4. Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у животных

Вид животного	Эритроциты, млн/мкл (1012/л)		Лейкоциты, тыс/мкл (109/л)		Тромбоциты, тыс/мкл (109/л)
Крупный рогатый скот	5,0-	-7,5	4,5-	-12,0	260-	-700
Лошадь	6,0-	-9,0	7,0-	-12,0	200-	-500
Овца	7,0-	-12,0	6,0-	-14,0	270-	-500
Свинья	6,0-	-7,5	8,0-	-16,0	180-	-300
Коза	12,0-	-17,0	6,0-	-12,0	300-	-900
Буйвол	5,2-	-8,7	5,5-	-12,1	220-	-380
Верблюд	10,6-	-16,6	11,5-	-20,5	200-	-400
Северный олень	9,0-	-14,0	6,0-	-10,0	200-	-500
Осел	5,0-	-7,0	7,0-	-9,0	200-	-500
Мул	5,1-	-6,8	7,0-	-8,0	200-	-400
Собака	5,2-	-7,4	6,0-	-12,0	250-	-550
Кошка	6,6-	-9,4	10,5-	-15,0	100-	-500
Птица (курица, утка,	2,5-	-4,5	20,0-	-40,0
гусь)
Морская свинка	4,6-	-6,7	7,8-	-15,5
Норка	8,1-	-9,3	4,3-	-7,1
Лисица	8,3-	-10,3	4,2-	-7,0
Песец	7,6-	-9,0	4,7-	-6,9
Кролик	5,0-	-7,5	6,5-	-9,5

Уменьшение количества эритроцитов — эритроцитопения (олиго-цитемия) встречается при длительном недокорме животных, пост­геморрагической, гемолитической, железодефицитной, гипоплас-тической анемиях, Bj2 (фолиево)-дефицитной анемии, лейкозах, злокачественных новообразованиях. Олигоцитемия развивается при инфекционной анемии лошадей, гематурии крупного рогатого скота, пироплазмозе, нутталиозе, трипанозомозе, многих острых и хронических инфекционных и инвазионных болезнях, гепатите и гепатозе, хроническом нефрите.

Увеличение количества эритроцитов (полицитемия, эритроци­тов) встречается при сильной диарее вследствие сгущения крови, при обильном потоотделении, непроходимости тонкого кишечни­ка, сильной мышечной нагрузке.

Нахождение животных на высоте 1400—2000 м и выше над уровнем моря сопровождается повышением содержания эритроци­тов в крови.

4*

51

Увеличение количества лейкоцитов (лейкоцитоз) бывает патоло­гическое и физиологическое. Патологический лейкоцитоз отмеча­ется при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих пневмонию, бронхопневмонию, плеврит, перикардит, ретикулопе-ритонит, перитонит, абсцессы печени, эндометрит и многие дру­гие болезни. Выраженный лейкоцитоз наблюдается при ряде ин­фекционных болезней, хирургической инфекции, лейкозах, лимфо­гранулематозе. Лейкоцитоз возникает при отравлениях мышьяком, ртутью, укусах ядовитых насекомых, змей. Увеличение количества лейкоцитов может быть в результате введения больших доз камфо­ры, калия йодида, белковых препаратов, вакцин, сывороток.

Физиологический умеренный лейкоцитоз бывает при беремен­ности, после физических нагрузок, приема богатой белком пищи (у плотоядных), стрессах.

Уменьшение количества лейкоцитов (лейкоцитопения, лейкопе­ния) может быть результатом угнетения кроветворных органов, ис­тощения их, пониженной реактивности организма; лейкопению отмечают при вирусных болезнях, циррозе печени, поражении се­лезенки, действии ионизирующей радиации, ряда химических ве­ществ и лекарственных препаратов. Смена лейкоцитоза лейкопе­нией при воспалительных и гнойно-септических заболеваниях служит показателем понижения резистентности организма, угнете­ния кроветворения, ухудшения состояния больного животного.

Течение заболеваний, для которых характерна лейкоцитопения, наблюдается у ослабленных, истощенных животных. Лейкоцито­пения может быть следствием длительного введения в организм больших доз сульфаниламидов, амидопирина, левомицетина, син­томицина, препаратов ртути, мышьяка, висмута. Она отмечается при алейкемической форме лейкоза, отравлениях ДДТ и некото­рыми другими ядами.

