10.3. Энтерококки

Энтерококками называют молочнокислые стрептококки кишечного происхождения, т. е. они являются представителями нормальной микрофлоры кишечника человека и животного и выделяются в окружающую среду в довольно значительных количествах (в 1 г фекалий до 10 -10⁹ жизнеспособных особей), но примерно в 10 раз меньше, чем бактерий группы кишечных палочек (БГКП). В настоящее время энтерококки считаются вторым после БГКП санитарно-показательным микроорганизмом при исследовании воды водоемов, особенно проб воды колодцев, плавательных бассейнов, сточных вод, почвы, предметов обихода.

К энтерококкам относят два основных вида кокков семейства Streptococcaceae, рода Enterococcus: Ent. faecalis (биовары Ent. liquefacieus и Ent. zymogenes) и Ent. fecium (биовар Ent. bovis).

В этот род внесены другие виды, ранее относившиеся к роду Streptococcus: E.durans, E.avium, E.gallinarum, E.casseliflavus, E.malodoratus, E.cecorum, E.dispar, E.hirae, E.mundtii, E.pseudoavium, E.raffinosus, E.saccharolyticus, E.seriolicida и E.solitarius. Таким образом, род Enterococcus объединяет 16 видов микроорганизмов.

Биовар E.liquefaciens часто является обитателем молочной железы, поэтому его называют маммококком (от лат. Glandula mamma - железа молочная).

Энтерококки представляют собой диплококки овальной или круглой формы размером 0,6-2 х 0,6-2,5 мкм, иногда располагающиеся цепочками, грамположительны, спор и капсул не образуют, неподвижные. Факультативные анаэробы, хорошо размножаются на простых питательных средах, но при выращивании необходимо пользоваться средами с ингибиторами, подавляющими сопутствующую флору (бактерии группы кишечных палочек, протей и др.). Лучший рост наблюдается при добавлении в среду глюкозы, дрожжевых препаратов и других стимуляторов роста. При культивировании в жидких питательных средах образуется осадок и наблюдается диффузное помутнение. На плотных средах колонии энтерококков мелкие, серовато-голубые, прозрачные, круглые с ровными краями, выпуклые, с блестящей поверхностью. На кровяном агаре в зависимости от биовара они могут давать гемолиз (Ent. liquefaciens), изменение цвета вокруг колоний на зеленовато-бурый, так как гемоглобин превращается в метгемоглобин (Ent. faecalis). Оптимальная температура роста 37 °С, пределы - 10-45 °С.

Для определения энтерококков используется молочная среда с полимиксином по Калине. На 100 см³ 1,5 % питательного агара (МПА) вносят глюкозы - 1 г, дрожжевого диализата (экстракта, автолизата) - 2 см³. Стерилизуют при -112 °С 20 мин; рН 6,0. Перед разливом в чашки Петри добавляют на 100 см³ среды: кристаллического фиолетового - 1,25 см³ 0,01 % водного раствора; сухого вещества 2,3,5-трифенилтетразолий хлорида (ТТХ) -10 мг; стерильного обезжиренного молока - 10 см³; полимиксина -200 ед/мл.

Типичные колонии энтерококков имеют на этой среде округлую форму, ровные края, блестящую поверхность, диаметр 1,5-2 мм, красноватую окраску с зоной протеолиза на светло-голубом фоне.

Энтерококки являются хемоорганотрофами, метаболизм у них бродильного типа, разлагают глюкозу и маннит до кислоты и газа, но не обладают каталазной активностью (в отличие от других грамположительных кокков). По антигенной структуре они однородны и относятся к группе D по классификации Ленсфильд.

Отличительные признаки энтерококков от мезофильных молочнокислых стрептококков по тестам Шермана приведены в таблице 18.

Таблица 18 ‑ Дифференциация энтерококков от стрептококков

Признак	Энтерококки	Стрептококки
Температурные пределы роста, °С	10-45	10-41
Рост: при рН 9,6 в бульоне с 40 % желчи в бульоне с 6,5 % хлорида натрия в молоке с 1 % метиленового синего	+ + + +	- - - -
Терморезистентность при 60°С в течение 30 мин	+	-
Примечание: «+»- наличие признака; «-» - отсутствие признака.

Энтерококки довольно устойчивы к физическим и химическим факторам, что и было положено в основу дифференциации энтерококков от других стрептококков, входящих в нормальную микрофлору человека и вызывающих заболевание верхних дыхательных путей. Помимо устойчивости к температуре (легко переносят нагревание до 60 °С в течение 30 мин) энтерококки резистентны к действию активного хлора, некоторых антибиотиков, красителей и др.

Дифференциацию Ent. faecalis от Ent. faecium проводят по способности ферментировать глицерин: Ent. faecalis расщепляет глицерин в аэробных и анаэробных условиях, в то время как Ent. faecium только в аэробных. Для дифференциации видов энтерококков рекомендовано свыше 30 биохимических тестов: ферментация сорбита, маннита, арабинозы, редукция ТТХ, пептонизация молока и др. Необходимость разделения энтерококков на виды связана с их неодинаковой распространённостью у людей и животных. Однако в повседневной практике всех представителей энтерококков считают санитарно-показательными микроорганизмами.

Будучи термостойкими, они составляют значительную часть остаточной микрофлоры пастеризованного молока и играют определенную роль- при созревании сыра. Ent. durans за рубежом применяют в составе закваски при производстве некоторых сыров. В нашей стране проводят исследования о возможности использования Ent. faecium в составе закваски для кисломолочных продуктов. В остальных случаях энтерококки являются нежелательными микроорганизмами в молоке и молочных продуктах. Особенно технически вредными являются маммококки (Ent. liquefaciens), которые выделяют сычужный фермент, вызывают прогоркание молочных продуктов и преждевременное свертывание молока.