10. Иммунитет

Естественный иммуни­тет у человека к столбняку отсутствует. Постинфекционный иммунитет, как прави­ло, не формируется, поскольку токсигенная доза столбнячного токсина во много раз ниже дозы иммуногенной и отмечаются повторные случаи заболевания.

11. Методы лабораторной диагностики

При наличии эпидемиологического анамнеза и развитии типичной клинической картины выделение возбудителя и его идентификация могут не потребоваться. Бактерии обычно обнаруживают в месте проникновения в организм больного. Поэтому наиболее рационально исследование различного материала, взятого в месте ранения (кусочки ткани, перевязочный материал, кетгут). При подозрении на столбняк женщин после родов или аборта — выделения из матки, у новорожденных — выделения из пупочной раны. В тех случаях, когда входные ворота неизвестны необходим тщательный осмотр для выявления ссадин, царапин, катаральных и воспалительных процессов. Особое внимание обращают на старые рубцы после ранений, где возбудитель может долго сохраняться.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на среду Китта-Тароцци и инкубируют в условиях анаэробиоза при 37°С в течение 3-4 суток, наблюдая придонный рост бактерий (табл. 7). Затем делают посевы на сахарный агар в чашки Петри, в высокий столбик сахарного МПА и инкубируют в анаэробных условиях. На поверхности кровяного агара C.tetani образует нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза. Для получения чистой культуры подозрительные колонии пересевают в пробирки со средой Китта-Тароцци. Для определения токсигенности выделенной культуры используют серологические реакции (преципитации в агаровом геле и др.). Бактериологический метод в диагностике столбняка используют в качестве дополнительного метода для подтверждения диагноза, поскольку выделение C.tetani является непростой задачей.

Таблица 7. Схема бактериологического метода диагностики столбняка

1 день	1. Ориентировочная бактериоскопия (грам+ крупные палочки с терминально расположенной спорой «барабанные палочки») 2. Посев исследуемого материала на среду Китта-Тароцци (среду накопления), инкубация 3-4 суток (придонный рост бактерий)
3-4 день	1. Посев на чашку Петри с сахарным кровяным агаром и пробирку с высоким столбиком сахарного МПА. 2. Инкубация в анаэробных условиях при 37°С
4-5 день	1. Изучение культуральных свойств Сахарно-кровяный агар: нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза Высокий столбик сахарного МПА: формирует колонии в виде «чечевичек» (R-формы) или «пушинок» с плотным коричневым центром (S-формы), возможны разрывы среды из-за газообразования 2. Пересев на среду Китта-Тароцци с целью выделения чистой культуры
5-7 день	Идентификация чистой культуры по: морфологическим и тинкториальным свойствам (крупные грам+ палочки с терминально расположенной спорой «барабанные палочки») культуральным (строгие анаэробы, на сахарно-кровяном агаре нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза) биохимической активности (сахаролитическая активность отсутствует, протеолитическая активность слабая (образование индола) определение токсигенности (реакция преципитации в геле, ИФА) биопроба: реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой с учетом на белых мышах

Биопроба проводится с целью выявления столбнячного токсина. Для этого материал измельчают, добавляют двойной объем физиологического раствора для экстракции токсина и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат смешивают с антитоксической сывороткой и инкубируют в течение 40 минут. Затем одной группе животных (белые мыши) вводят полученный фильтрат, а другой группе смесь фильтрата с антитоксической сывороткой. При наличии в исследуемом материале C.tetani у животных первой группы развиваются симптомы столбняка (ригидность мышц хвоста и задних конечностей). В настоящее время биопроба практически не применяется.