I. План самостоятельной работы:

1. Изучить и описать культуральные свойства колоний возбудителей дизентерии на средах Эндо и Левина.

На дифференциально-диагностических средах Эндо, Левина и Плоскирева, шигеллы образуют бесцветные (лактозонегативные) прозрачные круглые, слегка выпуклые, гладкие, блестящие колонии с ровными краями. Среда Эндо относится к диффиринциально-диагностическим средам. В ее состав кроме питательной основы входят лактоза и индикатор-основной фуксин. Шигеллы образуют прозрачные бесцветные колонии, т.к. не разлага­ют лактозу.

2. Поставить реакцию агглютинации на стекле с колонией, подозрительной на колонию возбудителя дизентерии с диагностическими дизентерийными сыворотками Зонне и Флекснера.

Постановка: Для постановки реакции нанесите каплю сыворотки, содержащей антитела к шигеллам Флекснера, на одно предметное стекло, а на другое предметное стекло каплю сыворотки с антителами к шигеллам Зонне. Петлю прожигать после каждой сыворотки. В обе капли внести исследуемую культуру и размешать. При положительной реакции через несколько минут в одной из сывороток происходит агглютинация (капля просветляется и в ней видны зерна агглютината).

3. Произвести посев агглютинабельной колонии на среду Ресселя (уколом и по поверхности).

Среда Ресселя представляет собой комбинированную среду. Она относится к дифференциально-диагностическим средам и со­держит кроме питательной основы 1% лактозу, 0,1% глюкозу, индикатор. Среду готовят таким образом, чтобы она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уколом в столбик и на поверхность среды. При посеве на среду Ресселя культуры шигелл, разлагается только глюкоза, поэтому столбик окрасится в желтый цвет, а скошенная часть останется зеленого цвета.

4. Произвести учёт и дать заключение рпга в серодиагностике дизентерии с эритроцитарными дизентерийными диагностикумами Зонне и Флекснера.

Ингредиенты: исследуемая сыворотка, эритроцитарные диагностикумы Зонне и Флекснера, физиологический раствор. Эритроцитарный диагностикум представляет собой взвесь сенсибилизированных антигенами из шигелл эритроцитов барана или человека.

Постановка: В лунках полистироловых пластин готовят два ряда последовательных разведений исследуемой сыворотки и вносят эритроцитарные диагностикумы Флекснера и Зонне. Пластины помещают на 2-2,5 часа в термостат при 37°С. Обязательно ставят контроль диагностикума в физиологическом растворе.

Учет результатов: положительная реакция — красный зонтик, отрицательная реакция — красная пуговка. Сопоставляют титр реакции с диагностическим титром, который составляет 1/200.

5. Произвести учёт роста возбудителя дизентерии на среде Ресселя и биохимических свойств шигелл.

Ингредиенты: Среда Ресселя, которая содержит лактозу и глюкозу и пестрый ряд Гиса, состоящий из пяти углеводов. Кроме питательной основы и углевода к среде добавлен индикатор. Исходный цвет среды розовый, при образовании кислоты цвет среды становится синим. Газообразование улавливают с помощью поплавков-коротких стеклянных трубочек, запаянных с одного конца, помещенных в питательную среду, открытым концом вниз. Образование индола и сероводорода определено с помощью индикаторных бумажек. При образовании индола индикаторная бумажка, пропитанная насы­щенным раствором щавелевой кислоты, розовеет. При образования сероводорода индикаторная бумажка, пропитанная уксуснокислым свинцом, чернеет.

Постановка: Пересев колоний со среды Ресселя на ряд Гиса и МПБ и инкубация 24 часа в термостате.

Биохимические изменения на пестром ряду с посевом шигелл

Лактоза	Глюкоза	Маннит	Мальтоза	Сахароза	МПБ
					Индол	Н2S
- (До кислоты через 2-3 дня у S.sonnei)	+ До кислоты	+ До кислоты	+ До кислоты	-	-	-

Таким образом, для шигелл ха­рактерна ферментация глюкозы, мальтозы и маннита с обра­зованием кислоты, отсутствие ферментации лактозы и сахарозы, отрицательные пробы на индол и сероводород.