Определение осмотической резистентности (стойкости) эритроцитов

Для эритроцитов изотоническим является 0,85 % раствор натрия хло­рида. При помещении их в гипотонические растворы они набухают, а затем лопаются. Чтобы определить осмотическую резистентность эрит­роцитов (ОРЭ), в серии пробирок готовят растворы натрия хлорида убывающей концентрации (от 0,70 до 0,22%) и в каждый такой раст­вор пипеткой от гемометра Сали вносят по 20 мкл крови. В течение

первого часа отмечается состояние жидкостей (исследование проводит­ся при комнатной температуре). Окончательный результат учитывается через 2 ч. При этом определяют минимальную и максимальную ОРЭ.

Минимальная ОРЭ — это такая концентрация (в %) натрия хлори­да, при которой уже начинается гемолиз эритроцитов: при этом жид­кость в пробирке приобретает легкое красное окрашивание из-за начи­нающегося распада красных кровяных телец. В норме минимальная ОРЭ равна 0,48—0,42 %.

Максимальной ОРЭ считается такая концентрация натрия хлорида, при которой гемолизируются все эритроциты (раствор приобретает ярко-красный цвет и прозрачность). В норме максимальная ОРЭ со­ставляет 0,34—0,32 %. Снижение ОРЭ отмечается при многих врожден­ных гемолитических анемиях, реже — при острых гемолитических при­обретенных анемиях.

Определение вязкости крови

Определение вязкости крови основано на изучении скорости продви­жения через одинаковые капилляры крови и воды при идентичных условиях (температура, давление воздуха). По такому жё принципу ис­следуется вязкость плазмы (сыворотки крови). За эталон (единицу вяз­кости) принимают вязкость воды. Используются методы Детермана и Бекенской.

По данным А. П. Дорон (1952), работавшей с вискозиметром Де­термана, вязкость крови в детоком возрасте выражается в следующих величинах (единицах вязкости): у новорожденных первых 3—5 дней жизни—10—14,8; в возрасте от 1 до 12 мес — 3,8—5,4; от I года до 3 лет —3,6—5,7; от 3 до 15 лет — 3,5—5,8. Данный показатель у де­тей от пола не завист.

Вязкость сыворотки крови после периода новорожденное™ у детей всех возрастов равна 1,88 единиц.

Вязкость крови зависит от количества форменных элементов, вяз­кости плазмы (сыворотки) крови, содержания в ней белка и липидов, газового состава крови. При анемиях вязкость крови понижается, при полицитемии, лейкемии, пневмонии, желтухе, иногда при диабете и других заболеваниях — повышается.

Относительная плотность крови

Для определения относительной плотности крови применяется ареометрический метод Гаммершлага. У здоровых детей относительная плотность крови с возрастом почти не изменяется. Она равна у но­ворожденных 1,060—1,080; от 2 мес до 2 лет— 1,055—1,059; от 3 до 14 лет—1,057—1,062. Примерно в таких пределах находится относи­тельная плотность крови у взрослых (у женщин—1,050—1,056; у муж­чин— 1,055—1,062).

Этот показатель крови понижается при анемиях, гемолитических желтухах, повышается — при эритремиях, сгущениях крови.

Группы крови и методы их определения Группы крови системы аво

Деление людей по группам крови системы АВО осуществляется по наличию в эритроцитах человека групповых агглютиногенов (антиге­нов) А и В и в плазме крови агглютининов (антител) а и р.

В зависимости от наличия или отсутствия в крови человека одного или обоих агглютиногенов или агглютининов выделяют 4 группы кро­ви. Группа крови — генетически обусловленный фактор: групповую при­надлежность крови можно установить в эмбриональный период; тако­вой она остается в течение всей жизни человека.

В крови одного человека не могут находиться одноименные антиген и антитело (например, А и а), ибо такое сочетание привело бы к аг­глютинации и гемолизу эритроцитов. В клинической практике группы крови обозначаются буквенными и одновременно цифровыми (в скоб­ках) символами: 0(1), А(II), В (III), АВ(IV).

