Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых неспорообразующими анаэробами

В качестве исследуемого материала используют гной из очага инфекции. На первом этапе проводят ориентировочную бактериоскопию: готовят мазок из исследуемого материала, окрашивают по Граму, микроскопируют с масляной иммерсией и изучают морфологические и тинкториальные свойства, которые позволяют поставить предварительный диагноз и определить дальнейшую тактику.

Посев исследуемого материала производят на специальные питательные среды с добавлением крови, гемина, витамина К (тиогликолевая среда, Шедлер агар и др.) и культивируют в условиях анаэробиоза при температуре 37°С в течение 48 часов (табл. 10). Далее изучают культуральные свойства, делают мазки, изучают морфологические и тинкториальные свойства, которые позволяют произвести идентификацию до рода. С целью получения чистой культуры производят пересев материала с отдельных колоний и культивирование в условиях анаэробиоза. Через 24-48 часов оценивается чистота выделенной культуры макро-(визуально) и микроскопически (изучение морфологических и тинкториальных свойств). С целью идентификации до вида производят изучение биохимических свойств выделенных чистых культур с помощью тест-систем Api 20A и определение чувствительности к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом.

Таблица 10. Схема диагностики инфекций, вызываемых неспорообразующими анаэробами

I. План практической работы

1. Зарисовать по таблице возбудителей газовой анаэробной инфекции, столбняка и ботулизма, окрашенных по Граму и Ожешко, описать морфологические и тинкториальные свойства.

Одним из основных возбудителей газовой анаэробной инфекции является Clostridium perfringens: короткие, крупные палочки с обрубленными концами (0,6-1,0х1,0-1,5 мкм); грамположительны; образуют крупные овальные споры, расположенные центрально (у С. рerfringens типа А — субтерминально); В тканях палочки образуют капсулу.

Clostridium tetani (возбудитель столбняка): грамположительные палочки с закругленными концами длиной 4-8 мкм и толщиной 0,3-0,8 мкм, расположенные одиночно или цепочками; споры круглые, реже овальные, расположены терминально; диаметр спор в 2-3 раза превышает толщину бактерий, придавая им форму «барабанных палочек».

Clostridium botulinum (возбудитель ботулизма): грамположительные палочки с закругленными концами длиной 4-8 мкм и толщиной 0,6-0,8 мкм, в мазках расположены одиночно или в виде коротких цепочек; подвижны, при неблагоприятных условиях окружающей среды образуют субтерминально расположенные эндоспоры, придающие бактериям форму «теннисных ракеток».

При окраске по Граму споры, имеющие толстую многослойную оболочку не окрашиваются и остаются в виде бесцветных зон овальной и округлой формы с соответствующим расположением (терминальное, субтерминальное, центральное), вегетативная форма окрашивается в фиолетовый цвет (клостридии — грамположительные бактерии).

Метод Ожешко относится к сложным и специальным (для выявления спор) методам окраски. Споры бактерий будут окрашиваться в красный цвет (как кислотоустойчивые бактерии), а вегетативные формы в синий цвет (как некислотоустойчивые бактерии).