Определение глобулиновой фракции (реакция Нонне-Аппельта).

Принцип реакции заключается в осаждении глобулинов насыщенным раствором сернокислого аммония ((NH₄)₂SO₄).

Для приготовления реактива 85 г химически чистого нейтрального сульфата аммония растворяют в 100 мл дистиллированной воды при кипячении. Полученный раствор оставляют на несколько дней при комнатной температуре, после чего подвергают фильтрованию. рН приготовленного реактива должен находиться в пределах 7,0 - 7,1. Реакцию проводят в пробирке, для чего на небольшое количество реактива (0,5 - 1 мл) наслаивают эквивалентное количество СМЖ. Регистрацию результата проводят на 3-й минуте после нанесения ликвора. При оценке вначале учитывают толщину кольца на границе жидкостей, а затем интенсивность помутнения после встряхивания пробирки. Совокупность обоих моментов реакции отмечают крестами:

• едва заметное кольцо и слабая опалесценция - (+);

• ясное кольцо и ясная опалесценция - (++);

• плотное кольцо и среднее помутнение - (+++);

• сильная мутность - (++++).

Рассматривать степень помутнения следует на темном фоне.

Обнаружение положительной глобулиновой реакции свидетельствует о воспалительных изменениях; степень изменений коррелирует с выраженностью воспаления.

Количественное определение фракций белка в ликворе.

Протеинограмма СМЖ является более информативным методом исследования, чем определение общей концентрации белка. Изменение общей концентрации белка и белковых фракций не всегда равнозначны. Часто наблюдается изменение соотношения белковых фракций при нормальных концентрациях общего белка. Фракционный состав белков СМЖ определяют с помощью электрофореза в различных поддерживающих средах (ацетатцеллюлозные пленки, агар, агароза, полиакриламидный гель). Полученные результаты принято сравнивать с соответствующей электрофоретической картиной белков сыворотки крови. В отличие от белкового спектра сыворотки крови, электрофоретическая картина ликвора, как правило, представлена семью фракциями (преальбумины, альбумины, α₁-, α₂-, β₁-, τ-, γ-глобулины). Нормальные величины концентраций белковых фракций, в определенной степени, зависят от используемой поддерживающей среды.

Нормальные величины относительного содержания белковых фракций при электрофорезе СМЖ на ацетатцеллюлозных пленках:

Преальбумин - 2-7 %

Альбумин - 56-76 %

α₁-глобулины - 2-7 %

α₂-глобулины - 4-12 %

β-глобулины - 8-18 %

γ-глобулины - 3-12 %.

При патологических состояниях изменения в протеинограмме ликвора могут проявляться следующим образом:

• увеличением одной или нескольких фракций в результате усиления поступления в СМЖ или вследствие уменьшения реабсорбции,

• уменьшение или полное отсутствие некоторых фракций из-за уменьшения или недостаточного синтеза,

• появление фракций, которые в норме в СМЖ не определяются.

Преальбумины являются белками преимущественно мозгового происхождения. Уменьшение их количества характерно для компрессии спинного мозга, полирадикулоневрита, некоторых опухолей, менингитов.

Альбумины являются важным показателем оценки состояния гематоэнцефалического барьера, поскольку синтезируются исключительно в печени. Относительное уменьшение этой фракции наблюдается при атеросклерозе и при некоторых опухолях ЦНС (интрамедуллярные опухоли, глиомы мозжечка, спинальные менингиомы).

α₁-глобулины имеют главным образом плазматическое происхождение. Основными составляющими α₁-глобулинов являются α₁-антитрипсин, α₁-липопротеины и орозомукоид. Увеличение уровня α₁-глобулиновотмечается при метастазах опухолей желудочно-кишечного тракта, инфаркте мозга, хорее Гентингтона, синдроме Меньера. Уменьшение - при гиперкенетическом прогрессирующем панэнцефалите.

α₂-глобулины - также являются белками плазматического происхождения. В этой фракции присутствует α₂-макроглобулин, церулоплазмин, гаптоглобины. Увеличение наблюдается у больных с атеросклерозом, медуллярными менингиомами, глиомами моста мозга, полирадикулоневритом, боковым амиотрофическим склерозом, медуллярной компрессией, а также при злокачественных глиальных и метастатических опухолях. Снижение может наблюдаться при медуллярной компрессии, рассеянном склерозе, нейросифилисе, мозговом инфаркте.

β-глобулины являются белками преимущественно плазматического происхождения. Основными составляющими данной фракции являются трансферрин, гемопексин, С₃- и С₄-компоненты комплемента. Увеличение может наблюдаться у больных с ретробульбарным невритом, глиомами моста мозга, медуллярными менингиомами.

τ-глобулины являются белками мозгового происхождения. С этой фракцией перемещается медленный трансферрин (10-30 % общего трансферрина). Значительное увеличение наблюдается при болезнях Альцгеймера и Пика. Уменьшение - при церебральных и спинальных менингиомах, интрамедуллярных опухолях.

γ-глобулины могут быть плазматического и мозгового происхождения. На нормальной электрофореграмме СМЖ их фракция представлена гомогенной зоной, которая является следствием поликлонального синтеза. Изменение содержания γ-глобулинов является одним из самых важных показателей. Многочисленные сдвиги в зоне этой фракции могут быть обусловлены:

• увеличение уровня γ-глобулинов,

• уменьшением уровня γ-глобулинов,

• отсутствием γ-глобулинов,

• преимущественным содержанием одного из иммуноглобулинов (моноклональный тип),

• дополнительным фракционированием на 2-3 подфракции (олигоклональный тип),

• появлением γ-постглобулинов.

Увеличение уровня γ-глобулинов олигоклонального типа характерно для рассеянного склероза и гиперкинетического прогрессирующего панэнцефалита. Реже подобные изменения наблюдаются при нейросифилисе, туберкулезном менингите, некоторых энцефаломиелитах, идиопатическом полирадикулоневрите, а также заболеваниях, связанных с хроническим воспалительным процессом в ЦНС. Увеличение содержания γ-глобулинов моноклонального типа отмечается при миеломе, макроглобулинемиях и других болезнях крови. Возрастание γ-глобулинов поликлонального типа наблюдается при церебральной атрофии, рассеянном склерозе, нейросифилисе, опухолях ЦНС (полушарные и спинальные менингиомы), подостро и хронически протекающих менингитах и менингоэнцефалитах, боковом амиотрофическом склерозе, трепаносомии.

В настоящее время при исследовании белков используется метод иммуноэлектрофореза, позволяющий количественно определять отдельные белки ликвора, в особенности класса иммуноглобулинов.

В ряде случаев целесообразно определение следующего индекса:

IgC ликвора

IgG плазмы

Инд. =

альбумин ликвора

альбумин плазмы

В норме данный индекс ниже 0,6. Его увеличение указывает на продукцию Ig в цереброспинальном пространстве и наблюдается при вирусной инфекции, СПИДе, сифилисе, рассеянном склерозе.