Дифференциальный подсчет лейкоцитов (лейкограмма). Прово­дят визуальную микроскопическую оценку сухих фиксированных окрашенных мазков крови с дифференцированным подсчетом лейкоцитов и описанием морфологии эритроцитов.

Лейкограмма выражается как процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов крови.

Морфологическое исследование мазков крови включает следу­ющие этапы: подготовку стекол, приготовление, фиксацию, мик­роскопическую и морфологическую оценку мазков.

Подготовка предметных стекол. Предметные стекла должны быть чистыми, обезжиренными и сухими. Бывшие в упот­реблении или новые стекла замачивают в эмалированной посуде в стиральном порошке. Старый мазок удаляют ватным тампоном и стекла кипятят в том же растворе 10—15 мин, затем их промывают в проточной воде, насухо протирают и помещают на 30—60 мин в смесь Никифорова (этиловый спирт 96"%-ный и диэтиловый эфир в соотношении 1 : 1), после чего протирают насухо чистой тканью и помещают на хранение в посуду с крышкой.

Примечания. 1. Длительное кипячение (более 10 мин) предмет­ных стекол и кипячение их в алюминиевой посуде приводит к помутнению стекол. 2. Полноту от­мывки от щелочных средств проверяют качествен­ной реакцией с 0,1%-ным спиртовым раствором фенолфталеина, путем нанесения 2—3 капель на чистое стекло. Появление розового окрашивания свидетельствует о плохой промывке стекол. Приготовление мазков. Мазки крови готовят на предварительно подготовленных обезжиренных предметных стек­лах. Берут за ребра (а не за поверхность) предметное стекло и, от­ступая 1,5—2 см от узкого конца, наносят на него небольшую кап­лю крови. Шлифовальным стеклом, которое несколько уже, чем предметное, на которое нанесена капля крови, размазывают пос­леднюю. Для этого шлифовальное стекло узким краем ставят под углом 45° слева от капли, слегка подвигают его вправо, чтобы про­вести с ней соприкосновение, выжидают, пока капля расплывется по всему ребру, и легким быстрым движением ведут стекло справа налево, пока капля будет исчерпана.

При медленном размазывании ухудшается равномерность рас­пределения форменных элементов в мазке. При нажимании стек­лом на стекло многие клетки повреждаются. Если угол между стек­лами меньше 45°, то большее количество клеток скапливается в конце мазка. Величина капли должна быть соразмерна тому, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1—1,5 см до его конца. Мазок должен иметь желтоватый цвет. Густо-розоватые и красно­ватые мазки не пригодны для счета, так как лейкоциты в них де­формированы, а эритроциты лежат один на другом. Если была взя­та слишком большая капля, то после того как она распределилась по ребру шлифованного стекла, последнее приподнимают, перено­сят на несколько миллиметров влево, вновь ставят на предметное стекло и отсюда начинают делать мазок. Мазок тотчас сушат на воздухе. На сухом мазке по его середине иглой пишут номер или кличку животного, при необходимости и дату взятия крови.

Фиксация мазков. Фиксирующая жидкость вызывает коагуляцию белка и прикрепляет клетку к стеклу. Фиксация при­дает форменным элементам крови стойкость по отношению к со­держащейся в краске воде и препятствует деформации эритроци­тов и лейкоцитов.

Реактивы: метиловый спирт (х. ч.) или эозин метиленовый си­ний по Май-Грюнвальду (раствор), или этиловый спирт 96%-ный.

Оборудование: штатив для сушки мазков; пинцет; широкогорлая банка с притертой пробкой или крышкой.

Ход определения. Высохшие на воздухе мазки опускают в широкогорлую банку с крышкой, выдерживают в фиксаторе

5—10 мин, затем извлекают пинцетом и высушивают на воздухе. В этиловом спирте мазки выдерживают не менее 35 мин.

Для фиксации и последующей обработки необходимо отбирать правильно приготовленные тонкие мазки (мазок должен быть жел­того цвета, отступать от края широких сторон предметного стекла на 1—3 мм и заканчиваться «метелочкой», не доходя 1,5—2 см до левого узкого края).

Окраска мазков. Оборудование: контейнеры для окраски мазков с кюветами или «рельсы» стеклянные с эмалированными лотками; пинцет; цилиндры или стаканы градуированные; палоч­ки стеклянные; стаканчики химические; бутылки с притертыми пробками.

