10. Иммунитет

В течение заболевания формируется антимикробные антитела и антитоксины, нейтрализующие холероген. Существенна роль и местного иммунитета — образующиеся секреторные IgA препятствуют адгезии холерных вибрионов на микроворсинках эпителиоцитов тонкой кишки. Таким образом, после перенесенного заболевания остается напряженный видоспецифический иммунитет.

11. Методы лабораторной диагностики

Лабораторная диагности­ка проводится бактериологическим, серологическим и молекулярно-генетическим методами.

Основной метод диагностики — бактериологический. Материал для исследования — испражнения и рвотные массы, секционные материалы от погибших, пробы воды и смывы с объектов окружающей среды, пищевые остатки. Исследование начинают с предварительного этапа: испражнения засевают на среду обогащения — щелочную пептонную воду, при отсутствии видимого роста пересе­вают на 2-ю пептонную воду. Далее делают посев с пептонной воды на чашки с элективными средами для получения роста колоний (см. таблицу 18).

Таблица 18. Бактериологическое исследование испражнений больного при подозрении на холеру

Этапы и часы исследования	Ход исследования	Результат
Предварительный этап 4-6 часов 8-12 часов	1. Посев испражнений на 1-ю ПВ, мазок по Граму и «висячая капля» 2. Пересев с 1-ой ПВ на 2-ю ПВ, мазок и «висячая капля», реакция агглютинации на стекле с поливалентной холерной О1 сывороткой	Нежная пленка на поверхности среды, грамотрицательные вибрионы, активно подвижные, агглютинируются поливалентной холерной О1 сывороткой
1-й 12-18 часов	1. Пересев Пленки с ПВ на чашки с элективными средами для получения изолированных колоний Посев исходного материала на чашки с такими же средами	Рост гладких прозрачных колоний
2-й 18-24 часа	Изучение подозрительных колоний: мазок по Граму и «висячая капля», оксидазный тест. РА на стекле с поливалентной холерной О1 сывороткой. Пересев колоний на среду Клиглера, на лактозо-сахарозную среду по типу Ресселя для выделения чистой культуры. Посев колоний в Api 20 Е тест-систему	Грамотрицательные вибрионы, активно подвижные. Оксидаза «+». Положительная РА с поливалентной холерной О1 сывороткой. На скошенной среде lac-, sac+ колонии предварительный ответ
3-й 24-36 часов	Идентификация выделенной культуры на основании изучения: 1. морфологии — окраска по граму и «висячая капля» 2. культуральных свойств — рост на элективных средах 3. ферментативных свойств: триада Хейберга, плазмокоагулаза, фибринолизин, свертывание молока, нитрозо-индоловая проба РА с поливалентной холерной О1 сывороткой и с адсорбированными типоспецифическими сыворотками Огава и Инаба Фаготипирование с типовыми бактериофагами — классическим и эль-тор Чувствительность к антибиотикам	1. активно подвижный грамотрицательный вибрион 2. типичный рост холерного вибриона 3. триада Хейберга: man+, sac+, ara-; плазмокоагулаза+, фибринолизин+, свертывание молока+, нитрозо-индоловая проба+. РА положительная с поливалентной холерной сывороткой О1 и типоспецифическими сыворотками Антибиотикограмма 1-й окончательный ответ
4-й 36-48 часов	Учет результатов идентификации по проведенному исследованию	2-й окончательный ответ: из испражнений больного выделен возбудитель холеры…..

Одновременно засевают исходный исследуемый материал непос­редственно на чашки с теми же средами, т.е. проводят сразу 1-й этап исследования. Если на чашках вырастают колонии вибрионов, то дли­тельность бактериологического исследования сокращается на 6-8 ча­сов. Это очень важно, т.к. исследование проводится круглосуточно, по часам для наиболее быстрого получения результата.

Серологический метод диагностики проводится с сывороткой больного для выявления антител к холерогену (наиболее ранние AT), агглютининов и вибриоцидных AT. Используются реакция непрямой гемагглютинации, реакция агглютинации, реакция бактериолиза и др. Серологические методы являются дополнительными, используются для выявления переболевших, установления напряженности иммунитета у вакцинированных.

Молекулярно-генетический метод: ставится ПЦР для обнару­жения следующих генов в ДНК возбудителей top-и act-гены, кодирующие факторы адгезии и колонизации и ctxA-и сгхВ-гены (Vet -гены), кодирующие субъединицы А и В холерогена.

Ускоренные методы диагностики при холере имеют лишь ориентировочное значение. Ответ с их помощью можно получить как через 3-5 мин, так и в течение 3-5 часов. Применяются следующие методы:

• Метод иммунофлюоресценции позволяет подтвердить диагноз через 1,5 —2 часа при условии концентрации вибрионов в фека­лиях 10⁶-10⁷ мкл./мг;

• Метод иммобилизации вибрионов. Микроскопия в темном поле зрения или в фазово-контрастном микроскопе нативного мате­риала с добавлением специфической холерной О-сыворотки позволяет обнаружить холерный вибрион в течение 3-5 мин при концентрации последнего свыше 10⁵ мкл./мл;

• Реакция микроагглютинацми с нативным материалом и холер­ной агглютинирующей О-сывороткой дает ответ через 5-10 мин.; Реакция макроагглютинации с подращиванием нативного материа­ла в ПВ с холерной О-сывороткой дает результат через 3-4 часа;

12. Лечение и профилактика Специфическая профилактика. Имеются различные вакцины — корпускулярная убитая из сероваров Инаба и Огава, анатоксин холерогена, химическая бивалентная вакцина и живая для применения per os. Вакцины применяют только по эпидпоказаниям (низкая иммуногенность). Может проводиться антибиотикопрофилактика (превентивная терапия) тетрациклином и другими антибиотиками.

Вакцину вводят строго подкожно взрослым и детям (стар­ше 2 лет) для профилактики холеры двукратно с интервалом 7-10 дней. При проведении плановой массовой вакцинации прививку прово­дят в первую очередь лицам, вероятность заражения которых очень высокая: медицинские работники, участвующие в проведении работ по борьбе с холерой, работники очистных и канализационных соору­жений; лица, занятые сбором мусора, работники новостроек, пересе­ленцы и сезонные рабочие, проживающие в неудовлетворительных бы­товых условиях. Иммунитет на вакцину развивается в течение 30 дней после второго введения препарата, сохраняется до 6 месяцев, постепенно угасая. Это должно учитываться при определении сроков плановой вакцинации с учетом предполагаемого подъема заболеваемости.

Холероген-анатоксин представляет собой препарат, полученный из холерного экзотоксина, обезвреженного формалином. Использует­ся в профилактике холеры для создания антитоксического иммунитета. Вводят вакцину подкожно по эпидемическим показаниям.

Лечение: восполнение потери жидкости и электролитов, также проводят антибактериальную терапию препаратами тетрациклинового ряда.