Каждую группу крови можно кратко охарактеризовать следующим образом. Первая группа—0 α,β (I): в эритроцитах агглютиногены от­сутствуют, в плазме содержатся оба агглютинина α, β. Вторая груп­па— Аβ (II): в эритроцитах имеется агглютиноген А, а в плазме со­держится агглютинин β. Третья группа — Вα (III): в эритроцитах со­держится агглютиноген В, а в плазме — агглютинин α. Четвертая груп­па— АВ₀ (IV): в эритроцитах содержатся оба агглютиногена (А и В), а в плазме агглютининов нет.

При углубленном изучении групп крови установлено, что агглюти- иоген А имеет два варианта, каждый из которых по-разному реагирует с агглютинином а: а) агглютиноген А₁ обусловливает крупнозернистую и быструю агглютинацию эритроцитов (наблюдается у 88 % всех лю­дей со II группой крови); б) агглютиноген А₂ дает мелкозернистую и замедленную агглютинацию (наблюдается у 12 % людей со II группой крови).

Было также установлено, что кровь групп А (II) и АВ(IV) содер­жит так называемые экстраагглютинины, поэтому в этих группах вы­делены подгруппы крови. Так, в подгруппе А₂ плазма часто содержит экстраагглютинин α₁ а в подгруппе А₁ изредка имеется экстраагглю-

тинин α₂ (см. табл. 17).

Таблица 17. Классификация групп крови по системе АВО

Группа крови		Подгруппа крови	Агглютиногены (в эритроцитах)		Агглютинины в сыворотке крови (плазме)		Экстраагглю-тинины
0(I)	—			—		α и β	—
А (II)	А1			А1		β	α2
	А2			А2		β	α1
В (III)	—			В		α
АВ (IV)	А1В			А1 и В		—	α2
	А2В			А2 и В		—	α1

Становится понятным, что при встрече агглютиногенов А₁ или А₂ с соответствующими экстраагглютининами (α₁ или α₂) произойдут агглю­тинация и гемолиз.

Выявленные и описанные в литературе факторы А₃, А_4-7, А₀ и др. относятся к слабым антигенам и практического значения при перелива­нии крови не имеют. Обнаруженные в эритроцитах агглютиногены М, N и ЛШ в нормальных сыворотках человека соответствующих им антител не имеют, поэтому существенных побочных реакций в процессе трансфузий крови не вызывают. Их перед переливанием крови не оп­ределяют.

Современная классификация групп крови человека по системе АВ9 (Л. Г. Богомолова, Л. К. Николаева, Д. И. Рафальсон, 1977) представ­лена в табл. 17.

Раньше считалось, что люди с I группой крови являются «универ­сальными донорами», так как их эритроциты совсем не содержат аг­глютиногенов А и В. Теперь известно, что примерно у 10 % лиц с 0(I) группой крови имеются иммунные агглютинины анти-А, агглютинирую­щие с агглютиногеном А, а также агглютинины анти-В, агглютинирую­щие с агглютиногеном В. Кроме того, доказано, что у некоторых лю­дей с 0(I) группой крови сыворотка содержит агглютинины в высоком титре, что делает опасным переливание их крови реципиентам с иной группой крови. Поэтому в настоящее время трансфузиологи не реко­мендуют переливать кровь 0(I) группы больному с другой (любой) группой в больших количествах, как это разрешалось ранее.

Становится понятным также, что прежнее понятие «универсальный реципиент», которое относилось к людям с АВ(IV) группой крови, сей­час должно быть пересмотрено, так как в этой группе есть подгруппы, содержащие в плазме экстраалглютинины α₁ и α₂. Поэтому рецепиенту с АВ(1У) группой крови не всегда без трансфузионных осложнений можно перелить кровь донора с группой крови А(II). Существует не­сколько методик определения групп крови. Методика определения групп крови системы АВО при помощи стандартных сывороток (пря­мая реакция) следующая.

1.Группу крови определяет врач или лаборант со специальной под­готовкой. Эта процедура является чрезвычайно ответственной и требует предельной внимательности и тщательности от медицинского работни­ка, который ее проводит. Результат определения группы крови немед­ленно вносят в историю болезни или в другой документ, а запись скрепляют личной (разборчивой) подписью человека, который ее оп­ределил.

