Билет № 6

1) Вопрос 18. Серологические реакции: реакция преципитации, реакция агглютинации, реакция связывания комплемента, реакция пассивной гемагглютинации: принципы методов, аналитические характеристики, клиническое применение.

В основе иммунологических методов лежат серологические реакции, для постановки которых используют сыворотку (serum), содержащую антитела  (основаны на взаимодействии антигенов и антител) и клеточные реакции, базирующиеся на взаимодействии антигенов (аллергенов) с Т-клетками. Серологические реакции могут быть прямыми (двухкомпонентными) — агглютинация, пассивная гемагглютинация, преципитация и др., и косвенными (трёхкомпонентными) — реакция нейтрализации (например, микроба), реакция торможения гемагглютинации. Из нескольких «простых» складываются сложные серологические реакции: бактериолиз, реакция связывания комплемента и др. Распространены также иммунофлюоресцентные методы, основанные на окраске антител (антигенами) флюорохромами. Особый вид серологических реакций — выявление иммобилизации подвижных форм микроорганизмов (например, реакция иммобилизации бледных трепонем при сифилисе). Некоторые серологические исследования проводят не в пробирке, а непосредственно в организме экспериментальных животных.

Реакции aгглютинации - простые по постановке реакции склеивания корпускулярных антигенов (микробов, эритроцитов и других клеток, а также индифферентных корпускулярных частиц с адсорбированными на них антигенами) с помощью антител. Их используют для определения антител в сыворотке крови больных, напр. при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта, Хаддлсона), туляремии и других инф. болезнях, а также для определения возбудителя, выделенного от больного. Для выявления антител к разведениям сыворотки крови больного добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум) и через определенное время при t° 35е отмечают наибольшее разведение (т. е. титр) сыворотки, при к-ром произошла агглютинация.

Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие к-рых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов на дне пробирки в виде фестончатого осадка. Реакция применяется в диагностике инф. болезней, для определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам.

Реакции преципитации - осаждение комплекса антиген-антитело, образующегося в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят в пробирке путем нанесения (наслоения) раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (реакция кольцепреципитации). Широкое распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара или агарозы - двойная иммунодиффузия по Оухтерлоню, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др. Для постановки иммунодиффузии по Оухтерлоню растопленный агаровый гель выливают тонким слоем на стеклянную пластинку и после затвердевания геля в нем вырезают лунки размером 2-3 мм. В противоположные лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, к-рые, диффундируя в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белой полосы. В реакции радиальной иммунодиффузии иммунную сыворотку вносят в агаровый гель. В лунки геля помещают раствор антигена, к-рый, диффундируя в гель, образует кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют, в частности, для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента. Иммуноэлектрофорез сочетает электрофорез и иммунопреципитацию: смесь антигенов разделяется в геле с помощью электрофореза, затем параллельно зонам электрофореза вносится иммунная сыворотка, антитела к-рой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации. При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.

Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген — антитело обнаруживают методом авторадиографии.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном (реакции связывания комплемента, радиального гемолиза и др.). Реакция связывания комплемента двухфазная; первая фаза - инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом; вторая фаза - индикаторная - определение наличия в смеси свободного комплемента путем добавления гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела против эритроцитов барана. В первой фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во второй фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во второй фазе реакции присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз. Реакция связывания комплемента применяется для диагностики инф. болезней, в частности сифилиса (см. Вассермана реакция).