В строго нейтральной среде структурные элементы клеток кро­ви в азур-эозиновой смеси окрашиваются в различные цвета: ще­лочные компоненты клетки (цитоплазма) — эозином в розово-крас­ный цвет; кислые (РНК в ядрышках и цитоплазме, ДНК в ядре) — основными красителями в голубовато-синие цвета. Для приготовле­ния красителей и смывания их с мазков используют воду ней­тральной реакции. Вода кислой реакции ослабляет действие ще­лочного элемента красителя (азура II), вследствие чего лейкоциты плохо окрашиваются. Мазки имеют красный цвет за счет красной окраски эритроцитов и ядер лейкоцитов. Вода щелочной реакции ослабляет действие кислого компонента красителя (эозина), поэ­тому эритроциты окрашиваются в серовато-синий цвет, а ядра лейкоцитов — в очень темные цвета. Для подщелачивания и дове­дения реакции воды до нейтральной к ней по каплям прибавляют 1%-ный раствор натрия двууглекислого. Щелочную воду нейтра­лизуют 1%-ным раствором уксусной кислоты. Можно брать дис­тиллированную и водопроводную воду в различных сочетаниях.

Реакцию воды можно определить с помощью рН-метра или ге­матоксилина. При использовании гематоксилина к 10 мл дистил­лированной воды прибавляют 2—3 капли свежеприготовленного спиртового раствора гематоксилина. Вода нейтральной реакции ок­рашивается в бледно-фиолетовый цвет не ранее чем через 1 мин и не позднее чем через 5 мин. Если вода окрасилась раньше чем через 1 мин, значит, она щелочная, а если позднее чем через 5 мин, — кислая.

Окраска по Нохту. Реактивы:

1. основные растворы красителей — азур II, 1 г/л (1,0 г азура II растворяют в 1000 мл дистиллированной воды) и эозин калия, 1 г/л (1,0 г эозина калия растворяют в 1000 мл дистиллированной воды). Растворы готовы к употреблению через 14 дней со дня при­готовления, хранят их в посуде темного стекла с притертой про­бкой при комнатной температуре;

2. фосфатный буфер или смесь Вейзе (рН 7,4—7,5): калия фос­фат однозамещенный безводный (КН2РО4) 0,49 г, натрия фосфат двузамещенный (Na2HP04 х 2Н2О) 1,14 г или безводный (Na2HPC>4) 0,909 г, дистиллированная вода 1000 мл.

Рабочий раствор готовят перед употреблением, смешивая 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина ка­лия и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут не­сколько варьировать и должны быть установлены опытным путем при приготовлении свежей порции основных растворов красителей.

Фиксированные сухие мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с рабочим раствором красителя и выдерживают в нем строго определенное время, подобранное для каждой партии краски, — от 20 до 45 мин. Затем контейнер переносят в кювету с водопроводной водой. После этого мазки ставят вертикально в штатив для сушки.

При отсутствии штатива-контейнера высушенные мазки можно красить на «рельсах», заливая мазок рабочим раствором красителя возможно более высоким слоем (2—3 мл на мазок).

Окраска по Паппенгейму. Реактивы: 1) эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор). При отсутствии заводского раствора готовят 5 г/л раствора сухого красителя в метиловом спирте (х. ч.). Раствор готов к употреблению через 4 дня; 2) рабо­чий раствор азур-эозина по Нохту.

Сухие нефиксированные мазки помещают в контейнер и опус­кают в кювету с раствором красителя-фиксатора Май-Грюнвальда на 5 мин. Затем контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой и помещают к кювету с рабочим рас­твором азур-эозина по Нохту на 8—15 мин. Смывают краску, пе­реносят контейнер в кювету с дистиллированной водой. Мазки высушивают на воздухе.

Окраска по Романовскому—Гимзе. Реактивы: 1) готовый за­водской краситель Романовского—Гимзы (азур-эозиновая смесь); 2) рабочий раствор — 2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Готовят его перед употреблением.