2.Перед определением группы крови необходимо убедиться в при­годности стандартных сывороток: они должны быть светлыми, прозрач­ными, без примесей и осадка. Их хранят в холодильнике при темпе­ратуре от +4 до +8 °С или при комнатной температуре (в случае отсутствия холодильника), но в сухом и темном месте. Категорически запрещено использовать сыворотки из треснувших или открытых фла­кончиков или ампул, а также без этикеток. Срок годности стандартных сывороток — 4 мес.

3.Группу крови донора и реципиента определяют на белых тарелках или специальных планшетках, которые заранее маркируются, т. е. обо­значается стандартная сыворотка — 0_α,β (I), Аβ(II), В_α (III). На тарелке или пластинке надписывают также фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. Под обозначениями сывороток ка­пают по две капли стандартных сывороток (двух различных серий каж­дой группы). Получается, таким образом, 6 капель, что практически пол­ностью исключает влияние артефактов на результаты исследования (если, конечно, последнее проводится технически точно). Стандартные сыворотки наносят на тарелку (планшет) пипеткой с таким расчетом, чтобы капля получилась большой (0,1 мл), а пипетку после каждого забора сыворотки тотчас опускают в «свой» флакон (пипетки для каж­дой сыворотки строго индивидуализированы).

4.Затем прокалывают палец скарификатором одноразового" пользо­вания (допускается брать кровь из мочки уха или с помощью шприца из вены) и шесть маленьких капель крови (по 0,01 мл) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой с таким расчетом, чтобы рядом с каплей стандартной сыворотки находилась капля крови. Следователь­но, количество крови (эритроцитов) должно быть примерно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой ее смешивают.

После этого отдельными стеклянными палочками последовательно перемешивают кровь с сывороткой до тех пор, пока в пределах всех капель не появится равномерное красное окрашивание. Вслед за этим тарелку (планшету) покачивают, затем на 1—2 мин оставляют в не­подвижном состоянии и снова периодически покачивают в течение 5мин, проводя тщательное визуальное наблюдение за ходом реакции. Агглютинация начинается, как правило, в течение первых 30 с, однако этот процесс может запаздывать, поэтому наблюдение ведут до 5 мин. В те капли смеси крови с сывороткой, где была агглютинация, обя­зательно нужно добавить по 1 капле 0,85 % раствора натрия хлорида с целью снятия неспецифической агглютинации (этот раствор добав­ляют не раньше чем через Л -Мли_лосле наступления агглютинации). Окончательный результат учитывают через 5 мин после добавления раствора натрия хлорида.

Таким образом, реакция в каплях может быть положительной (на­личие агглютинации) или отрицательной (отсутствие агглютинации). При положительной реакции в капле сыворотка полностью или почти полностью обесцвечивается, и на этом фоне хорошо видны агглютина- ты, т. е. красные комочки из склеенных между собой эритроцитов. При отрицательной реакции капля сохраняет равномерный красный цвет без всяких признаков агглютинации.

5.На заключительном этапе исследования — конкретной трактовке результатов реакции во всех 6 каплях—возможность ошибки должна быть исключена. Заключение о группе крови базируется на следующих признахах.

Первая группа крови — 0(I): во всех каплях агглютинации нет, т. е. сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию (все капли остались равномерно окрашенными в красный цвет). Такая ре­акция свидетельствует об отсутствии агглютиногенов А и В в эритро­цитах исследуемой крови.

Вторая группа крови— А(II): имеется отрицательная реак­ция в сыворотке группы А(II), но положительная реакция (агглютина­ция) в сыворотках групп 0(I) и В (III),

т. е. исследуемая кровь не дает агглютинации с сывороткой своей группы,

Третья группа крови — В (III): отмечается отрицательная ре­акция (отсутствие агглютинации) в сыворотке группы В (III), однако сыворотки групп крови 0(I) и А(II) дают положительную реакцию (агглютинацию).

Четвертая группа крови — АВ(IV): сыворотки всех трех групп — 0(I), А(II), В(III)—дают положительную реакцию (во всех 6 каплях — признаки агглютинации).

