Глава 4

МЕТОДЫ КЛИНИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

4.1. ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОКА (МОЛОЗИВА)

Отбор проб молока (молозива) для анализа. В связи с тем, что кислотность, содержание иммунных глобулинов, белков, витами­нов, минеральных и других веществ в молозиве сильно меняется, исследование его проводят по удоям, начиная с первого. Молоко появляется на 7-е сутки после родов. Пробы молозива и молока берут только из здоровых долей вымени, поэтому перед взятием образцов проводят диагностику клинического и субклинического мастита.

Образцы молока берут из утреннего удоя, молозива — из пер­вого, второго, третьего или последующих удоев. Отбирают сред­нюю пробу нужного объема, вносят в склянку и закрывают про­бкой. Пробы в термосе со льдом доставляют в лабораторию, где обрабатывают с учетом характера проводимого анализа.

Метод обезжиривания молозива (молока). Многие биохимиче­ские показатели определяют в обезжиренном молозиве или моло­ке. Молозиво (молоко) центрифугируют при 3000—4000 мин ¹ в течение 30 мин, после этого пробу ставят в морозильную камеру холодильника на 20—30 мин, затем через тонкую иглу со шприцем, не затрагивая слой жира, набирают нужное количество обезжирен­ного молозива или молока и проводят соответствующие исследо­вания. Следует иметь в виду, что состав молозива и молока зависит во многом от срока лактации, условий кормления и содержания, состояния вымени. Лактацию с точки зрения изменения состава и свойств молока делят на три периода: молозивный (7 дней после оте­ла коровы); период выделения нормального молока (285—277 дней) и период выделения стародойного молока (7 дней перед запуском коровы). В период сухостоя в вымени содержится секрет, состав и свойства которого иные, чем молозива и молока.

Определение титруемой кислотности молока (молозива) по Тер­неру. Реактивы: 0,1 моль/л раствор натрия (калия) гидроксида. 4 г NaOH или 5,6 г КОН растворяют дистиллированной водой в мерной колбе на 100 мл;

1 %-ный раствор фенолфталеина. 1 г фенолфталеина растворя­ют в 70 мл 96%-ного этилового спирта и доводят объем водой до 100 мл;

2,5%-ный раствор кобальта сульфата. 2,5 г кобальта сульфата растворяют в 97,5 мл воды.

Оборудование: бюретка; колба или стакан на 100—200 мл; мерные колбы; пипетки на 10 и 25 мл.

Ход определения. Отбирают среднюю пробу молока ут­ренней дойки или молозива 1, 2, 3-го или последующего удоя из здоровых долей вымени. В колбу или стакан на 150—200 мл вносят 10 мл молока (молозива), 20 мл дистиллированной воды и 3 капли 1 %-ного раствора фенолфталеина, перемешивают и титруют из бюретки 0,1 моль/л раствором натрия (калия) гидроксида до появ­ления не исчезающего в течение 30 с розового окрашивания. В ка­честве эталона окраски можно использовать 2,5%-ный раствор ко­бальта сульфата. В колбочку вносят 10 мл молока (молозива), 20 мл дистиллированной воды, 1 мл 2,5%-ного раствора кобальта, пере­мешивают и ставят на белую бумагу рядом с бюреткой для титро­вания. Таким образом проводят визуальное сравнение окраски ис­следуемых проб молока или молозива.

Расчет ведут по формуле

х = А-10,

где х — кислотность молока (молозива), °Т, что равно числу мл 0,1 моль/л раствора натрия гидроксида, затраченного на нейтрализацию кислотности 100 мл молока (молозива); А — количество 0,1 моль/л раствора натрия (калия) гидроксида, пошедшего на титрование 10 мл молока (молозива), мл; 10 — коэффициент для пересчета кислотности в 100 мл молока (молозива).

Клиническое значение. Титруемая кислотность молока (молозива) обусловлена кислотным характером казеина, наличием в нем фосфорнокислых, лимоннокислых солей и растворенного углекислого газа.

У коров, содержащихся на полноценных рационах, кислотность молозива 1-го удоя равна 45—55 Т, 1-го дня — 39 °Т, 2-го дня — 33 Т; 3-го дня — 27,3 °Т; 6-го дня — 20,3 °Т; 7-го дня — 19,5 Т. Низкая кислотность молозива свидетельствует о неполноценном кормлении животных, скармливание такого молозива способству­ет развитию диспепсии новорожденных телят.

Кислотность свежего молока коровы 16—19 °Т, козы 17 °Т, ов­цы 23 Т, буйволицы 18,7 Т, зебу 19,5 Т, верблюдицы 17,2 °Т, ко­былицы 6—6,5 Т, ослицы 6 Т. Этот показатель в основном харак­теризует свежесть молока, однако при ацидотическом состоянии у животных кислотность молока может повышаться. Титруемая кис­лотность молока в начале лактации может составлять 20 °Т, посте­пенно снижаясь в последнем месяце до 12—14 Т и ниже.

Определение иммунных глобулинов (Ig) в молозиве (молоке) с натрия сульфитом. Принцип. При воздействии на обезжирен­ное молозиво (молоко) раствора натрия сульфита изменяется структура белковых молекул и раствор мутнеет, его интенсивность пропорциональна концентрации Ig.

Реактивы: 18%-ный раствор натрия сульфита (ч. д. а). 18 г ве­щества растворяют в 82 мл дистиллированной воды;

10%-ный раствор уксусной кислоты. 10 г ледяной уксусной кис­лоты (СН3СООН) растворяют в 90 мл дистиллированной воды.

Оборудование: фотометры КФК-2, КФК-3, ФЭК и др.; мерные колбы; пипетки.