Фиксированные мазки в кювете заливают рабочим раствором красителя Романовского—Гимзы и выдерживают 15—30 мин. За­тем мазки промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Продолжительность окраски зависит от качества красите­ля и температуры воздуха. Чем ниже температура воздуха, тем про­должительнее окраска. Выбор оптимального времени окраски про­водят всякий раз, когда начинают использовать новый флакон за­водского красителя. Хорошо окрашенные мазки имеют розо­во-фиолетовый цвет, недоокрашенные — розовато-красноватый, перекрашенные — темно-фиолетовый.

Микроскопическое исследование мазков крови. Реактивы: им­мерсионное масло; диэтиловый эфир или этиловый спирт.

Оборудование: микроскоп; осветитель для микроскопа; 11-клавишный счетчик для выведения лейкоцитарной формулы; капельница.

Просматривают мазок крови под малым увеличением микро­скопа (объектив х 10, окуляр х7). Подсчет лейкоцитов и оценка мор­фологии эритроцитов допустимы только в тонкой части мазка, где эритроциты лежат одиночно, а не сложены в «монетные столбики».

На край мазка помещают каплю иммерсионного масла, перево­дят на иммерсионный объектив (х90). Лейкоциты подсчитывают по зигзагу (по линии «Меандра»), отступя 2—3 поля зрения от вер­хнего края мазка, в начале в 3—5 полях зрения вдоль края мазка, затем в 3—5 полях зрения под прямым углом к середине мазка, по­том в 3—5 полях зрения параллельно краю мазка и вновь под углом 90° возвращаются к краю мазка. Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток, необходимая для выведения лейкограммы. Затем переходят на противополож­ную сторону мазка и подсчитывают вторую половину клеток. Под­считывают только целые (неразрушенные) клетки.

В норме в крови выявляются лейкоциты следующих форм: ба-зофилы, эозинофилы, нейтрофилы палочкоядерные и сегменто-ядерные, лимфоциты, моноциты. При наличии в мазках крови плазматических клеток, незрелых, бластных и труднодифференци-руемых форм лейкоцитов их также вводят в лейкограмму, описы­вают их морфологию.

Одновременно с выведением лейкограммы оценивают морфо­логию лейкоцитов. Если в анализе крови не было выявлено откло­нений от нормы количественного состава форменных элементов крови, а при подсчете 100 лейкоцитов не обнаружено никаких от­клонений от нормы ни в лейкограмме, ни в морфологии лейкоци­тов, то можно ограничиться подсчетом 100 клеток. Если при этом были выявлены какие-либо отклонения от нормы, то необходимо подсчитывать не менее 200 лейкоцитов.

Лейкограмма дает представление только об относительных ве­личинах. Более объективное представление о составе лейкоцитов крови дает вычисление их абсолютного количества, т. е. содержа­ние каждого вида лейкоцитов в определенном объеме крови.

Для подсчета эритроцитов и лейкоцитов крови, их дифферен-цировки можно пользоваться поточными автоматическими гема­тологическими цитометрами. Эти приборы позволяют определять гематокрит; количество эритроцитов; рассчитать среднее содержа­ние гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации ге­моглобина (г/л) к числу эритроцитов крови (МСН); среднюю кон­центрацию гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации гемоглобина (г/л) к величине гематокрита (л/л) (МСНС); выделить различные группы клеточных элементов, отличающихся не только по размеру, но и по зернистости. Анализаторы типа STKS позво­ляют подсчитать общее количество лейкоцитов и построить их гистограмму, выделить лимфоциты, моноциты, эозинофилы, гра-нулоциты, а также нетипичные клетки (ядерные эритроциты, сгус­тки тромбоцитов, лимфобластов, гранулоцитов).

Различные фирмы выпускают автоматические гематологиче­ские анализаторы: Н6000, HI и Н2 (фирма «Technicon»), STKS («CoulteD>), NE 8000 («ТОА»), «Sysmex», Cell-Dyn 3000 (« Abbott*), Codas Argoss 5DifF («Roche») и др.

Подсчет количества лейкоцитов требует применения в качестве антикоагулянта этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилона В), так как гепарин может интерферировать с лизирующими клетками реагента.

Клиническое значение показателей лейко­граммы. Процесс образования, развития и созревания клеток крови (гемопоэз — кроветворение) у человека и животных проис­ходит в костном мозге, селезенке и в лимфатических узлах. В кос­тном мозге образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зер­нистые лейкоциты (базофилы, сегментоядерные нейтрофилы); в лимфатических узлах и селезенке — лимфоциты.