Если выпадает такая общая реакция, необходимо исключить неспе­цифическую реакцию эритроцитов исследуемой крови, т. е. проводят контрольное исследование путем нанесения на тарелку (или планшет) двух капель сыворотки группы АВ(IV) разных серий, а затем в каж­дую каплю добавляют по описанной выше методике эритроциты ис­следуемой крови. Контрольное исследование подтвердит принадлеж­ность исследуемой крови к группе АВ(IV), если в обеих каплях стан­дартной сыворотки АВ(IV) реакция окажется отрицательной, т. е. агглютинация не наступит.

Следует отметить, что кроме четырех описанных выше сочетаний реакций, определяющих принадлежность крови к той или иной группе, могут изредка получаться иные комбинации. Это свидетельствует либо о непригодности (испорченности) применяемых стандартных сывороток, либо об атипичных биологических особенностях крови. В подобной си­туации необходимо определить группу крови перекрестным способом.

Методика определения групп крови системы АВО перекрестным спо­собом (двойной реакцией) следующая.

Исследование проводится на белой круглой пластинке (или тарелке), разделенной горизонтальной линией на два сектора: в верхнем секторе наносят стандартные сыворотки групп 0(I), А(II), В(III), как при ис­следовании прямой реакции (6 капель), а в нижнем секторе помещают капли стандартных эритроцитов (объем каждой капли 0,01 мл) групп 0(I), А(II) и В(III). Кровь для исследования готовят заранее: берут из вены 3 мл крови, центрифугируют ее, затем со дна пробирки на­бирают исследуемые эритроциты и наносят их по одной маленькой капле (0,01 мл) рядом с каждой каплей подготовленной стандартной сыворотки, а затем смешивают. Из этой же пробирки осторожно извле­кают сыворотку, которую в виде крупных капель (по 0,1 мл) наносят на подготовленные стандартные эритроциты. Далее процедура исследования проводится так же, как при определении групп крови при по­мощи прямой реакции. Трактовка результатов исследования облегчает­ся при пользовании табл. 18, в которой знаком (+) обозначена реак­ция агглютинации, а знаком (—) отсутствие ее.

Как видно из табл. 18, основа определения групп крови при помощи стандартных эритроцитов та же, что и при использовании прямой ре­акции. Заключение о группе крови по данньш реакции со стандарт­ными эритроцитами базируется на следующих признаках.

Первая группа крови — 0(I): сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами группы 0(I) и положительную с эритроцитами групп А(II) и В(III). Значит, в исследуемой крови содержатся агглютинины α и β, что свидетельствует о принадлежности ее к группе крови 0_α,β (I).

Вторая группа крови — А(II): при смешивании сыворотки исследуемой крови со стандартными эритроцитами отмечается отрицательная

Таблица 18. Результаты определения групп крови системы АВО перекрестным способом (двойной реакцией)

Определение групп крови по стан­дартным сывороткам, содержащим агглютинины				Определение групп крови по стандартным эритро­цитам, содержащим агглютиногены			Группа иссле- дуемой крови
αβ(1)	β(II)	α(III)	0(IV)	0(I)	А(II)	В (III)
—	—	—	—	—	+	+	0αβ (I)
+	—	+	—	—	—	+	Аβ (II)
+	+	—	—	—	+	—	Вα (III)
+	+	+	—	—	—	—	АВ0(IV)

реакция с эритроцитами групп 0(I) и А(II) и положительная реакция (агглютинация) с эритроцитами группы В(III), Это указывает на наличие в исследуемой сыворотке только агглютинина β, т. е. на принадлежность ее к группе А_β (II).

Третья группа крови — В(III): сыворотка исследуемой крови со стандартными эритроцитами групп 0(1) и В(III) дает отрицатель­ную реакцию, а с эритроцитами группы А(II)—положительную реак­цию (агглютинация). Это свидетельствует о содержании в исследуемой сыворотке только агглютинина α, т. е. о принадлежности ее к группе В_α (III).

Четвертая группа крови — АВ(IV): сыворотка исследуемой крови дает отрицательные реакции (агглютинации нет) со стандартны­ми эритроцитами всех трех групп крови (I, II, III). Это является до­казательством полного отсутствия в исследуемой крови агглютининов и принадлежности ее к АВ₀(IV) группе крови.