2. Описать культуральные свойства колоний микобактерий на среде Левенштейна-Йенсена.

Среда Левенштейн-Йенсена содержит суспензию свежих ку­риных яиц, глицерин, аспарагин, крахмал, минеральные соли, раствор малахитовой зелени. Свертывают среду в пробирках в наклонном положении при температуре 85°С 45 минут.

Рост туберкулезных микобактерий появляется на 14-20 сутки в виде светло-кремового морщинистого или суховато-че­шуйчатого налета, крупные колонии с неровными краями гомогенной структуры, по мере роста при­обретают бородавчатый вид, напоминающий «цветную капусту».

3. Заполнить таблицу: «Факторы патогенности m.Tuberculosis».

4. Изучить и описать методы обогащения мокроты:

а) метод гомогенизации (см. в МУ по частной микробиологии с.77)

б) метод флотации (см. в МУ по частной микробиологии с. 77)

5. Изучить и описать метод микрокультивирования микобактерий по Прайсу.

Этапы микрокультивирования микобактерий туберкулеза по методу Прайса с целью выявления вирулентности возбудителя:

1. готовят мазки из осадка (центрифугата) гомогенизированной мокроты или флотационного слоя;

2. выдерживают мазки 15 минут в 2% растворе H₂S0₄ для уничтожения посторонней микрофлоры

3. промывают мазки сте­рильной дистиллированной водой;

4. несколько стекол с мазками поме­щают в широкую пробирку с жидкой синтетической питательной средой (или разведенной цитратной кровью) и инкубируют при 37°С;

5. через каждые 3-5 дней, последовательно, вынимают по одному мазку и окрашивают способом Циля-Нильсена. Обычно через 6-10 дней на стеклах наблюдается рост микроколоний, в виде «жгутов» и «кос», выявляемых при микроско­пии;

6. по окончании культивирования материал окрашивают по Цилю-Нильсену.

При проведении иммерсионной микроскопии вирулентные туберкулезные микобактерии, содержащие корд-фактор, образуют микроколонии из тесно склеенных между собой рубиново-красных палочек в виде изогнутых жгутов или кос.

Микроколонии невирулентных туберкулезных микобактерии представ­ляют собой беспорядочные рыхлые скопления бактериальных клеток.

6. Микроскопировать с масляной иммерсией мазок чистой культуры коринебактерий, окрашенный по Леффлеру, зарисовать, дать заключение.

Метод Леффлера относится к простым методам окраски и используется для выявления зерен волютина (цитоплазматических включений полифосфатов) у возбудителя дифтерии (C.diphtheriae), располагающихся по полюсам клетки. Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислым метиленовым синим в течение 5 минут. Зерна волютина обладают свойством метахромазии и более интенсивно накапливают краситель — цитоплазма бактерий окрашена в голубой цвет, зерна волютина — в темно-синиий. При иммерсионной микроскопии возбудитель имеет характерное расположение в мазке: в виде латинских букв V, Y, L или «растопыренных пальцев».

7. Изучить характер роста дифтерийной палочки на среде Клауберга. Описать культуральные свойства колоний, зарисовать.

Среда Клауберга предназначена для культивирования C.diphtheriae и состоит из питательного агара, раствора тел­лурита калия, глицерина, гемолизированной крови. Через 24 часа инкубации на плотной питательной среде вырастают матово-черные, неслившиеся плоские колонии. Че­рез 48-72 часа возможна их дифференциация на биотипы. Тип gravis образует матовые серовато-черные крупные колонии с несколько изрезан­ными краями («цветы маргаритки»), колонии типа mitis растут в виде мелких блестя­щих серовато-черных колоний с ровными краями.

8. Заполнить таблицу: «Дифференциальные признаки C. diphtheriae и некоторых других видов коринебактерий, выделяемых со слизистых дыхательныхпутей человека».