Ход определения. Молозиво (молоко) обезжиривают, от­бирают, не затрагивая жира, примерно 2 мл обезжиренного моло­зива или 7 мл обезжиренного молока. Пробу молозива разбавляют дистиллированной водой в 2—4 раза. В обезжиренном разбавлен­ном молозиве или неразбавленном обезжиренном молоке осажда­ют казеин и для получения прозрачного слоя центрифугируют или фильтруют через бумажный фильтр.

Д ля получения прозрачного центрифугата в две центрифужные пробирки вносят по 5 мл обезжиренного, разбавленного молозива или по 3,5 мл обезжиренного молока, по каплям добавляют 10%-ный раствор уксусной кислоты до осаждения казеина, разме­шивают и через 5—10 мин центрифугируют 10—15 мин при 3000 мин^-1. Прозрачный фильтрат получают путем фильтрования через бумажный фильтр пробы молозива (молока) после осажде­ния казеина. В две параллельные пробирки вносят по 3,8 мл 18%-ного раствора натрия сульфита и по 0,1 мл прозрачного филь­трата или центрифугата, смешивают и фотометрируют на ФЭКе, КФК-2 при длине волны 440 нм в кювете с толщиной слоя 5 мм против раствора натрия сульфита (контроль). Содержание Ig нахо­дят по калибровочному графику, построенному по определению Ig в стандартной сыворотке с известной их концентрацией, или поль­зуясь таблицей М. А. Костыны (1983) (табл. 41).

Примечание. Изложенной выше методикой можно определять содержание Ig в сыворотке крови животных. В две (параллельные) пробирки вносят по 3,8 мл 18%-ного раствора уксусной кислоты и по 0,1 мл сыворотки, смешивают и колориметрируют при длине волны 400 ± 5 нм в кювете с толщиной слоя 5 мм против 18%-ного раствора уксусной кислоты.

Источник: 20.

Кл иническое значение. Содержание Ig в молозиве и мо­локе зависит от условий кормления и содержания животных, кроме того, от времени удоя после отела (опороса). Кормление беремен­ных животных по рационам с дефицитом протеина, незаменимых аминокислот и других элементов питания, витаминов и микроэле­ментов, использование недоброкачественных кормов, несоблюде­ние оптимальной структуры потребления кормов ведет к снижению иммунных белков в молозиве и молоке. В практике наибольшее клиническое значение имеет определение Ig в молозиве, так как от их содержания зависит здоровье новорожденного молодняка.

Потребление молозива с низким уровнем Ig сопровождается слабым насыщением ими организма новорожденных, развитием иммунного дефицита, появлением массовых желудочно-кишечных, легочных заболеваний, в том числе и инфекционной природы.

В полноценном молозиве коров первого удоя содержание Ig со­ставляет 50—100 г/л, в том числе IgG более 85 г/л, во втором удое — 28—56 г/л, или на 45 % меньше, чем в первом, в третьем удое на 75 % ниже, чем в первом, или около 13—25 г/л (L. Slanina, 1991). К седь­мому дню после отела молозиво по составу Ig (5—7 г/л) приближается к молоку. В молозиве свиноматок Ig содержится 55—71 г/л (А. Хох­лов, 1997).

Неполноценное молозиво содержит значительно меньше Ig, чем полноценное. По нашим данным, в зимне-весенний период в молозиве первого удоя коров, содержавшихся в сухостойный пери­од на неполноценных рационах, уровень Ig составляет 10—15 г/л.

Методы определения соматических клеток в молоке. Для определения содержания соматических клеток в мо­локе применяют вискозиметр ВМЛК, анализатор молока «Сома-тос», электронный анализатор качества молока «КЛЕВЕР-1М», прибор ИСКМ-1, «Фоссоматик» и др., проводят подсчет клеток в камере с сеткой Горяева или определяют их примерное количество визуальным способом.

Определение соматических клеток в молоке с применением вис­козиметра ВМЛК. Принцип. Метод основан на определении ско­рости вытекания смеси молока с раствором реактива «Мастоприм» через капилляр прибора, зависящей от содержания соматических клеток в молоке: чем их больше, тем медленнее вытекает жидкость.

Реактив: раствор «Мастоприм». 3,5 г препарата вносят в мер­ную колбу или в мерный цилиндр на 100 мл и доливают дистилли­рованной водой, подогретой до 30—35 "С до метки. Перед приме­нением раствор взбалтывают. Годен в течение 1 сут.

Оборудование: вискозиметр ВМЛК; пипетки на 5 и 10 мл; колбы или цилиндры на 100 мл; весы лабораторные рычажные не менее 3-го класса точности, наибольший предел взвешивания 100 г, поверочная цена деления 0,001 г; термометры технические прямые № 4; стаканы химические на 50 и 500 мл.

Ход определения. Температура в лаборатории должна быть 10—30 °С, кислотность исследуемого молока 16—21 "Т. В сосуд вискозиметра вносят 5 мл водного раствора препарата «Мастоп­рим» массовой концентрации 35 г/л и 10 мл исследуемого молока, тщательно профильтрованного через четыре слоя марли. Нажима­ют кнопку «Пуск» и перемешивают смесь в течение 30 с. По окон­чании перемешивания через капилляр вытекает смесь с раствором «Мастоприм». Время вытекания определяют таймером. После ана­лиза смеси сосуд прибора 2—3 раза промывают дистиллированной водой и 4—5 раз продувают с помощью резиновой груши. После очистки сосуда прибор считается подготовленным для исследова­ния последующей пробы молока.

Количество соматических клеток в пробе молока устанавливают по времени вытекания смеси в соответствии с условиями, описан­ными в таблице 42.