Методы определения активности ферментов.

Методы определения активности ферментов могут быть под­разделены на 2 основные группы:

а) колориметрические методы, основанные на инкубации сы­воротки с субстратом в соответствующем буфере в течение опре­деленного времени, по истечении которого ферментативную ре­акцию останавливают и образующиеся продукты определяют при помощи подходящей химической реакции либо замеряют коли­чество оставшегося субстрата;

б) спектрофотометрические методы, с помощью которых не­прерывно или периодически в ходе ферментативной реакции определяют потребление субстрата или кофермента либо образо­вание продукта. Эти методы часто называются кинетическими методами, поскольку измерения каталитической активности за­висят от кинетики непрерывной регистрации реакции. Боль­шинство кинетических методов основаны на оптическом тесте Варбурга с применением пиридинкоферментов (НАД, НАДН₂)'

Ферменты преим-но локализуются внутри клеток, где и проявляется их действие. Поэтому ↑ акт-сти ферментов в плазме (сыв-ке) крови при целом ряде заб-ний связано прежде всего с ↑ проницаемости плазма­т. мембраны, мембран лизосом, некрозом клеток и вы­ходом энзимов из поврежден. органов и тканей в кровь. При этом содерж-е и акт-сть фермента в повреж­ден. органе ↓, а в сыворотке (плазме) крови - ↑. Полагают, что в рез-те общей реакции орг-ма ферменты переходят в плазму не только из поврежд. ор­гана, но также из клеток других органов и тканей, не затронутых патологическим процессом.

Единицы обозначения акт-ти ферментов.

1 катал (кат) – кол-во молей субстрата, превращ-е ферментом за 1 с. (моль/с).

Т.к акт-ть чаще всего измеряют в литре, то доб еще литр – кат/л=моль/л*с.

Эта величина слишком большая для секунд, поэтому исп-т дробные велечины: мккат, мкмоль и т.д.

Акт-ть фермента также выражают междунар. единицей – Е/л – кол-во фермента, кот кат-т превращение 1 мкмольсубстрата в 1 мин.

Для перевода:

1 мккат/л= 3,6 ммоль/(ч*л)=60Е/л

1 Е/л=0,06ммоль/(ч*л)=16,67 нмоль /(с*л)