2) 40. Лаб мды оценки запас Fe в орг и диагн нарй обм Fe. Ф ж:трт О2. взросл чел – 4-5 гр, 60-70%-Нв, 5-10% - миоглоб,>20% в ферритине и гемосидер,0,2% - ок-восст ферм митохй, 0,1% -трансферрина-трт ж по кров руслу.Выдел Нвй, запасной, транспортй, тканй фонды ж. Запас– ж феррна и гемосидна- в печ, селез, кост м, мыш- 30-40%. Ферн – водораств кс трехвал ж и б апоферна, содй 20% же, - лабил фракц запасго фон ж. исп д\нужд эритропоэза. Гемосид – нераств в воде б,содт большее кво ж,чем ферр – 25-30%-стабил, прочно фиксир фракц запасов ж в орг.Трансп фонд – ж, связ с трансп б трансферрм, сост1% от содержя ж в орг.Ж поступ в оргм с пищ (говяд, печ, яйц, яблоки, курага, бобовые). Всасю ж способ аскорб кта, орг кты (лимон, яблоч), ингибир всасе ж танин, высок содерж жира. За сут всасся 2-2,5 мг ж, кратковрно после сильн кровотеч м всас до 3 мг, осн колво всас в 12-перст киш и в нач части тощ киш, мал колво ж м всас во всех отд тонк киш. 2 этапа: слиз обол киш захват ж-в кр, нагружся на трансфер и дост к местам использ и в депо. Трансфер также перен ж из фондов и кл сист фагоцх мононуклв, в кх происх дестр эр, в кост м, где оно частно исп д\сза Нв, а част отклад.Наибольш колво ж, ке м присоед трансфер до полного насыщ- общ железосвяз спость сывки кр – ОЖСС. Она склад из связй, насыщй жм части («сыворот ж») и своб- ненасыщ ЖСС(ЛЖСС,НЖСС) кр.Отнош связ в трансфер ж (сывор ж) к поклю ОЖСС-коэфт (процт) насыщя трансфер жм (НЖСС). сыв ж-7,16-26,85 мкмоль/л, у муж – 8,95-28,64; НЖСС – 26,8 – 41,2; ОЖСС – 53,2 – 71,6; К(%) – около 30% (20 – 55%).Сниж колва ж наблюд при:недост поступл с пищ(длит молочно-растит диеты);плох усвоен в ЖКТ (при анацидх и гипацидх гастр, резекц жел и киш, глист инваз, профуз понос у дет);усил утили оргми и тк (берем, быстр рост оргма, повыш физ актти);потере ж (кровотеч, дисфункц метроррагх, фибромиомах,актив клетх элемв смы фагоц мононуклв);врем перераспред ж в орг (сист забол соед тк, злокач оп, хр. геп, циррозе, о. и хр. нагноит забол лег, септич сост, уремии, ИМ).Дефт ж: скрыт – содерж феррит сниж, сыворот ж – в норм; относительным – обусл врем распредм ж при воспх процх, инф забх, некрозах и опх (содерже сыворот ж сниж, резервного – не измен); абсолютным – отсут резерв ж, сниже ур сыв ж, гипогемоглобинемией.При железодефицитной анемии – сыв жо в норме или снижено, ОЖСС в норме, либо выше нормы за счет компенсаторного усиления биосза трансфер, НЖСС резко увелич вследствие уменьшя содержя сыворот ж, процент насыщя ж трансферрина уменьшен.Высок содерж ж наблюдся либо при недостат использ его в кроветвор оргх, либо при повыш поступл в оргм. У больных, страдающих сидероахрестическими анемиями, железо, поступающее в костный мозг, не используется в должной мере для эритропоэза. Недостаточное использование железа для образования ферритина наблюдается при заболеваниях печени (хр. гепатите, всех формах желтух), при которых обычно увеличено содержание сывороточного железа.Повышенное поступление железа в организм характерно для гемохроматоза. Излишки железа отклад в паренхиматозных орх в виде гемосидерина: отложение железа в печени приводит к ее циррозу, в поджелудочной железе – к сахарному диабету, в коже – к пигментации. Увеличение содержания железа в сыворотке крови (вместе с некоторым снижением ОЖСС и значительным уменьшением НЖСС) наблюдается при пернициозной анемии, апластической и гемолит анемии, повторных трансфузиях, талассемиях, дефиците вит. В₁₂ (гиперхромная анемия); нефрите, избыточной терапии препаратами железа, остром отравлении железом у детей.