При анализе лейкограммы учитывают количество зрелых кле­ток: базофилов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов. При ряде патологических состояний дают оценку незрелых, молодых форм эритроцитов и лейкоцитов (лимфобластов, промегакариоцитов, мегакариоци-тов, нормобластов, промиелоцитов, миелоцитов, мета-миелоци-тов, пролимфоцитов).

Форменные элементы крови здоровых животных различных ви­дов приведены на цветных рисунках I—IV. Нормальные величины количества различных видов лейкоцитов крови у взрослых здоро­вых животных представлены в таблице 5.

П ри оценке результатов исследования лейкоцитов учитывают общее их количество, наличие ядерного сдвига нейтрофилов, про­центное соотношение лейкоцитов отдельных видов, наличие или отсутствие дегенеративных изменений в клетках.

Появление в лейкограмме молодых и дегенеративных форм нейтрофилов (ядерный сдвиг нейтрофилов) — характерный при­знак, свойственный инфекционным и воспалительным процессам, злокачественным новообразованиям, различного рода интоксика­циям. Различают регенеративный, дегенеративный и лейкемоид-ный ядерные сдвиги. При регенеративном сдвиге увеличивается содержание палочкоядерных и юных нейтрофилов, при дегенера­тивном — только палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофи­лов наряду с дегенеративными изменениями в клетках. Лейкемо-идный сдвиг характеризуется появлением более незрелых форм (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов и др.).

Регенеративный сдвиг наблюдается главным образом при вос­палительных и гнойно-септических процессах. Дегенеративный сдвиг — показатель функционального угнетения костного мозга, встречается при интоксикациях (сальмонеллез, острый перитонит, уремическая и диабетическая кома). Лейкемоидные сдвиги явля­ются обычно отражением своеобразной реактивности больного ор­ганизма при самых различных заболеваниях.

Базофилы — клетки крови диаметром 8—14 мкм, в цитоплазме их имеются крупные базофильные гранулы, содержащие гепарин. Ядро базофилов крупное сегментированное, окрашивается в фио­летово-розовый цвет. Они участвуют в иммунологических реакци­ях аллергического типа и процессах свертывания крови. В крови встречаются в небольшом количестве.

Увеличение содержания базофилов наблюдается при хроническом миелолейкозе, гипофункции щитовидной железы. Уменьшение содер­жания базофилов учесть трудно из-за малого их количества в крови.

Эозинофилы — клетки крови размером 8—20 мкм. Отличаются обильной крупной розовой зернистостью, заполняющей всю ци­топлазму. Обладают некоторой фагоцитарной и двигательной ак­тивностью, участвуют в аллергических реакциях.

Эозинофилия — увеличение содержания эозинофилов. Наблюда­ют при паразитарных заболеваниях (трихинеллезе, описторхозе, аскаридозе, эхинококкозе и др.), ревматизме, хроническом миело­лейкозе, лимфогранулематозе и других злокачественных новообра­зованиях, ожоговой болезни, обморожении. Появление эозинофи­лов при воспалительных и гнойно-септических процессах на фоне лимфоцитоза и незначительного ядерного сдвига нейтрофилов яв­ляется предвестником благоприятного исхода заболевания.

Эозинопения — уменьшение содержания эозинофилов. Отмеча­ют при сепсисе, тяжелых интоксикациях, в атональном состоянии.

Нейтрофилы (палочкоядерные и сегментоядерные) — лейкоци­тарные клетки размером 7—15 мкм, обладающие выраженной за­щитной функцией, связанной с их фагоцитарной и двигательной активностью, способностью вырабатывать бактерицидные (лизо-цим) и антитоксические вещества. Отличительный признак ней­трофилов — мелкая зернистость в цитоплазме. Ядро у молодых клеток не сегментировано и напоминает изогнутую S-образной формы палочку (палочкоядерные нейтрофилы). В процессе созре­вания клеток ядро как бы перекручивается, образуя сегменты, со­единенные тонкими нитями хроматина (сегментоядерные нейтро­филы). В окрашенных мазках крови цитоплазма нейтрофилов розо­во-серого цвета (слабооксифильная). Мелкая зернистость в цито­плазме у собак, кошек и свиней окрашивается в розово-фиолетовый цвет, у лошадей и жвачных она воспринимает кислые и основные красители.

