3.3.3. Определение альдегидных групп фотоколориметрическим методом по Саболксу

Метод основан на восстановлении альдегидными группами хлорида 2,3,5-трифенилтетразолия (сокращенно называемого ХТТ) с образованием красного красителя формазана, который определяют фотоколориметрически [21].

Этот метод дает достаточно точные и хорошо воспроизводи- мые результаты и позволяет определять очень малые коли- чества альдегидных групп.

Методика анализа. Навеску абсолютно сухой измельченной целлюлозы массой 0,01 г помещают в пробирку и заливают 0,5 см³ раствора гидроксида калия концентрацией (КОН) 0,2 моль/дм³ и 0,5 см³ 0,2%-ного водного раствора хлорида 2,3,5-трифенилтетразолия (ХТТ). Пробирку опускают на 10 мин в кипящую водяную баню (за это время образец целлю- лозы приобретает красную окраску). Затем пробирку с окра- шенной целлюлозой быстро охлаждают под струей холодной во- ды. Массу из пробирки переносят на стеклянный пористый фильтр (класса ПОР 160) и отфильтровывают, применяя отсос, в мер- ную пробирку на 10 см³. Массу на стеклянном фильтре промы- вают без отсоса небольшими порциями этанола (смывая им остатки волокна из реакционной пробирки) до тех пор, пока образовавшийся в ходе реакции краситель не перейдет пол- ностью в раствор и объем жидкости в отсосной пробирке не достигнет 10 см³. Для улучшения растворения красителя массу на фильтре перемешивают стеклянной палочкой.

Интенсивность окраски полученного раствора (оптическую плотность) определяют на спектрофотометре при длине волны 546 нм или на фотоэлектрическом колориметре с зеленым светофильтром в кювете толщиной 10 мм. Параллельно про- водят контрольное определение без образца целлюлозы. Конт- рольную пробу, которая должна быть бесцветной, используют в качестве раствора сравнения.

Следует отметить, что образовавшийся краситель формазан нестоек, и поэтому все операции (промывку, фотоколориметри- рование) необходимо выполнять быстро (не более 20 мин).

Содержание альдегидных групп — СНО определяют по гра- дуировочному графику в мг и рассчитывают их массовую долю, % к абсолютно сухой целлюлозе, по формуле

где m — масса СНО-групп в навеске, определенная по градуи- ровочному графику, мг; g — масса абсолютно сухой навески, г.

Построение градуировочного графика. Готовят точно 0,1%- ный раствор химически чистой глюкозы. В мерную пробирку вно- сят микропипеткой 0,05 см³ этого раствора, добавляют 0,5 см³ раствора гидроксида калия концентрацией (КОН) 0,2 моль/дм³ и 0,5 см³ 0,2%-ного раствора ХТТ. Смесь в пробирке нагревают 10 мин на кипящей водяной бане, охлаждают, доливают эта- нолом до метки, соответствующей 10 см³, и фотоколориметри- руют. Найденное значение оптической плотности соответствует 0,05 мг глюкозы или 0,007775 мг СНО-групп. Строят градуиро- вочный график, откладывая по оси абсцисс найденную опти- ческую плотность 0,1%-ного раствора глюкозы, а по оси орди- нат— массу СНО-групп (0,007775 мг). Полученную точку соеди- няют с началом системы координат.