в 82 мл дистиллированной прокипяченной воды.
Оборудование: фотоэлектроколориметр.
Ход определения. В две пробирки вносят по 3,8 мл 18%-ного раствора натрия сульфита и добавляют по 0,1 мл сыворотки крови, смешивают и через 20 мин колориметрируют на ФЭК-56М при синем светофильтре (540 нм) или на КФК-2, КФК-3 при длине волны 400 + 5 нм в кювете с толщиной слоя 5 мм против 18%-ного раствора натрия сульфита.
Если оптическая плотность (экстинкция) подготовленного образца сыворотки крови выше 1,3—1,5, сыворотку разводят изотоническим раствором натрия хлорида 1 : 1 и повторяют измерение. Полученные результаты параллельных определений складывают и усредняют.
Расчет ведут по калибровочной кривой, построенной с использованием сыворотки крови с известным содержанием иммуно-
13. Содержание иммуноглобулинов (ig) в сыворотке крови в зависимости от оптической плотности
Оптическая плотность
Содержание ig, мг/мл
Оптическая плотность
Содержание ig, мг/мл
0,1
0,11
0,12
0,125
0,13
0,135
0,14
0,145
0,15
0,155
0,16
0,165
0,17
0,175
0,18
0,185
0,19
0,195
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
2,28 2,60 2,92 3,03 3,14 3,37 3,60 3,70 3,80 3,93 4,06 4,17 4,28 4,39 4,50 4,61 4,72 4,83 4,94 5,80 6,80 8,00 9,00
0,45
0,50
0,55
0,60
0,65
0,70
0,75
0,80
0,85
0,90
0,95
1,00
1,05
1,1
1,15
1,2
1,25
1,30
1,35
1,40
1,45
1,50
10,00
11,4
12,4
13,6
14,6
15,8
16,8
17,8
19,0
20,2
21,2
22,3
23,4
24,6
25,8
26,8
28,0
29,0
30,1
31,2
32,3
33,4
глобулинов. Для этой цели можно пользоваться таблицей Н. А. Кос-тыны (табл. 13).
Примечание. Метод приемлем в основном для определения иммунных глобулинов у новорожденных животных. Источник: 20.
Определение иммунных белков в сыворотке крови по реакции с цинка сульфатом (цинк-сульфатный тест — ЦСТ). Принцип. При внесении в раствор, содержащий иммунные белки, цинка сульфата изменяется белковая молекула и раствор мутнеет. Степень помутнения раствора прямо пропорциональна содержанию иммуноглобулинов и может быть измерена фотометрическими приборами.
Реактивы: 20,8 мг/100 мл раствор сульфата цинка (х. ч.). Готовят в день исследований на прокипяченной дистиллированной воде (для удаления углекислого газа). Длительному хранению не подлежит;
барий сульфатный — стандарт мутности: 3 мл 1,15%-ного раствора бария хлорида (х. ч.) на дистиллированной воде вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки 0,2%-ным раствором серной кислоты. Полученный раствор соответствует 20 ед. ЦСТ по степени мутности. Для приготовления стандарта 40 ед. мутности в мерную колбу на 100 мл вносят 6 мл 1,15%-ного раствора бария хлорида, а для стандарта с 10 ед. мутности — 1,5 мл. Далее растворяют, как в предыдущем случае. По полученным трем стандартным растворам мутности (10,20, 40 ед.) строят калибровочную кривую для данного прибора (ФЭК).
I
S
С £
is. i& I? tall.
/. Класс полипотентных клеток-предшественников
II. Класс частично детерми- нированных полипотентных клеток-предшественников
III. Класс унипо- В-лимфопоэтин тентных клеток- предшественников
Клетка-предшественник В-лимфоцитов
IV. Класс мор- фологически распознавае- мых пролифе- рирующих клеток
V. Класс
созревающих
клеток