Нейтрофилез (нейтрофилия) — увеличение содержания нейтро­филов (палочкоядерных, сегментоядерных). Отмечают при воспа­лительных процессах (пневмония, перитонит, пиелонефрит, сеп­тицемия, плеврит и др.), интоксикациях. Выраженный нейтро-фильный лейкоцитоз с обнаружением молодых форм нейтрофи­лов, вплоть до промиелоцитов и миелобластов (сдвиг ядра влево), наблюдается при острых пневмониях, тяжелых инфекциях, остром гемолизе. Появление в крови незрелых нейтрофилов (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов) отмечается при миелолейкозе и других злокачественных поражениях (гемобластозах).

Нейтропения — снижение содержания в крови нейтрофилов. Признак падения сопротивляемости организма к инфекциям, воз­действия на организм ионизирующей радиации, цитостатических препаратов. Нейтропения обычно совпадает с лейкопенией.

Лимфоциты — клетки крови диаметром от 4,5 до 18 мкм с ок­руглым или овальным ядром, окрашенным в светло-синий или го­лубой цвет, цитоплазмой с видимым перинуклеарным просветле­нием (характерный признак). Различают малые, средние и боль­шие лимфоциты. По иммунологическим функциям выделяют Т- и В-лимфоциты.

Лимфоцитоз — увеличение содержания лимфоцитов. Характер­ный признак хронического лимфолейкоза. Незначительный лим­фоцитоз бывает при пневмонии, роже свиней, остеомиелите, сеп­сисе и некоторых других болезнях и указывает на фазу выздоров­ления. Лимфоцитоз при агранулоцитозе или лимфатической лейкемоидной реакции — неблагоприятный признак, свидетель­ствующий о снижении микрофагоцитарной функции организма вследствие истощения гранулопоэза.

Лимфоцитопения — уменьшение содержания лимфоцитов. Встречают при некоторых тяжелых инфекциях, воспалительных и гнойно-септических заболеваниях, и в прогностическом отноше­нии она является неблагоприятным симптомом.

Моноциты — самые крупные клетки (диаметр 10—20 мкм) нор­мальной крови с круглым ядром бобовидной или подковообразной формы. В патологических случаях ядро может быть сегментирова­но. Структура ядра нежная сетчатая, в окрашенных мазках блед­но-фиолетового цвета, может содержать мелкую зернистость, ва­куоли, зерна пигмента и др. Моноциты фагоцитируют микробные тела, клеточные остатки, различные токсические продукты.

Моноцитоз — увеличение содержания моноцитов. Наблюдают при острых инфекционных заболеваниях, а также при туберкулезе, бруцеллезе, злокачественных опухолях и сепсисе.

Моноцитопения — уменьшение количества моноцитов. Бывает при тяжелых септических процессах и некоторых инфекционных болезнях.

Определение гематокрита с помощью микроцентрифуги. Обо­рудование: микроцентрифуга МЦГ-8; капиллярные трубки, имеющиеся в комплекте центрифуги (можно использовать капил­ляры для определения С-реактивного белка). Используют капил­лярную или венозную кровь с ЭДТА или гепарином.

Ход определения. При взятии крови непосредственно от животного для предотвращения ее свертывания капилляры обра­батывают антикоагулянтом и высушивают. Если используют кровь с антикоагулянтом, то этого не делают. Заполняют капилляры на 7/8 длины кровью, закупоривают их с одного конца пластилином и помещают в ротор центрифуги так, чтобы закупоренные концы упирались_ в резиновую прокладку. Центрифугируют 5 мин при 8000 мин Определяют гематокритную величину по отсчетной шкале, приложенной к центрифуге.

Определение гематокрита с использованием пипеток Панченкова или градуированных. Оборудование: центрифуга; пипетки Панченкова или другие градуированные микропипетки.

Ход определения. В обработанную антикоагулянтом (или необработанную) пипетку Панченкова с отрезанным верхним концом набирают кровь точно до верхней метки, закупоривают ее, обтягивая_ резиновым кольцом, и центрифугируют 30 мин при 3000 мин . Для каждой центрифуги устанавливают определенное время работы. Вычитают из 100 высоту столбика эритроцитов и получают гематокритную величину в процентах.