1 ммоль/(ч*л)=0,28 мккат/л

2) 39.Лаб диагн нарй КОС. Респир и нереспир нар КОС(ацидоз, алкалоз).КОС – соотн конц водор и гидрокс ионов в биол срх. ТеорБренстедта:кта –отд протон, осе -присоед пр. У здор чел кр слабощ(рН7,35 –7,45). Н⁺ высвоб при распад ж, б и ув. Допуст колеб рН 7,4 ±0,4. Колеб м выз угнет акти фв, наруш ЦНС, ССС. КОС поддержся 3 оснми: гидрокарбонат, двузамещ фосфат, протеины (б плазмы и кл,Нв). Регся лег, почк, печ, ЖКТ, кост тк.Легкие: сохр Н₂СО₃ в кр. Накопле в орг Н₂СО₃ и повыш парц р СО₂ →раздраж дых центр→одышка→удалеСО₂с выдых воздм. Накопл щел→стимул дых центра сниж→гиповентил→сохр СО₂ и восст запасов Н₂СО_3. Поч:деятть дист отд нефр. Поч секрет прот и реабсорб гидрокарбт Na. В N рН моч 5.5 – 7,5. Печ: осущ биосз бв, окисле орг к-т до воды и СО₂, удале с желчью продв обм. ЖКТ: сохр пост водно-электрол баланс. В желуд-HCl,в поджNa2HCO3.Кост тк: сод знач к-во Ca⁺, Na⁺, K⁺, Mg⁺, к-е м обменся на катионы внекл жидти и на ионы Н.Наря КОС: (↑Н⁺ и ↓рН, при рН 6,8-смерть ), алкалоз (↓Н⁺ и ↑рН, рН8,0-смерть). Первич наря: дыхе (измен рН из-за нар рСО₂), метабол (измен НСО₃^2- плазмы). Формы по степ компенс: компенс, суб-, де-. Исследся арт или вен кр. арт кр 7,37-7,34; капилл кр 7,36-7,42; вен кр 7,32-7,38; у дет до 6 лет 7,3-7,46рСО₂. ВВ (буфер осня)- сумма концентрй всех буф оснй кр 43,7-53,6 ммоль/л. [НСО₃^-] в кр:арт22-26ммоль/л;кап:21-27 ммоль/л; вен 23-27 ммоль/л, у дет до 6 лет 20-26 ммоль/л.НО(ВЕ)-недостк (избыт) оснй, явл вторич парамм, вычислм из разницы мду актуал концй буфе оснй и их должной концй.рО₂:арт 74-108 мм рт ст; кап 65-95 мм рт ст; вен-40 мм рт ст,HbО₂sat отраж акт ур насыщя Нв кислорм: арт 92-96%; 70-95%; 54-69%. Мды оценки кисл -осн сост 1.Индикатй осн на свве слаб кт или оснй, исп в кач индикв, диссоцть при опред значх рН и изм цвет.2.Мд рН-метрии:спец полярографич электрод, 3.МД АСТРУПА:аппарат микроАструп.4. ПРЯМ ИЗМЕРЕ НАПРЯЖЯ CO₂ Исп модифю полярографичх электродов, предназн д\измерения рН. 5.ОПРЕДЕ ВЕ ПРИ ИСП МВ ПРЯМ ИЗМЕР Ph и рСО_2.Сейчас мды опред КОС-автомат анализры. Ацидоз-абсолют или отн избыт кт, т.е. вв, отдающих ионы Н (прот), по отн к оснм, присоедм их. Мб компенс (рН7,4-7,35), субкомпенс (рН7,34-7,25) и декомпенс (рН7,24 и ниже). Дыхй ацидоз-уменьш минут V дых (БФ,отек,эмфиземф,ателектазе лег,асфикс механ порядка, повр межреб мышц,оп мозга)-гиповентил и гиперкапнии(>рCO₂) арт кр-> НСО₃^– Компенс:рН кр не измен(бикарбонат и б (Нв) буфер), поч мехм выделя ионов Н+ и задержки бикарбоната натрия (NaHCO3), увел рСО2, станд бикарбта (SB), избка оснй (ВЕ). декомпенс: сниж рН плазмы< 7,35. SB и ВЕ сниж до норм знач.Метабол-накопл в тк и кр орг кт.:диабет, голод, лихорад, з пищ тр, - измен- гидрокарбта плаз кислть моч и с аммиака в моч>. Компенс- бикарбонат буфер кр, кй связ кислоты;увелич экскр почми Н+ и усил реабсорб NaHCO3,: сниж рН кр ниже 7,35, уменьше стандарт бикарбоната (SB) (4-24 ммоль/л при норме 24-28), нараст деф буфер оснй (ВЕ) (20-46 ммоль/л, норма 45-52), напре СО2 в кр (рСО2). рН< 7,2- кома.,.Задерж СО₂ при дых ацид-увел реабс бикарбоната в поч канал и компес метабол алкалозу.. ухудш деят миок, наруш кровообр, развив спазмы сос мозга и поч, гиперкалиемия. АЛКАЛОЗ: пониж конц ионов Н, знач рН повыш (рН=8,0-смерть).дых (измен рН вызв нарм рСО₂). Возник при усил выдел лёгкими со2: пневм, эмбол лег сос,гипертиреоз, кровоизл в мозг, стресс, печ недостат, искусст дых в режиме гипервентил и др.метабол (измен рН вызв измен НСО₃^-):при пилоростенозе, рвоте, злоупотребл слабитми, диуретми, первич гиперальдостеронизме, муковисцедозе, при леч ацидоза. Компенс(рН7,40-7,45), субкомпенс (рН 7,46-7,55),декомпен (7,55 и выше)