Распространение фагов в природе

Фаги широко распространены в природе. Выделить их можно из различных субстратов, в которых имеются ми­кробы — хозяева фагов. Кишечные фаги можно выде­лить из сточных вод, почвы, испражнений, стафилококко­вые фаги — из слизи носа, зева, с кожных покровов, из отделяемого ран. В настоящее время известны фаги поч­ти у всех патогенных и многих непатогенных микроорга­низмов: у бактерий кишечной группы, коринебактерий, микобактерий, стрептококков, споровых микроорганиз­мов, актиномицетов. Фаги и подобные им агенты не об­наружены у простейших, большинства дрожжей, плесне­вых грибов, спирохет, водорослей.

Выделение бактериофага из исследуемого материала и объектов внешней среды производят обычно в тех слу­чаях, когда не удается выделить культуру микроорга­низма.

Для выделения фага производят посев фильтрата ис­следуемого материала на плотные или жидкие питатель­ные среды одновременно с культурой микробов, на ко­торых происходит размножение искомого фага (тест- культура). О наличии фага судят по отсутствию роста тест-культуры. Постановку опыта всегда сопровождают контрольным посевом тест-культуры бактерий на пита­тельные среды. В контрольной пробирке должен наблю-

даться рост микробов, т. е. помутнение среды. На плот­ных питательных средах фаги обнаруживают методами Отто или Градиа, который можно использовать также для подсчета количества фаговых корпускул в исследуе­мом материале.

После выявления фага в исследуемом материале оп­ределяют его количественное содержание, или титр фа­га. Титр фага можно выразить двуг^я показателями: 1) количество активных корпускул фага в 1 мл исследу­емого материала; 2) величина наибольшего разведения исследуемой жидкости, при котором фаг проявляет свое литическое действие. Эта величина выражается отрица­тельным логарифмом числа 10, где степень указывает разведение фага. Обычно титр фага составляет 10⁷.

Для титрования фага предложены разные методы, среди которых наибольшее распространение получили последовательное разведение, титрование фага в жидкой питательной среде по методу Аппельмана и метод двух­слойных агаров, разработанный Грациа.

Практическое использование бактериофага

Фагодиагностика является одним из методов допол­нительного определения вида микроорганизма, вызвав­шего заболевание. В основе ее лежит специфичность дей­ствия фага на определенных возбудителей. Лизис выде­ленной у больного культуры с помощью специфического фага используют для дифференциации возбудителей чу­мы от сходных с ними бактерий ложного туберкулеза грызунов, истинного холерного вибриона — от холеропо­добного, возбудителя гонореи — от сходных микробов, возбудителя склеромы — от палочки Фридлендера. На основании лизиса специфическим фагом определяют ви­довую принадлежность шигелл, сальмонелл, бруцелл, холерных вибрионов, которые не агглютинируются спе­цифическими иммунными сыворотками. Для определения вида или типа микроба по специфическому действию фа­га на жидкую или плотную питательную среду засевают чистую культуру изучаемого микроорганизма. Затем сю­да добавляют несколько капель известного фага. Про­светление взвеси микробов на жидких средах и отсутст­вие роста на плотных питательных средах свидетельству­ет о соответствии фага выделенной культуре. Обязатель­на постановка контролей в виде посева культуры изучае­мого микроба на питательные среды.

Метод фаготипирования позволяет разделить микро­бов одного и того же вида на различные фаготипы. Это имеет большое значение в эпидемиологической практике, например при выявлении источника инфекции. Фаготи- пирование осуществляют с помощью типовых фагов. Су­ществуют типовые фаги в отношении сальмонелл тифа (96 типов), паратифа В (13 типов), сальмонелл Бреслау (12 типов), холерного вибриона (5 типов), стафилокок­ков (22 типа).

Для фаготипирования бактерий применяют 1,5% мя­со-пептонный агар с 5% глицерина, на поверхность кото­рого наносят небольшими каплями культуру исследуемо­го микроба. На поверхность каждой капли культуры на­носят меньшую каплю типового фага. Чашки с посевами помещают в термостат при 37°С. Через 18—24 ч учиты­вают результаты. Наличие выраженного лизиса исследу­емой культуры с одним из типовых фагов указывает на принадлежность культуры к данному фаготипу. Вместо нанесения капель культуры на поверхность агара ее можно оросить 6—8-часовой бульонной культурой иссле­дуемого микроба. На обратной стороне чашки Петри следует нанести сетку по количеству типовых фагов, име­ющихся в наборе, и бактериологической петлей внести по капельке фага в каждую клетку. Учет результатов производят так же, как и в первом случае.

Реакция нарастания титра фага была разработана советскими микробиологами В. Д. Тимаковым и Д. М. Гольдфарбом для диагностики инфекционных за­болеваний и определения загрязненности внешней среды патогенными микроорганизмами. Сущность реакции за­ключается в том, что к исследуемому материалу прибав­ляют определенное количество корпускул индикаторного фага. При наличии в исследуемом материале соответст­вующего возбудителя индикаторный фаг контактирует с ним и размножается. Увеличение, нарастание количест­ва корпускул фага, искусственно добавленного в иссле­дуемый материал, свидетельствует о наличии в нем гомо­логичного возбудителя.

Существуют фаги, которые используют как средство профилактики, например брюшнотифозный и дизенте­рийный фаги, а также назначают с лечебной целью. Осо­бенно эффективно применение антибиотиков и фага од- новрёменно или последовательно друг за другом. Фаг является прекрасным лечебным средством при холере в первые дни болезни, а позже в сочетании с антибиотика­ми. Комбинированное применение фага и антибиотиков оказывает эффективное действие на антибиотикоустой­чивые формы бактерий.