Глава 3

ЛАБОРАТОРНЫЕ КЛИНИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВИ

3.1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ КРОВИ КАНАЛИЗУ

Взятие образцов крови. Небольшое количество крови для обще­го анализа берут из сосудов внутренней или наружной поверхности ушной раковины. У собак, кошек, пушных зверей кровь берут из латеральной подкожной вены предплечья или голени, лапки (паль­ца), кончика хвоста; у кур — из гребня или сережки, вен внутрен­ней поверхности крыла; у уток и гусей — из ступни конечности или большой плюсневой вены. Когда для анализа необходимо большое количество цельной крови, сыворотки или плазмы, кровь у крупного рогатого скота, лошадей, овец, коз, верблюдов берут из яремной вены, у свиней — из орбитального венозного синуса, у плотоядных — из вен конечностей, у птиц — из вен внутренней поверхности крыла.

У моногастричных животных кровь берут до кормления в ут­ренние часы, у жвачных животных — утром через 4 ч после корм­ления. Время кормления существенно влияет на содержание в кро­ви липидов, сахара, холестерина и некоторых других показателей. Чрезмерное возбуждение животного во время взятия крови (стресс) влияет на показатели кислотно-щелочного равновесия, сахара, многих гормонов, количество эозинофилов и лимфоцитов. Во многом биохимические показатели крови зависят от фармако­логических препаратов, токсических веществ, испорченных кор­мов. Все эти факторы должны быть учтены при отборе проб крови.

Клинические лабораторные исследования. Исследуют цельную кровь, плазму и сыворотку. Проводят общий гематологический анализ цельной крови, а также определяют содержание в ней сахара, кетоновых тел, меди, цинка, кобальта, марганца, селена и др.

В плазме крови определяют резервную щелочность, содержание натрия, калия, хлора, кальция, магния, мочевины, билирубина, АсАТ и АсАТ, креатинкиназы, витаминов А, С, в сыворотке крови — об­щий белок и его фракции, мочевину, мочевую кислоту, креатин, сво­бодные аминокислоты, липиды, холестерин, билирубин, кальций, фосфор, ферменты, белково-осадочные пробы и др.

В зависимости от характера исследований готовят одну или две пробирки. В пробирки для получения цельной крови или плазмы предварительно вносят одно из противосвертывающих средств (антикоагулянт).

В качестве антикоагулянта используют гепарин (20 ИЕ/мл или 2—3 капли 1%-ного раствора на 10 мл крови); ЭДТА (этилендиа-минтетрауксусная кислота): натрия (ИагЭДТА), калия (К2ЭДТА, К3ЭДТА) — 1,5 мг/мл или 3—4 капли 10%-ного раствора на 10 мл крови; цитрат натрия (^зСб^О-/) — 1,5—2 мг/мл крови (исполь­зуют только при исследовании СОЭ); оксалат натрия (Na₂Ca0₂) — 3 мг на 1 мл крови (используют при подсчете количества клеток крови и исследовании их морфологии). Высыхание в пробирке дози­рованного раствора оксалата должно происходить при температуре не выше 80 °С. Передозировать антикоагулянты нельзя, так как высокая их концентрация вызывает в крови различные изменения, вплоть до гемолиза. Если кровь берут из сосудов сразу в меланжер (смеситель) или капилляр гемометра Сали, то антикоагулянт не используют.

В пробирки, предназначенные для получения плазмы крови, в которых предусмотрено определение резервной щелочности, кро­ме антикоагулянта добавляют по 0,5 мл вазелинового масла. До­бавление гепарина не благоприятствует определению в крови элек­тролитов, аммиака, натрия оксалата и цитрата — рН, кальция электролитов: ЭДТА-кальция и других, остаточного азота. Про­бирки с раствором натрия цитрата или оксалата перед использова­нием высушивают при температуре не выше 80 °С.

Кровь в пробирки набирают по стенке во избежание гемолиза. В лабораторию ее доставляют в день взятия в термосе. При отправ­ке в лабораторию не допускают замораживания или сильного ох­лаждения крови, так как это приводит к гемолизу.

В лаборатории кровь в пробирке для отделения сыворотки об­водят тонкой спицей из нержавеющей стали и ставят в термостат при температуре 37—38 "С на 1 ч. Между взятием крови и получе­нием сыворотки должно быть не более 5 ч. Отделившуюся сыворот­ку сливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 10 мин, при 3000 мин ¹ (об/мин). Для получения плазмы кровь с антикоа­гулянтом центрифугируют в том же режиме. Плазма крови отлича­ется от сыворотки содержанием фибриногена. Для лабораторных исследований пригодны сыворотка и плазма без гемолиза крови. Цельную кровь, плазму и сыворотку хранят в холодильнике в плот­но закрытых пробирках.

Общий клинический анализ крови, определение в крови сахара проводят в день ее взятия, другие анализы обычно заканчивают в течение 1—3 дней. Для подсчета форменных элементов крови ее берут из капиллярных сосудов.

Кровь с антикоагулянтом хранят в закрытых пробирках в течение 24 ч при 2—8 °С, при комнатной температуре (15—20 °С) — 8 ч.

Основные требования к подбору материала, выбору антикоагу­лянта, условиям хранения образца крови и срокам анализа приве­дены в таблице 3.