Подобным методом определяют гематокрит в пипетках или пробирках иного типа.

Нормальные величины гематокрита у взрослых животных указаны в приложениях 6 и 7. У молодняка гематокрит ниже, чем у взрослых животных, и имеет некоторую возрастную дина­мику.

Клиническое значение. Гематокрит — соотношение объема плазмы и форменных элементов крови, выраженное в про­центах по объему. Увеличение гематокритной величины отмечают при анемиях и кровопотерях, уменьшение — при сгущении крови. Для объективной оценки лабораторных показателей крови опреде­ление гематокрита обязательно.

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) микромето­дом Панченкова. Принцип метода основан на использовании свойств крови, смешанной с раствором цитрата натрия, не сверты­ваться при стоянии, а разделяться на два слоя: нижний — эритро­циты и верхний — плазму. Это расслоение происходит с различной скоростью в зависимости от изменения химических и физических свойств крови.

Реактив-: 1,5%-ный раствор натрия цитрата трехзамещен-ного пятиводного. Раствор фильтруют, рН раствора нейтральный или слабощелочной. Реактив нестойкий, при помутнении раствор необходимо заменить.

Оборудование: пробирки размером 10 • 1 см; аппарат Панченкова, состоящий из штатива с гнездами и зажимами для специальных капиллярных пипеток с просветом канала 1 мм. На пипетках нанесена миллиметровая шкала длиной 10 см. Верхнее деление шкалы отмечено «0» и буквой «К» (кровь). Через каждые 10 делений стоят цифры 10, 20, 30 и т. д. до 100; против деления 50 — буква «Р» (реактив). Отверстия концов капиллярных пипеток, вставленных в прибор, герметически закрываются резиновыми прокладками или пробками, и кровь из пипетки не выливается. Капиллярные пипетки и пробирки должны быть хорошо промыты хромовой смесью.

Ход определения. В капиллярную пипетку, предваритель­но промытую раствором цитрата натрия, набирают этот раствор до метки «Р» и вводят в пробирки размером 10 • 1 см. Затем тем же ка­пилляром набирают 2 раза кровь из ушной вены до метки «К» и вносят ее каждый раз в ту же пробирку. Хорошо смешивают, наса­сывают в капилляр до метки «0» и, заметив время, ставят в штатив. Через 1 ч отсчитывают по делениям капиллярной пипетки величи­ну оставшегося столбика плазмы.

Расчет. Скорость оседания определяют за 1 ч. Для определе­ния скорости оседания эритроцитов, гематокрита предложено не­сколько видов устройств. Фирма «Diesse Diagnostica Senese» (Ита­лия) предлагает Vesmatic System — устройство одновременного оп­ределения СОЭ в 60 пробах по 1 мкл крови, содержащихся в пластиковых вакуумных пробирках VACUTEG. Фирма «Invitech Ltd* (Англия) выпускает прибор ESRPLUS, который способен оп­ределять одновременно в трех пробах капиллярной крови объемом 25 мкл каждая СОЭ, гематокрит, содержание общего билирубина, а также оценивать наличие липемии и гемолиза. Во всех случаях свежую капиллярную кровь исследуют непосредственно после взя­тия, венозную стабильную — в течение 12 ч при 2—8 °С.

Клиническое значение. Склеиванию эритроцитов кро­ви препятствует их отрицательный заряд, вследствие чего они от­талкиваются друг от друга. Ускорению оседания эритроцитов спо­собствуют глобулины, фибриноген, мукополисахариды, содержа­ние которых увеличивается при многих воспалительных процес­сах, инфекциях, злокачественных опухолях, нефрите и др.

При вертикальном положении пипетки Панченкова у здоровых животных СОЭ равна (мм/ч): крупный рогатый скот 0,5—1,5; овцы, козы 0,5—1,0; лошади 40—70; свиньи 2—9; собаки 2—6; куры 2—3.

Замедление СОЭ отмечается при диарее (тяжелой форме диспеп­сии молодняка), обильном потении, полиурии, механической и па­ренхиматозной желтухах, непроходимостях кишечника. Повышение СОЭ наблюдается при большинстве воспалительных процессов, ин­фекциях, злокачественных опухолях, коллагенозах, нефрите, анемиях.

Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидным методом. Принцип. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеро-дистым калием окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образу­ющий с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Кровь с антикоагулянтом хранят в течение 24 ч при 2—8 "С, 8 ч при комнатной температуре — 15—20 "С.

Реактивы: заводской набор реактивов;

трансформирующий раствор (ацетонциангидрин 0,5 мл, калий железосинеродистый 200 мг, натрий двууглекислый 1 г, дистилли­рованная вода до 1л); стабилен при хранении в посуде из темного стекла в течение 3 мес, при появлении осадка или обесцвечивании раствор к употреблению не пригоден;

стандартный раствор гемиглобинцианида, соответствующий кон­центрации гемоглобина крови 15 г% при разведении крови в 251 раз.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; пипетки на0,02мл; колба мерная на 1 л.

Ход определения. В пробирку вносят 5 мл трансфор­мирующего раствора и 0,02 мл крови (разведение в 251 раз), хоро­шо перемешивают, оставляют на 10 мин, после чего смесь измеря­ют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—560 нм (зе­леный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Стандартный рас­твор измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.

Расчет гемоглобина (г%)проводят по формуле

НЬ = Е_оп/Е_ст х 15,

где Е_оп — экстинкция опытной пробы; Е„ — экстинкция стандартного раствора; 15 — соответствие стандартного раствора концентрации гемоглобина крови при ее разведении в 251 раз.

Для перевода г% в г/л найденное число умножают на 10.

Метод Сали, предложенный еще в 1895 г., неточен и им в на­стоящее время пользоваться не рекомендуется.

Определение гемоглобина в крови возможно с помощью бумаж­ных полосок, помещенных на пластиковых подложках в отража­тельные фотометры, выпускаемых фирмами «Эймс» (США) и др. Исследуемую пробу наносят на реакционную зону диагностической полоски и помещают в прибор, в котором она облучается полихро­матическим светом, диффузионно отраженный свет собирается на измерительной системе и после прохождения через интерферирую­щий фильтр измеряется, затем его сравнивают со стандартом. Сис­тема контролируется микропроцессором.

Клиническое значение. Гемоглобин — дыхательный пигмент крови, состоит из белка глобина и простетической группы — гема. Глобин по строению близок к альбумину, синтезируется в пе­чени, представляет хелатный комплекс протопарферина с двухва­лентным железом.

Основная функция гемоглобина — перенос кислорода от легких к тканям. Гемоглобин участвует в транспорте углекислого газа из тканей в легкие, в поддержании кислотно-основного равновесия в организме, т. е. обладает буферными свойствами. Он способен со­единяться с оксидом углерода, образуя карбоксигемоглобин, а так­же с некоторыми химическими веществами с образованием метге-моглобина. Эти соединения не способны переносить кислород от легких к тканям.

Нормативы содержания гемоглобина у животных приведены в приложениях 5—7.

Снижение количества гемоглобина отмечается при дефицитных анемиях вследствие недостатка железа, меди, кобальта, витамина В[2, фолиевой кислоты, белков и других веществ, при хронических интоксикациях, гепатите, гепатозе и других болезнях печени, кето-зе, расстройствах желудочно-кишечного тракта, инфекционных и инвазионных болезнях и других заболеваниях. Умеренное сниже­ние гемоглобина отмечают при алиментарной (железодефицитной) анемии, более выраженное — при массовой кровопотере, гемоли­тической и гипопластической анемии.

Следует отметить, что снижение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов не всегда протекает параллельно. Чаще количество гемоглобина уменьшается резче, чем число эритроци­тов в крови. Однако при ряде заболеваний могут возникать проти­воположные сдвиги, поэтому необходимо одновременно опреде­лять цветовой показатель.

Повышение уровня гемоглобина отмечают при сгущении крови (диарея, обильное потоотделение), непроходимости кишечника, сильной мышечной нагрузке, нахождении животных на высоте 1400 м и выше над уровнем моря.

Определение цветового (цветного) показателя. Цветовой показа­тель — среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Он характеризует степень насыщения эритроцитов гемоглобином по сравнению с нормой. Цветовой показатель вычисляют путем деле­ния концентрации гемоглобина в 1 мкл крови, выраженной в пи­кограммах (пк), на число эритроцитов в том же объеме крови.

Цветовой показатель определяют по формуле

_{х =} ЗНв (г/л)