Исследование морфологии клеточных элементов смж.

Для исследования морфологии клеток СМЖ центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок переносят на обезжиренное стекло. С целью получения наиболее тонкого мазка стекло располагают вертикально. Мазки высушивают в термостате при температуре 40 - 50 ⁰С.

Окраска по Розиной. Приготовленные мазки в течение 1-2 мин фиксируют метанолом, после чего окрашивают по Романовскому 6-12 мин (в зависимости от выраженности цитоза). Краску смывают дистиллированной водой, а мазки высушивают. При окрашивании ядер в бледно-голубой цвет проводят докрашивание мазков в течение 2-3 мин.

Окраска по Возной. После центрифугирования осадок ликвора переносят на обезжиренное стекло и, слегка покачивая его, дают капле свободно распространиться по поверхности. Мазок высушивают при комнатной температуре в течение суток, после чего фиксируют метанолом в течение 5 мин. Зафиксированный мазок окрашивают раствором азур-эозина, приготовленным для окраски мазков крови и разведенным в 5 раз. Окраску проводят на протяжении 1 часа. В случае необходимости препарат докрашивают неразведенной краской 2-10 мин.

Окраска по Алексееву. На приготовленный, но нефиксированный мазок наносят 6-10 капель краски Романовского. Через 30 сек, не сливая краски, приливают в соотношении 2:1 дистиллированную воду, предварительно подогретую до 50-60 ⁰С, и оставляют препарат на 3 мин. После смытия краски дистиллированной водой и высушивания с помощью фильтровальной бумаги мазки микроскопируют. Данный вид окраски, как правило, используется при необходимости срочного цитологического исследования СМЖ.

Характеристика морфологии клеточных элементов СМЖ.

Лимфоциты. В нормальном ликворе, как правило, содержатся малые и средние лимфоциты в виде единичных клеток. Количество лимфоцитов значительно увеличивается при туберкулезном и остром серозном менингитах, вирусных энцефалитах. В восстановительном периоде бактериальных менингитов, при рассеянном склерозе, энцефаломиелитах, чаще можно говорить о лимфоидной клеточной реакции. В СМЖ таких больных при умеренном плеоцитозе обнаруживаются атипичные трансформированные лимфоциты, а также плазматические клетки, что может свидетельствовать о подостром воспалительном процессе в мягкой мозговой оболочке. При патологических процессах в ликворе начинают преобладать средние и большие лимфоциты.

Плазматические клетки - клетки обнаруживаются в СМЖ лишь при длительно текущих иммунореактивных процессах в мозге и его оболочках - нейросифилисе, туберкулезном менингите, рассеянном склерозе, эпителиосаркоме. Они являются одним из источников IgG в ликворе.

Тканевые моноциты - в нормальном ликворе могут встречаться в виде единичных клеток. В большом количестве появляются после оперативного вмешательства на головном мозге, при хронических воспалительных процессах в оболочках мозга.

Макрофаги появляются в СМЖ при паренхиматозном или субарахноидальном кровоизлиянии и не встречаются в случае артифициальной примеси крови. Большое количество макрофагов в ликворе поле операции на ЦНС свидетельствует о хорошем прогнозе, полное же их отсутствие является неблагоприятным прогностическим признаком.

Нейтрофилы - гранулированные нейтрофилы в ликворе появляются только при патологических состояниях (бактериальные менингиты, абсцессы, кровоизлияния, после операций на ЦНС). Неизмененные нейтрофилы всегда обнаруживаются в ликворе с примесью свежей крови. Присутствие нейтрофилов в СМЖ, не содержащей крови, может указывать на бывшую или текущую воспалительную реакцию мозговых оболочек. Их появление является также признаком экссудации - реакции, связанной с бурным развитием некротических изменений в клетках ЦНС, и свидетельствуют об остроте патологических процессов. Нейтрофилы также встречаются при вирусных менингитах в первые дни заболевания.

Эозинофилы - встречаются в ликворе при патологических состояниях, в основном паразитарной этиологии, но часто обнаруживаются при вирусных менингитах, после пневмоэнцефалографии (как следствие неспецифической оболочечной реакции) и в жидкости кист и опухолей.

Базофилы - их появление в спинномозговой жидкости является следствием местной клеточной иммунологической реакции ЦНС.

Атипичные клетки - чаще всего являются клетками опухолей ЦНС или ее оболочек; тем не менее, они могут обнаруживаться и при хронических воспалительных процессах (туберкулезный менингит, менингоэнцефалит, рассеянный склероз, энцефаломиелит). При подозрении на опухолевый характер атипичных клеток следует использовать комплекс морфологических признаков при учете клинической картины заболевания. Для цитологии опухолевых клеток характерно:

• наличие в одном препарате клеток, различных по размеру и форме (анизо-пойкилоцитоз);

• увеличение количества и размера ядер;

• ядерный гиперхроматизм;

• аномальные митозы;

• цитоплазменная базофилия;

• появление скоплений клеток.

Клетки арахноэндотелия представляют собой крупные, неправильной формы и с нечеткими контурами образования. В мазке, окрашенном азур-эозином, цитоплазма приобретает серовато-голубой цвет, в ней определяются включения. Часто можно обнаружить только ядро клетки с обрывками цитоплазмы, без четких контуров границ. Ядро клеток гипохромное, с зернистым распределением хроматина.

Клетки сосудистого сплетения - чаще всего крупные полигональные клетки с мелкими круглыми ядрами, располагающимися по центру. При окраске азур-эозином цитоплазма базофильна, или имеет серо-голубой цвет, почти всегда содержит включения зеленого или голубого цвета.

Клетки эпендимы в люмбальном ликворе чаще всего представляют собой овальные ядра, оставшиеся после деструкции клеток, либо элементы, окруженные неширокой каймой цитоплазмы с сероватым оттенком. Ядра имеют нежное гомогенное распределение хроматина и заостренные полюса.