10. Иммунитет

Естественный иммунитет против коли-инфекции обеспечивается бифидобактериями и антителами грудного материнского молока. Грудное молоко стимулирует развитие бифидофлоры. Сывороточные антитела IgM против энтеропатогенных штаммов эшерихий не проходят через плаценту, поэтому маленькие дети легко заболевают колиэнтеритом при заражении энтеропатогенными штаммами. Сывороточные антитела против дизентериеподобного эшерихиоза передаётся ребёнку от матери антителами IgG, которые проходят через плаценту, поэтому маленькие дети не восприимчивы к дизентериеподобному эшерихиозу (и к дизентерии).

Формирование местного иммунитета кишечника детей взрослых связано с секреторными SIgA, продуцируемыми лимфоидными клетками кишечника. После заболевания формируется группоспецифический слабо выраженный иммунитет. Возможны повторные заболевания.

11. Методы лабораторной диагностики

Лабораторная диагностика энтеральных эшерихиозов (кишечной коли-инфекции) проводится бактериологическим методом. Поиск патоген­ных вариантов E.coli в исследуемом материале (испражнения) чаще всего проводят на фоне обильного роста банальных E.coli, что весьма затрудняет выделение и идентификацию диареегенных E.coli. Основным подходом является выделение чистой культуры на дифференциально-диагностических средах и ее идентификация по антигенным свойствам. Ставят РА с набором поливалентных ОК (к О-и К-антигенам) сывороток, затем — адсорбированных О-сывороток и прогретыми при 100 ºС (для разрушения К-антигенов) культурами или латекс-агглютинацию.

Биохимическая дифференциация имеет дополнительное значение. Идентификация диареегенных типов возможна при выявлении специфических маркеров (энтерогеморрагические кишечные палочки не ферментируют сорбит, а серовар О157: Н7 не проявляет бета — глюкуронидазной активности).

Этапы бактериологи­ческого исследование кишечной коли-инфекции — см. таблицу 13.

Таблица 13. Бактериологическое исследование кишечной коли-инфекции

Этап исследования	Ход исследования	Результат
1-й	Посев исследуемого материала на чашку Петри со средой Эндо	На среде Эндо рост лактозоположительных колоний
2-й	Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле лак+ колоний с поливалентным препаратом ОК(ОВ)-сыворотки. Оставшуюся часть колонии, давшей положительную реакцию агглютинации засевают на скошенный агар для получения чистой культуры и в API 20 Е тест-систему или др. тест-системы	При положительной реакции агглютинации отобранной колонии с ОК(ОВ)-сывороточным препаратом делают предварительное заключение о принадлежности колонии к ЭПЭ
3-й	Идентификации чистой культуры: а) изучение морфологических свойств в мазке окрашенном по Граму;: б) учет биохимического тестирования в) серологическая идентификация; 1. постановка реакции агглютинации на стекле с каждой адсорбированной ОК-сывороткой, входящей в состав поливалентной сыворотки, давшей реакцию агглютинации; 2. постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными групповыми и факторными О-сыворотками.	а) в поле зрения видны грамотрицательные короткие палочки с закругленными концами, расположенные беспорядочно; б) биохимические свойства, характерные для E.coli: 1. культура агглютинируется ОК-коли-сывороткой, при этом определяется К-антиген; 2. культура дает положительную реакцию агглютинации с групповой, адсорбированной коли-сывороткой
4-й	Учет результатов идентификации и заключение по проведенному исследованию	Заключение: из испражнении больного выделена Е.coli. серо-группы О, типичная по свойствам.

Исследуемый материал засевают на среду Эндо, предварительно разведя его физ. раствором. Через сутки изучают колонии, выросшие на среде. Кишечные палочки вырастают на среде Эндо в виде малиново-красных колоний с металлическим блеском или без него. При росте на этой среде кишечная палочка разлагает лактозу, образуются кислые продукты, восстанавливающие фуксин из бесцветного соединения в красный, и поэтому вырастают колонии, окрашенные в малиново-красный цвет. Отбор ко­лоний патогенных кишечных палочек проводят с помощью ориентировоч­ной реакции агглютинации с диагностической ОК(ОВ) сывороткой.

При отсутствии реакции агглютинации дают отрицательный ответ. При положительной реакции агглютинации необходимо подтвердить при­надлежность выделенной культуры к роду кишечных палочек. Для этого культуру засевают на жидкие среды Гисса с лактозой, глюкозой, мальтозой, маннитом, сахарозой, в пробирку с МПБ для обнаружения индола и серово­дорода, определяют подвижность.

Биохимические изменения на пестром ряду с посевом кишечной палочки

КГ — ферментация углевода с образованием кислоты и газа

Лактоза	Глюкоза	Маннит	Мальтоза	Сахароза	МПБ
					Индол	Сероводород
КГ	КГ	КГ	КГ	-	+	-

Для окончательной идентификации выделенных эшерихий ставят развернутую реакцию агглютинации с типовой коли-ОК(ОВ)-сывороткой. Реакцию ставят с живой культурой для установления К-антигена и с гретой культурой для установления О-антигена. По результатам пестрого ряда и развернутой реакции агглютина­ции может быть дан окончательный ответ.

Серологическая диагностика при кишечных инфекциях использует­ся для подтверждения этиологического значения выделенных эшерихий в качестве возбудителя заболевания, в научно-исследовательских целях для изучения патогенеза и иммунитета кишечных заболеваний.

Основана она на обнаружении антител в сыворотке крови. Обна­руживают О-антитела в реакции агглютинации, используя в качестве антигена культуру, выделенную от больного и кипяченую в течение 2 часов. Положительная реакция проявляется непостоянно, титр антител невысокий — ниже 1:100. В-антитела не обнаруживаются.

Можно использовать реакцию пассивной гемагглютинации, которая более чувствительна. В качестве диагностикума используют эритроци­ты барана, сенсибилизированные смывом 48-часовой культуры, кипяче­ной 2 часа. Следовательно, в РПГА также выявляют только О-антитела. Эта реакция позволяет отличить больных от людей, выделяющих энтеропатогенные кишечные палочки без клинических проявлений болезни, у последних антитела не обнаруживаются.

Ускоренные методы лабораторной диагностики. Классическое бактериологическое исследование длится 4-5 дней. Это не всегда устраивает и клиницистов и эпидемиологов, по­этому прилагается много усилий, чтобы сократить время исследова­ния и ускорить ответ лаборатории. Для решения этой проблемы пред­ложено использовать наиболее рациональные питательные среды, сокра­щать интервалы между исследованиями, а также применять методы, ос­нованные на определении антигенной структуры кишечных палочек. На­иболее чувствительным и быстрым методом является метод иммунофлюоресценции, основанный на обнаружении специфического антигена кишеч­ных палочек в исследуемом материала с помощью флюоресцирующих антител.